8 Metoda e hulumtimit bakteriologjik fazat e saj. Fazat e metodës së hulumtimit bakteriologjik. Kompleksi receptor i limfociteve naive

20. Karakteristikat e metodës së kërkimit bakteriologjik

Metoda e kërkimit kulturor (bakteriologjik) - një grup metodash që synojnë izolimin dhe identifikimin e kulturave të pastra të mikroorganizmave (baktereve) duke u kultivuar në mjedise ushqyese.

Një kulturë e pastër është një koleksion i mikroorganizmave të së njëjtës specie. Më shpesh, një kulturë e pastër përftohet duke përzgjedhur dhe kultivuar një koloni të izoluar (pasardhës të një qelize të vetme mikrobike).

Hapat e metodës:

1. Mbledhja e materialit për kërkime.

2. Izolimi i kulturës së pastër dhe identifikimi i saj.

3. Përfundim.

Mbledhja e materialit për kërkime. Lloji i materialit të studiuar varet nga qëllimi i studimit (diagnoza - nga pacienti; analiza epidemiologjike - nga mjedisi, ushqimi, pacienti dhe (ose) bartësi i baktereve).

Izolimi i kulturës së pastër. Përfshin 3 ose 4 faza:

1. Inokulimi i materialit (pas mikroskopisë paraprake) në një enë me lëndë ushqyese të dendur (mundësisht diagnostike diferenciale ose selektive) për të marrë koloni të izoluara. Prodhohet më shpesh me metodën e ndarjes mekanike. Në disa raste (për shembull, gjaku), materiali mbillet paraprakisht në një mjedis pasurues të lëngshëm, i ndjekur nga nënkultura në një pjatë me mjedis agar. Ndonjëherë kryhet trajtim selektiv i materialit para inokulimit (duke marrë parasysh vetitë e mikroorganizmit të izoluar; për shembull, trajtimi me acid ose alkali për të izoluar bakteret rezistente). Kultivohet në temperaturë 37°C për 18-24 orë. Koha e kultivimit për lloje të ndryshme bakteresh mund të ndryshojë.

2(3): a) studimi i kolonive në një pjatë agar (tiparet kulturore), përzgjedhja e atyre më tipikeve; b) përgatitja e njollave nga këto koloni me ngjyrosje (sipas Gramit ose metodave të tjera); a) shqyrtimi i pjesës tjetër të kolonisë së studiuar në mjedisin e akumulimit dhe rritja në një termostat në temperaturën optimale.

3 (4). Studimi i pastërtisë së kulturës së marrë në mjedisin e grumbullimit. Me këtë

qellimi eshte pergatitja e nje njollosje, njolle (zakonisht sipas Gram), studim mikroskopik

homogjeniteti morfologjik dhe tinktorial (në fusha të ndryshme shikimi).

4 (5). Identifikimi i pastër i kulturës.

konkluzioni. Sipas tërësisë së veçorive në krahasim me vetitë e shtameve referente (tipike), tregohet lloji i mikroorganizmit të izoluar nga materiali.

Vlerësimi i metodës:

Përparësitë: ndjeshmëri dhe saktësi relativisht e lartë, aftësia për të përcaktuar numrin e mikrobeve në materialin e testimit, si dhe ndjeshmëri ndaj antibiotikëve; kufizimet: kohëzgjatja relative, metoda është e shtrenjtë.

21. Mjete ushqyese për aerobet dhe anaerobet. Kërkesat për mjediset ushqyese, klasifikimi.

Kërkesat:

media duhet të jetë ushqyese

duhet të ketë ph të caktuar

duhet të jetë izotonike, d.m.th. presioni osmotik në mjedis duhet të jetë i njëjtë si në qelizë.

duhet të jetë i lagësht dhe jo shumë i lëngshëm

duhet të ketë një potencial të caktuar redoks

duhet të jetë steril

duhet të jenë të unifikuara, d.m.th. përmbajnë sasi konstante të përbërësve individualë.

Mjetet ushqyese mund të ndahen:

A) Origjina:

1) ushqim natyral - natyral (mish, qumësht, patate);

2) artificial - i përgatitur posaçërisht për rritjen e mikrobeve: - media nga produktet natyrale (ujë mishi, lëng mishi-pepton (MPB), agar mish-pepton (MPA), - pa përbërje konstante; - media ushqyese sintetike - tretësira rreptësisht sasi të përcaktuara të kripërave, aminoacideve, bazave azotike, vitaminave në ujin e distiluar - kanë një përbërje konstante, përdoren për rritjen e mikroorganizmave dhe kulturave qelizore në prodhimin e vaksinave, serumeve imune dhe antibiotikëve;

B) Me takim:

1) qëllimi i përgjithshëm (MPB, MPA) - shumica e mikrobeve rriten mbi to;

2) zgjedhore - promovoni në mënyrë selektive rritjen e një lloji mikrobesh nga një përzierje (për shembull, agar i verdhë-kripë për stafilokokët);

3) diagnostikimi diferencial - lejoni që një lloj mikrobi të diferencohet nga pamja e mjedisit nga të tjerët (për shembull, Endo, Levin media për grupin e mikrobeve të zorrëve).

Përveç kësaj, në varësi të qëllimet e përdorimit Në skemën për izolimin e kulturave të pastra, mediat e mëposhtme mund të dallohen sipas qëllimit:

1) pasurimi - pengon rritjen e mikrobeve të lidhura me patogjenin;

2) për të marrë koloni të izoluara;

3) akumulimi i kulturës së pastër;

B) Konsistenca:

1) lëngu;

2) gjysmë i lëngshëm (me shtimin e agar-agarit në një përqendrim prej 0,5-0,7%);

3) e dendur - mbi 1%.

Studimi i baktereve ka një rëndësi të madhe praktike për njerëzit. Deri më sot, janë zbuluar një numër i madh prokariotësh, të cilët ndryshojnë nga njëri-tjetri për nga patogjeniteti, zona e shpërndarjes, forma, madhësia, numri i flagjelave dhe parametra të tjerë. Për të studiuar këtë lloj në detaje, përdoret një metodë kërkimore bakteriologjike.

Cilat metoda të qelizave ekzistojnë?

Për të përcaktuar nëse bakteret janë patogjene, kultura ekzaminohet në mënyra të ndryshme. Midis tyre:

1. Metoda bakterioskopike.

2. Metoda bakteriologjike.

3. Metoda biologjike.

Bakterioskopike dhe bakteriologjike bazohen drejtpërdrejt në punën me qelizat prokariote, kur kërkohet analiza biologjike për të studiuar efektin e qelizave të tilla në organizmin e gjallë të kafshëve eksperimentale. Sipas shkallës së manifestimit të shenjave të caktuara të sëmundjes, shkencëtari mund të nxjerrë një përfundim për praninë ose mungesën e bakteret patogjene në kampion, si dhe t'i përhapë në mënyrë natyrale në trupin e kafshës për të marrë kulturën dhe përdorimin e tyre në vepra të tjera.

Metoda bakteriologjike e hulumtimit ndryshon nga bakterioskopike. Në të parën përdoret për analizë një kulturë e përgatitur posaçërisht e prokariotëve të gjallë, ndërsa në të dytën kryhet puna me qeliza të vdekura ose të gjalla në një rrëshqitje xhami.

Fazat e metodës së hulumtimit bakteriologjik. Mikrobiologjia

Parimