Metoda e kërkimit të shkëmbinjve. Reagimi i imunofluoreshencës. Mekanizmi, komponentët, aplikimi. Si të interpretohen rezultatet e studimeve serologjike

Kjo metodë përdor fenomenin e luminescencës.

Thelbi i dukurisë së lumineshencës qëndron në faktin se me përthithjen lloje te ndryshme energjia (drita, elektrike, etj.) nga molekulat e substancave të caktuara, atomet e tyre kalojnë në gjendje të ngacmuar dhe më pas, duke u kthyer në gjendjen e tyre fillestare, lëshojnë energjinë e përthithur në formën e rrezatimit të dritës.

Në RIF, luminescenca manifestohet në formën e fluoreshencës - kjo është një shkëlqim që ndodh në momentin e rrezatimit me dritë emocionuese dhe ndalon menjëherë pasi të përfundojë.

Shumë substanca dhe mikroorganizma të gjallë kanë fluoreshencën e tyre (e ashtuquajtura primare), por intensiteti i saj është shumë i ulët. Substancat që kanë fluoreshencë primare intensive dhe përdoren për të dhënë veti fluoreshente substancave jofluoreshente quhen fluorokrome. Një fluoreshencë e tillë e induktuar quhet dytësore.

Për të ngacmuar fluoreshencën në mikroskopinë fluoreshente, përdoret më shpesh pjesa ultravjollcë ose blu-vjollcë e spektrit (gjatësia vale 300-460 nm). Për këto qëllime, laboratorët kanë mikroskop luminescent të modeleve të ndryshme - ML-1-ML-4, "Lumam".

Në praktikën virologjike përdoren dy metoda kryesore të mikroskopisë fluoreshente: fluorokromizimi dhe antitrupat fluoreshente (ose RIF).

Fluorokromizimi- ky është trajtimi i preparateve me fluorokrom për të rritur forcën dhe kontrastin e lumineshencës së tyre. Me interes më të madh është portokallia fluorokrom akridine, e cila shkakton fluoreshencë polikromatike të acideve nukleike. Pra, kur preparatet trajtohen me këtë fluorokrom, acidi deoksiribonukleik fluorescon me shkëlqim në të gjelbër, dhe acidi ribonukleik - i kuq rubin.

Metoda RIF konsiston në faktin se antitrupat e lidhur me një fluorokrom ruajnë aftësinë për të hyrë në një marrëdhënie specifike me një antigjen homolog. Kompleksi antigjen + antitrup që rezulton, për shkak të pranisë së fluorokromit në të, zbulohet nën një mikroskop fluoreshent nga një shkëlqim karakteristik.

Për të marrë antitrupa, përdoren serume hiperimune shumë aktive, nga të cilat izolohen antitrupat dhe etiketohen me fluorokrom. Fluorokromet më të përdorura janë izotiocianati FITC-fluorescein (drita jeshile) dhe PCX-rodamin sulfoklorur (drita e kuqe). Një antitrup i etiketuar me një fluorokrom quhet një konjugat.

Mënyra e përgatitjes dhe ngjyrosjes së preparateve është si më poshtë:

përgatitni njolla, printime nga organet ose në rrëshqitjet e kopertinës - një kulturë qelizore e infektuar në rrëshqitjet e qelqit; Mund të përdoren gjithashtu histoseksione;
përgatitjet thahen në ajër dhe fiksohen në aceton të ftohur në temperaturën e dhomës ose në minus 15 °C (nga 15 minuta në 4-16 orë);
ngjyroset me metodë direkte ose indirekte; mbani shënime nën një mikroskop fluoreshent sipas intensitetit të shkëlqimit, të vlerësuar në kryqe.

Paralelisht, përgatitni dhe njollosni preparate nga një kafshë e shëndetshme - kontroll.

Ekzistojnë dy metoda kryesore të aplikimit të antitrupave fluoreshente: direkte dhe indirekte.

Metoda e drejtpërdrejtë (me një hap). Një konjugat (serum fluoreshent ndaj virusit të dyshuar) aplikohet në preparatin fiks, i inkubuar për 30 minuta në një temperaturë prej 37 ° C në një dhomë të lagësht. Pastaj ilaçi lahet nga konjugati i palidhur me kripë (pH 7.2 - 7.5), thahet në ajër, aplikohet vaj jo fluoreshent dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

Metoda e drejtpërdrejtë lejon zbulimin dhe identifikimin e antigjenit. Për ta bërë këtë, ju duhet të keni një serum fluoreshente për çdo virus.

Metoda indirekte (me dy faza). Një serum i paetiketuar që përmban antitrupa ndaj virusit të dyshuar aplikohet në preparatin fiks, inkubohet për 30 minuta në 37 °C, antitrupat e palidhur lahen. Një serum fluoreshent kundër specieve aplikohet në preparat, që korrespondon me llojin e kafshës që prodhon antitrupa homologë antiviralë dhe inkubohet për 30 minuta në 37 °C. Pastaj ilaçi lahet nga antitrupat e etiketuar të palidhura, thahet në ajër, aplikohet vaj jo fluoreshent dhe ekzaminohet nën një mikroskop fluoreshent.

Serumet kundër llojeve merren duke imunizuar kafshët me globulina të atyre specieve që shërbejnë si prodhues të antitrupave antiviralë. Pra, nëse antitrupat antivirale janë marrë te lepujt, atëherë përdoret serumi fluoreshent kundër lepurit.

Metoda indirekte lejon jo vetëm zbulimin dhe identifikimin e antigjenit, por edhe zbulimin dhe përcaktimin e titrit të antitrupave. Për më tepër, kjo metodë mund të zbulojë antigjene të viruseve të ndryshëm me një serum të vetëm të etiketuar, pasi bazohet në përdorimin e serumeve anti-specie. Më shpesh përdoren serume kundër lepurit, kundër gjedhit, kundër kuajve dhe serumeve kundër globulinave të derrit të gini.

Janë zhvilluar disa modifikime të metodës indirekte. Metoda që përdor komplementin meriton vëmendjen më të madhe. Metoda konsiston në aplikimin e serumit specifik të inaktivuar jo-fluoreshent dhe komplementit të derrit gini në preparatin fiks, mbajtjen e tij për 30 minuta në 37 °C, larjen e tij dhe zbulimin e kompleksit antigjen + antitrup + komplement, duke aplikuar serum fluoreshent anti-komplementar. , duke e mbajtur për 30 minuta në 37 °C , larë, tharë në ajër dhe ekzaminuar nën një mikroskop fluoreshent.

Përparësitë e RIF: specifikë dhe ndjeshmëri e lartë; lehtësia e teknikës së vendosjes; kërkon një numër minimal komponentësh. Kjo është një metodë diagnostike e shprehur, pasi mund të merrni një përgjigje brenda pak orësh. Disavantazhet përfshijnë subjektivitetin në vlerësimin e intensitetit të lumineshencës dhe, për fat të keq, ndonjëherë serumet fluoreshente janë të cilësisë së dobët. Aktualisht, RIF përdoret gjerësisht në diagnostikimin e sëmundjeve virale të kafshëve.

Nëse gjeni një gabim, ju lutemi theksoni një pjesë të tekstit dhe klikoni Ctrl+Enter.

Testi i imunofluoreshencës (IF) është një test serologjik që zbulon antitrupa ndaj antigjeneve të njohura. Metoda konsiston në mikroskopinë e njollave me njolla.

Ky reagim përdoret në imunologji, virologji dhe mikrobiologji. Kjo ju lejon të përcaktoni praninë e viruseve, baktereve, kërpudhave, protozoarëve dhe ICC. RIF përdoret gjerësisht në praktikën diagnostike për zbulimin e antigjeneve virale dhe bakteriale në materialin infektiv. Metoda bazohet në aftësinë e fluorokromit për t'u lidhur me proteinat pa cenuar specifikën e tyre imunologjike. Përdoret kryesisht në diagnostikimin e infeksioneve të traktit urinar.

Ekzistojnë metodat e mëposhtme të kryerjes së reaksionit të imunofluoreshencës: direkte, indirekte, me komplement. Metoda e drejtpërdrejtë konsiston në ngjyrosjen e materialit me fluorokrom. Për shkak të aftësisë së antigjeneve të mikrobeve ose indeve për të ndriçuar në rrezet UV të një mikroskopi fluoreshent, ato përcaktohen si qeliza me një kufi të gjelbër me ngjyra të ndezura.

Metoda indirekte konsiston në përcaktimin e kompleksit antigjen+antitrup. Për ta bërë këtë, materiali eksperimental trajtohet me antitrupa të serumit antimikrobik të lepurit të destinuar për diagnostikim. Pasi antitrupat lidhen me mikrobet, ato ndahen nga ato të palidhura dhe trajtohen me serum anti-lepuri të etiketuar me fluorokrom. Pas kësaj, mikroskop kompleks + antitrupa animikrobikë + antitrupa kundër lepurit përcaktohet duke përdorur një mikroskop ultravjollcë në të njëjtën mënyrë si në metodën direkte.

Reaksioni i imunofluoreshencës është i domosdoshëm në diagnostikimin e sifilizit. Nën ndikimin e fluorokromit, agjenti shkaktar i sifilisit përcaktohet si një qelizë me një kufi të verdhë-jeshile. Mungesa e shkëlqimit do të thotë që pacienti nuk është i infektuar me sifiliz. Kjo analizë shpesh përshkruhet me një reagim pozitiv Wasserman. Kjo metodë është shumë efektive në diagnostikim, pasi ju lejon të identifikoni patogjenin fazat e hershme sëmundjet.

Përveç faktit që RIF ju lejon të diagnostikoni sifilizin, përdoret gjithashtu për të përcaktuar praninë e patogjenëve si klamidia, mykoplazma, trichomonas, si dhe patogjenët e gonorresë dhe herpesit gjenital.

Për analiza, përdoren njolla ose gjaku venoz. Procedura për marrjen e njollosjes është plotësisht pa dhimbje dhe nuk paraqet ndonjë rrezik. Përgatituni për këtë analizë. Dymbëdhjetë orë para tij, nuk rekomandohet përdorimi i produkteve higjienike, të tilla si pak ose xhel. Gjithashtu, ndonjëherë, sipas dëshmisë së mjekut, kryhet një provokim. Për ta bërë këtë, ata rekomandojnë marrjen e ushqimit pikant ose alkoolit, ose kryerjen e një injeksioni të një lënde provokuese, të tilla si gonovaksina ose pirogenal. Përveç kësaj, intervali ndërmjet barna antibakteriale dhe dorëzimi i analizës duhet të jetë së paku katërmbëdhjetë ditë.

Gjatë vlerësimit të rezultateve, duhet të merret parasysh fakti se luminescenca vërehet jo vetëm në bakteret e gjalla, por edhe në ato të vdekura, veçanërisht për klamidia. Pas një kursi antibiotikësh, qelizat e vdekura të klamidias gjithashtu shkëlqejnë.

Me përgatitjen e duhur të pacientit dhe respektimin e teknikës së marrjes së një testi, kjo analizë ju lejon të identifikoni sëmundjet në fazat e hershme, gjë që është shumë e rëndësishme për trajtim në kohë. Aspektet pozitive të kësaj metode janë koha e shkurtër për të marrë rezultatin, lehtësia e zbatimit dhe kostoja e ulët e analizës.

Disavantazhet përfshijnë faktin se një sasi mjaft e madhe e materialit në studim kërkohet për analizë. Për më tepër, vetëm një specialist me përvojë mund të vlerësojë rezultatet.

I zbuluar në vitin 1942 nga Koons, reaksioni i imunofluoreshencës nuk është një metodë e re kërkimore. Megjithatë, ardhja e teknologjive të hibridomës, të cilat bënë të mundur marrjen e antitrupave monoklonale, i dhanë një "jetë të dytë" këtij reagimi, pasi përdorimi i tyre bëri të mundur rritjen e ndjeshmërisë së këtij reaksioni dhe specifikën e tij me disa herë.

Dhe sot do t'ju tregojmë në detaje për reagimin e imunofluoreshencës direkte dhe indirekte (RIF) si një metodë diagnostike Koons për burrat dhe gratë e rritur gjatë shtatzënisë.

Çfarë është një reaksion imunofluoreshence

Duke përfaqësuar një mundësi të shkëlqyer për të marrë shpejt një diagnozë të saktë, reagimi i imunofluoreshencës ju lejon të përcaktoni praninë e agjentit shkaktar në materialin patologjik. Për këtë, përdoret një njollë nga një material që përpunohet posaçërisht me FITC të etiketuar (izotiocianat fluorescein) dhe studiohet si një analizë heterogjene.

Për të marrë rezultatin, përdoret një mikroskop fluoreshent, në sistemin e tij optik ka një grup filtrash drite për të siguruar përgatitjen me dritë blu-vjollcë ose ultravjollcë që ka një gjatësi vale të caktuar. Kjo gjendje lejon që fluorokromi të shkëlqejë në një gamë të caktuar. Studiuesi vlerëson vetitë e shkëlqimit, natyrën e tij, madhësinë e objekteve dhe pozicionin e tyre relativ.

Kujt i është caktuar

Kryerja e një reaksioni imunofluoreshence mund të përshkruhet në diagnostikimin e shumë sëmundjeve virale. Në veçanti, është përshkruar për një ekzaminim gjithëpërfshirës për të identifikuar faktorët e mëposhtëm:

prania e një virusi në trup;
infeksion nga salmonela;
ekzistenca e disa antigjeneve në trup;
zbulohet probabiliteti i infektimit të trupit me klamidia, mikoplazma dhe mikroorganizma të tjerë që kanë aftësinë të iniciojnë sëmundje virale njerëzore;
diagnoza e sëmundjeve virale te kafshët.

Indikacionet e listuara lejojnë përdorimin e reaksionit imunofluoreshent kur zbulohet tek njerëzit dhe kafshët. sëmundjet virale natyrë të ndryshme.

Objektivat e

Meqenëse kjo metodë diagnostikuese ka shumë përparësi, të cilat përfshijnë efikasitetin e saj të lartë, shpejtësinë e kryerjes dhe marrjes së rezultateve, si dhe mungesën e një numri të madh kundërindikacionesh, përdoret për të përcaktuar praninë në trup. infeksionet virale. Prandaj, kjo analizë mund të përshkruhet si për vendosjen ashtu edhe për sqarimin e diagnozës, në bazë të së cilës përshkruhet një regjim trajtimi.

Procedura nuk shkakton parehati, për të është e nevojshme të merret material për analizë, i cili merret nga çdo lëng trupor: pështymë, sputum, gërvishtje nga sipërfaqja e mukozave. Mund të merret edhe gjak për analiza. Frekuenca e reaksionit të imunofluoreshencës përshkruhet nga mjeku që merr pjesë, i cili duhet të marrë të dhëna për dinamikën e proceseve që ndodhin në trup.

Meqenëse kjo analizë nuk dëmton trupin dhe mirëqenien e përgjithshme të një personi, mund të përshkruhet nëse është e nevojshme.

Llojet e një procedure të tillë

Sot, përdoren disa lloje të kësaj analize, secila prej të cilave ka një numër karakteristikash specifike dhe ju lejon të merrni pamjen më të detajuar të proceseve që ndodhin në trup.

Llojet e reaksioneve të imunofluoreshencës përfshijnë:

- një nga llojet më të zhvilluara të diagnostikimit, kjo analizë bën të mundur marrjen e të dhënave sasiore pa përdorimin e hollimeve serike. Duke përdorur matjet e marra të densitetit optik të lëngut, është e mundur të përcaktohet me saktësi niveli i përqendrimit të komponentit të dëshiruar. Mundësitë e gjera të këtij lloji analize përdoren kur për zbatimin e tij përdoren antitrupa monoklonale, gjë që bën të mundur përcaktimin e fazës së procesit infektiv, ashpërsinë e tij;
Diagnostifikimi i ADN-së- kjo metodë bazohet në lidhjen plotësuese të nukleotideve, për të cilat mund të përdoren lëngje si pështyma, gjaku, lëngu cerebrospinal, urina, pështyma, ekzemplarët e biopsisë dhe gjaku. Kjo metodë zbulon në mënyrë më efektive praninë e papillomaviruseve në trup, megjithatë, shumë sisteme moderne të testimit herë pas here mund të japin rezultate false pozitive dhe negative. Arsyeja për to mund të jetë kontaminimi i mostrave të lëngjeve për analizën e ADN-së specifike, prania e të cilave mund të ketë karakter të folezuar ose total;
imunokromatografia- Specifikimi i kësaj metode për përcaktimin e pranisë së një mjedisi patologjik dhe viruseve në trup është përdorimi i antitrupave të etiketuar gjatë reagimit. Kjo metodë diagnostike përdoret për të identifikuar dhe shkallën e aktivitetit të procesit të infektimit me streptokoket e grupit A, si dhe klamidia e llojeve të mëposhtme: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia nga Oxoid. Duke zotëruar ndjeshmërinë më të lartë, sistemet e testimit që bazohen në këtë metodologji kërkimore. zakonisht përdoren si test orientues.

Varietetet e listuara kanë veçori të sjelljes dhe karakteristika specifike të rezultateve, megjithatë, të gjitha synojnë marrjen e të dhënave për praninë e mikroorganizmave dhe viruseve patologjike në trup, si dhe për shkallën e riprodhimit dhe aktivitetit të tyre.

Indikacionet për kryerjen

Një reaksion imunofluoreshence mund të përshkruhet për të zbuluar çdo lloj mjedisi patologjik në trup.

Gjatë këtij lloj diagnoze përcaktohen klamidia, trikomonada, gonokoket dhe, si dhe lamblia e të gjitha llojeve. dhe, dhe sëmundje të tjera gjithashtu kërkojnë RIF. Caktimi i mjekut për zbatimin e tij është i detyrueshëm.

Kundërindikimet për mbajtjen

Meqenëse ky reagim kërkon çdo lloj lëngu trupor si material provë, marrja e tyre zakonisht nuk është e vështirë dhe nuk ka kundërindikacione për kryerjen e një reaksioni imunofluoreshence. Megjithatë, gjatë shtatzënisë dhe te fëmijët nën 6 muajsh, marrja e mostrave për kërkime kryhet me masat maksimale.

Mungesa e kundërindikacioneve lejon që kjo lloj diagnoze të kryhet kur mjeku u përshkruan të gjithë pacientëve. Siguria e tij garantohet nga përdorimi i një instrumenti të dezinfektuar dhe shiringave të disponueshme.

Përgatitja për procedurën

Nuk ka veçori të marrjes së materialit për këtë analizë. Gjaku për të merret me stomak bosh, në mënyrë që të mos ketë përmbajtje të lartë substancash që mund të ndryshojnë dëshminë e vërtetë dhe të japin një pamje të rreme.

Si është marrja e mostrave

Meqenëse nuk kërkohet përgatitje e veçantë për analizën, përjashtohet vetëm ngrënia 12 orë përpara dhe mungesa e përdorimit. barna, materiali i provës merret si një proces normal për marrjen e lëngjeve trupore për analizë.

Ndjesitë subjektive gjatë procedurës mund të ndryshojnë në varësi të ndjeshmërisë.

Deshifrimi i rezultateve

Përdorimi i sistemeve moderne të testimit ju lejon të merrni rezultatet më të sakta të analizës. Të dhënat e mëposhtme përdoren për të deshifruar rezultatin:

shkalla e intensitetit të fluoreshencës;
hije fluoreshence;
natyra periferike e procesit të ndezur të objektit;
karakteristikat e morfologjisë, vendndodhjen e patogjenit në njollën e marrë të materialit të provës dhe dimensionet e tij.

Gjatë studimit të objekteve që janë të mëdha (për shembull, gardenerella, Trichomonas, qelizat që tashmë janë të prekura nga viruset), kriteret e listuara më sipër bëjnë të mundur marrjen e rezultateve më të besueshme. Megjithatë, trupat elementare të mikoplazmës dhe klamidias kanë përmasa që shtrihen në kufirin e rezolucionit të një mikroskopi fluoreshent, gjë që e bën të vështirë.

e bën të vështirë marrjen e një rezultati të saktë, pasi shkëlqimi periferik humbet një pjesë të intensitetit të tij. Kriteret e mbetura nuk janë më të mjaftueshme për identifikimin e saktë të mikroorganizmave të studiuar. Për këtë arsye, specialistëve që kryejnë këtë lloj kërkimi u vendosen kërkesa të veçanta: niveli i kualifikimeve të tyre duhet të jetë i mjaftueshëm për të vepruar me të dhënat e disponueshme.

Për këtë arsye, vetëm një mjek me nivelin e duhur të kualifikimit mund të merret me dekodimin e analizave të marra. Lexoni për çmimin e hulumtimit RIF më poshtë.

kosto mesatare

Çmimi i një testi imunofluoreshence varet nga vendndodhja dhe niveli i testit. institucioni mjekësor dhe si dhe kualifikimet e personit që kryen analizën. Sot, kostoja varion nga 1280 në 2160 rubla.

Videoja e mëposhtme do t'ju tregojë më shumë rreth reaksioneve imunologjike:

Metoda imunofluoreshente (RIF, reagimi imunofluoreshent, reagimi Koons) është një metodë për zbulimin e antigjeneve specifike duke përdorur antitrupa të konjuguar me fluorokrom. Ka ndjeshmëri dhe specifikë të lartë.

Përdoret për diagnostikim të shprehur sëmundjet infektive(identifikimi i patogjenit në materialin e provës), si dhe për përcaktimin e antitrupave dhe receptorëve sipërfaqësor dhe shënuesve të leukociteve (imunofenotipizimi) dhe qelizave të tjera.

Zbulimi i antigjeneve bakteriale dhe virale në materialet infektive, indet e kafshëve dhe kulturat qelizore duke përdorur antitrupa fluoreshente (serume) është marrë aplikim të gjerë në praktikën diagnostike. Përgatitja e serumeve fluoreshente bazohet në aftësinë e disa fluorokromeve (për shembull, izotiocianati i fluoresceinës) për të hyrë në një lidhje kimike me proteinat e serumit pa cenuar specifikën e tyre imunologjike.

Ekzistojnë tre lloje të metodave: direkte, indirekte, me plotësim. Metoda e drejtpërdrejtë RIF bazohet në faktin se antigjenet e indeve ose mikrobet e trajtuara me serum imunitar me antitrupa të etiketuar me fluorokrome janë në gjendje të shkëlqejnë në rrezet UV të një mikroskopi fluoreshent. Bakteret në një njollë, të trajtuar me një serum të tillë lumineshent, shkëlqejnë përgjatë periferisë së qelizës në formën e një kufiri të gjelbër.

Metoda indirekte RIF konsiston në identifikimin e kompleksit antigjen-antitrup duke përdorur serumin antiglobulin (anti-antitrup) të etiketuar me fluorokrom. Për ta bërë këtë, njollat nga një pezullim i mikrobeve trajtohen me antitrupa të lepurit antimikrobik serum diagnostikues. Pastaj antitrupat që nuk janë të lidhur nga antigjenet mikrobiale lahen dhe antitrupat e mbetur në mikrobe zbulohen duke trajtuar njollën me serum antiglobulin (anti-lepuri) të etiketuar me fluorokrome. Si rezultat, formohet një mikrob kompleks + antitrupa antimikrobikë lepuri + antitrupa kundër lepurit të etiketuar me fluorokrom. Ky kompleks vërehet në një mikroskop fluoreshent, si në metodën direkte.

Mekanizmi. Në një rrëshqitje xhami, përgatitet një njollë nga materiali i provës, fiksohet në flakë dhe trajtohet me serum lepuri imunitar që përmban antitrupa kundër antigjeneve patogjene. Për të formuar një kompleks antigjen-antitrup, preparati vendoset në një dhomë të lagësht dhe inkubohet në 37 °C për 15 minuta, pas së cilës lahet tërësisht me zgjidhje izotonike të klorurit të natriumit për të hequr antitrupat që nuk lidhen me antigjenin. Më pas, një serum antiglobulin fluoreshent kundër globulinave të lepurit aplikohet në preparat, inkubohet për 15 minuta në 37 ° C dhe më pas preparati lahet plotësisht me tretësirë izotonike të klorurit të natriumit. Si rezultat i lidhjes së serumit të antiglobulinës fluoreshente me antitrupa specifikë të fiksuar në antigjen, formohen komplekse ndriçuese antigjen-antitrup, të cilat zbulohen me mikroskopi fluoreshente.

22. Analiza e imunitetit të enzimës- metoda imunologjike laboratorike e cilësore ose kuantifikimi komponime të ndryshme, makromolekula, viruse etj., e cila bazohet në një reaksion specifik antigjen-antitrup. Zbulimi i kompleksit të formuar kryhet duke përdorur enzimën si etiketë për regjistrimin e sinjalit.

Klasifikimi:

Konkurruese (përbërja e analizuar dhe analoge e tij janë njëkohësisht të pranishme në sistem)

Jo konkurrues (Nëse vetëm përbërësi i analizuar dhe vendet përkatëse të tij lidhëse (antigjen dhe antitrupa specifikë) janë të pranishëm në sistem)

Direkte dhe indirekte

1. Serumi që përmban një përzierje am inkubohet me anti, i fiksuar në një substrat të fortë.

2.at që nuk lidhen ag hiqen me larje të përsëritur.

3. shtoni antiserum të etiketuar me enzimë në antitrupat që lidhin antigjenin

4.përcaktoni sasinë e enzimës së markerit të lidhur me në

Indirekt:

Serum pozitiv

1. Antitrupat specifikë në serumin e studiuar lidhin antigjenin e fiksuar në një substrat të ngurtë

2. antitrupat specifikë të etiketuar me enzimë nuk ndërveprojnë me ag të lidhur - përmbajtja e markerit në substrat është e ulët

Serum ab-negativ

1. Antitrupat jospecifik në serumin e testit nuk lidhin antigjenin e fiksuar në një substrat të ngurtë

2. Antitrupat specifikë të etiketuar me enzimën ndërveprojnë, me ag të fiksuar - përmbajtja e markerit është e lartë

Më e zakonshme është ifa e fazës së ngurtë, në të cilën një nga komponentët e përgjigjes imune (antigjen ose antitrup) thithet në një bartës të ngurtë. Mikropanelet e polistirenit përdoren si një bartës i ngurtë. Kur përcaktohen antitrupat, serumi i gjakut i etiketuar me enzimë dhe një përzierje e tretësirave për enzimën dhe kromogjenin shtohen në mënyrë sekuenciale në puset me antigjenin e absorbuar. Çdo herë pas shtimit të komponentit tjetër, reagentët e palidhur hiqen nga puset duke larë tërësisht. Me një rezultat pozitiv, ngjyra e zgjidhjes së kromogjenit ndryshon.

Një bartës i fazës së ngurtë mund të sensibilizohet jo vetëm me një antigjen, por edhe me një antitrup. Më pas, antigjeni i dëshiruar futet në puset me antitrupa të adsorbuar, shtohet serumi imunitar kundër antigjenit të etiketuar me enzimë dhe më pas shtohet përzierja e tretësirave të substratit për enzimën dhe kromogjenin.

Aplikacion: për diagnostikimin e sëmundjeve të shkaktuara nga patogjenët viralë dhe bakterialë.

23. Reaksioni serologjik- një reaksion me të cilin hulumtohet reaksioni i një antigjeni (mikrobi, virusi, proteina e huaj) me antitrupat e serumit të gjakut.

Studimet serologjike- këto janë metoda për studimin e disa antitrupave ose antigjeneve në serumin e gjakut të pacientëve, bazuar në reaksionet imune. Me ndihmën e tyre, zbulohen edhe antigjenet e mikrobeve ose indeve për t'i identifikuar ato.

Zbulimi në serumin e gjakut të pacientit i antitrupave ndaj agjentit shkaktar të infeksionit ose antigjenit përkatës bën të mundur përcaktimin e shkakut të sëmundjes.

Studimet serologjike përdoren gjithashtu për të përcaktuar antigjenet e grupeve të gjakut, antigjenet e indeve dhe nivelin e imunitetit humoral.

Studimet serologjike përfshijnë reaksione të ndryshme serologjike:

1. Reaksioni i aglutinimit.

2. Reaksioni i reshjeve.

3. Reaksioni i neutralizimit.

4. Reagimi që përfshin komplementin.

5. Reagimi duke përdorur antitrupa ose antigjenë të etiketuar.

Përdoret për diagnostikimin e shprehur të sëmundjeve infektive (identifikimi i patogjenit në materialin e testimit), si dhe për përcaktimin e antitrupave dhe receptorëve sipërfaqësor dhe shënuesve të leukociteve (imunofenotipizimi) dhe qelizave të tjera.

Zbulimi i antigjeneve bakteriale dhe virale në materialet infektive, indet e kafshëve dhe kulturat qelizore duke përdorur antitrupa fluoreshente (serume) përdoret gjerësisht në praktikën diagnostike. Përgatitja e serumeve fluoreshente bazohet në aftësinë e disa fluorokromeve (për shembull, izotiocianati i fluoresceinës) për të hyrë në një lidhje kimike me proteinat e serumit pa cenuar specifikën e tyre imunologjike.

Metoda indirekte RIF konsiston në identifikimin e kompleksit antigjen-antitrup duke përdorur serumin antiglobulin (anti-antitrup) të etiketuar me fluorokrom. Për ta bërë këtë, njollat nga një pezullim i mikrobeve trajtohen me antitrupa të serumit diagnostikues antimikrobik të lepurit. Pastaj antitrupat që nuk janë të lidhur nga antigjenet mikrobiale lahen dhe antitrupat e mbetur në mikrobe zbulohen duke trajtuar njollën me serum antiglobulin (anti-lepuri) të etiketuar me fluorokrome. Si rezultat, formohet një mikrob kompleks + antitrupa antimikrobikë lepuri + antitrupa kundër lepurit të etiketuar me fluorokrom. Ky kompleks vërehet në një mikroskop fluoreshent, si në metodën direkte.

4. Në dhomën e gjumit të fëmijëve të çerdhes janë gjetur 75 mt/m3 streptokok, 12 mt/m3 stafilokok dhe 1 mt/m3 baktere tuberkulozi. Jepni një vlerësim sanitaro-bakteriologjik të ajrit dhe përshkruani një plan për sanimin e tij.

BILETA E PROVIMIT Nr._54

Retroviruset. Infeksioni HIV (AIDS) dhe patogjenët e tij.

Virusi i mungesës së imunitetit të njeriut shkakton infeksion HIV, duke rezultuar në zhvillimin e sindromës së mungesës së imunitetit të fituar.

Agjenti shkaktar i infeksionit HIV është një virus limfotropik që i përket familjes Retroviridae të gjinisë Lentivirus.

Vetitë morfologjike: virus që përmban ARN. Grimca e virusit në formë sferike Predha përbëhet nga një shtresë e dyfishtë lipidesh të depërtuara nga glikoproteinat. Mbështetja lipidike e ka origjinën nga membrana plazmatike e qelizës pritëse në të cilën riprodhohet virusi. Molekula e glikoproteinës përbëhet nga 2 nënnjësi të vendosura në sipërfaqen e virionit dhe që depërtojnë në mbështjelljen e tij lipidike.

Bërthama e virusit është në formë koni dhe përbëhet nga proteina kapsidale, një numër i proteinave të matricës dhe proteinave proteazë. Gjenomi formon dy vargje të ARN-së, për zbatimin e procesit të riprodhimit, HIV ka transkriptazë të kundërt, ose reversetazë.

Gjenomi i virusit përbëhet nga 3 gjene strukturore kryesore dhe 7 gjene rregullatore dhe funksionale. Gjenet funksionale kryejnë funksione rregullatore dhe sigurojnë zbatimin e proceseve të riprodhimit dhe pjesëmarrjen e virusit në procesin infektiv.

Virusi prek kryesisht limfocitet T- dhe B, disa qeliza të serisë monocitare (makrofagët, leukocitet), qelizat e sistemit nervor.

Vetitë kulturore: në kulturën qelizore të limfociteve T dhe monociteve njerëzore (në prani të IL-2).

Struktura antigjenike: 2 lloje të virusit - HIV-1 dhe HIV-2 HIV-1, ka më shumë se 10 gjenotipe (nëntipe): A, B, C, D, E, F ..., të ndryshme në përbërjen e aminoacideve të proteinat.

HIV-1 ndahet në 3 grupe: M, N, O. Shumica e izolimeve i përkasin grupit M, në të cilin dallohen 10 nëntipe: A, B, C, D, F-l, F-2, G, H, I, K. Rezistenca: E ndjeshme ndaj faktorëve fizikë dhe kimikë, prishet kur nxehet. Virusi mund të vazhdojë për një kohë të gjatë në gjendje të tharë, në gjak të tharë.

Faktorët e patogjenitetit, patogjeneza: Virusi ngjitet në limfocit, depërton në qelizë dhe riprodhohet në limfocit. Si rezultat i riprodhimit të HIV në një limfocit, këto të fundit shkatërrohen ose humbasin vetitë e tyre funksionale. Si rezultat i riprodhimit të virusit në qeliza të ndryshme, ai grumbullohet në organe dhe inde dhe gjendet në gjak, limfë, pështymë, urinë, djersë dhe feces.

Në infeksionin HIV, numri i limfociteve T-4 zvogëlohet, funksioni i limfociteve B është i dëmtuar, funksioni vrasës natyral është i shtypur dhe përgjigja ndaj antigjeneve është zvogëluar dhe prodhimi i komplementit, limfokinave dhe faktorëve të tjerë që rregullojnë funksionet imune (IL) është ndërprerë, duke rezultuar në mosfunksionim të sistemit imunitar.

Klinika: e prekur Sistemi i frymëmarrjes(pneumoni, bronkit); SNQ (abscese, meningjiti); Trakti gastrointestinal (diarre), ndodhin neoplazite malinje(tumoret e organeve të brendshme).

Infeksioni me HIV ndodh në disa faza: 1) periudhë inkubacioni mesatarisht 2-4 javë; 2) faza e manifestimeve parësore, e karakterizuar fillimisht nga ethe akute, diarre; stadi përfundon me një fazë asimptomatike dhe këmbëngulje të virusit, rivendosjen e mirëqenies, megjithatë në gjak zbulohen antitrupa HIV, 3) faza e sëmundjeve dytësore, të manifestuara me dëmtim të sistemit respirator, nervor. Infeksioni HIV përfundon me fazën e fundit, të katërt terminal - SIDA.

Diagnostifikimi mikrobiologjik.

Studimet virologjike dhe serologjike përfshijnë metoda për përcaktimin e antigjeneve dhe antitrupave HIV. Për këtë përdoren ELISA, IB dhe PCR. Serumet e pacientëve me HIV-1 dhe HIV-2 përmbajnë antitrupa ndaj të gjitha proteinave virale. Megjithatë, për të konfirmuar diagnozën, përcaktohen antitrupat ndaj proteinave gp41, gpl20, gpl60, p24 në HIV-1 dhe antitrupat ndaj proteinave gp36, gpl05, gpl40 në HIV-2. Antitrupat e HIV shfaqen 2-4 javë pas infektimit dhe zbulohen në të gjitha fazat e HIV-it.

Metoda për zbulimin e virusit në gjak, limfocite. Sidoqoftë, me çdo mostër pozitive, vendoset një reagim IB për të konfirmuar rezultatet. Përdoret gjithashtu PCR, e cila mund të zbulojë infeksionin HIV në periudhën e inkubacionit dhe klinikës së hershme, por ndjeshmëria e tij është pak më e ulët se ajo e ELISA.

Diagnozat klinike dhe serologjike konfirmohen nga studimet imunologjike nëse tregojnë praninë e mungesës së imunitetit tek pacienti i ekzaminuar.

Sistemi diagnostikues i testit ELISA për zbulimin e antitrupave ndaj HIV-it - përfshin antigjenin viral të adsorbuar në një bartës, antitrupa kundër Ig-së njerëzore. Përdoret për serodiagnozën e SIDA-s.

Trajtimi: përdorimi i frenuesve të transkriptazës së kundërt që veprojnë në qelizat e aktivizuara. Ilaçet janë derivate të timidinës - azidotimidina dhe fosfazidi.

Parandalimi. Specifike - nr.

Ndikimi i faktorëve fizikë dhe kimikë në mikrobet. Mutacioni dhe rëndësia e tij për mjekësinë praktike. Shembuj. Vlera e ekologjisë.

Veprimi i faktorëve kimikë dhe biologjikë.

Veprimi i kimikateve

Kimikatet mund të pengojnë ose pengojnë plotësisht rritjen e mikroorganizmave. Nese nje Substanca kimike pengon rritjen e baktereve, por pas heqjes, rritja e tyre rifillon sërish.

Substancat antimikrobike, duke marrë parasysh strukturën kimike dhe mekanizmin e tyre veprim baktericid bakteret mund të ndahen në grupet e mëposhtme: agjentë oksidues, halogjene, përbërje metalike, acide dhe alkale, surfaktantë, alkoole, ngjyra, fenol dhe derivate të formaldehidit.

Oksiduesit. Ky grup përfshin peroksid hidrogjeni dhe permanganat kaliumi.

Halogjenet. Klori, jodi dhe preparatet e tyre: zbardhues, kloraminë B, pantocid, alkool tretësirë jodi 5%, jodinol, jodoform.

Komponimet e metaleve të rënda (kripërat e plumbit, bakrit, zinkut, argjendit, merkurit; përbërjet organometale të argjendit: protargol, kolargol). Këto komponime janë të afta të ushtrojnë si antimikrobikë ashtu edhe të ndryshëm veprim lokal në indet e makroorganizmave.

Acidet dhe alkalet. Veprimi baktericid i acideve dhe alkaleve bazohet në dehidratimin e mikroorganizmave, ndryshimet në pH të lëndës ushqyese, hidrolizën e sistemeve koloidale dhe formimin e albuminateve acide ose alkaline.

Ngjyrat kanë veti për të penguar rritjen e baktereve. Ata veprojnë ngadalë, por në mënyrë më selektive.

Formaldehidi është një gaz pa ngjyrë. Në praktikë përdoret 40%. tretësirë uji formaldehid (formalinë). Formaldehidi i gaztë dhe i tretur në ujë ka një efekt të dëmshëm në format vegjetative dhe spore të baktereve.

Veprimi i faktorëve biologjikë

Veprimi i faktorëve biologjikë manifestohet kryesisht në antagonizmin e mikrobeve, kur mbetjet e disa mikrobeve shkaktojnë vdekjen e të tjerëve.

Antibiotikët (nga greqishtja anti-kundër, bios - jetë) - substanca biologjikisht aktive të formuara gjatë jetës së kërpudhave, baktereve, kafshëve, bimëve dhe të krijuara në mënyrë sintetike, të afta për të shtypur dhe vrarë në mënyrë selektive mikroorganizmat, kërpudhat, ricketsiae, viruset e mëdhenj, protozoarët dhe helmintet individuale.

3. Reagimi i aktivitetit biologjik të enzimave bakteriale në reumatizëm, rëndësi diagnostike dhe praktike, roli mbrojtës i antitrupave kundër enzimave në imunitetin e fituar (përcaktimi i antihialuronidazës dhe anti-O-streptolizinës).

Reumatizma - sëmundje e zakonshme natyra infektive-alergjike, në të cilën preket kryesisht indi lidhor të sistemit kardio-vaskular, si dhe nyjet, organet e brendshme, qendrore sistemi nervor. Besohet se shkaku i zhvillimit të reumatizmit është aktivizimi mikroorganizmave patogjene, kryesisht streptokoku beta-hemolitik i grupit A. Është ai që luan rolin kryesor në etiologji dhe patogjenezë sëmundje reumatizmale. Së pari, sëmundja zhvillohet në sfond infeksion streptokoksik. Së dyti, një numër i madh i antitrupave ndaj mikroorganizmave të këtij grupi gjenden në gjakun e pacientëve. Së treti, parandalimi i sëmundjes kryhet me sukses me barna antibakteriale.

Në artrit rheumatoid membranat sinoviale, për arsye të panjohura, sekretojnë sasi të mëdha të enzimës glukozë-6-fosfat dehidrogjenazë, e cila gjithashtu prish lidhjet disulfide në membranën qelizore. Në këtë rast vërehet “rrjedhje” e enzimave proteolitike nga lizozomet qelizore, të cilat shkaktojnë dëmtime të kockave dhe kërcit aty pranë. Trupi përgjigjet duke prodhuar citokina, të cilat përfshijnë gjithashtu faktorin e nekrozës së tumorit α TNF-α. Kaskadat e reaksioneve në qeliza, të cilat shkaktohen nga citokinat, përkeqësojnë më tej simptomat e sëmundjes. Inflamacioni kronik reumatoid i shoqëruar me TNF-α shpesh shkakton dëmtim të kërcit dhe kyçeve që çojnë në paaftësi fizike.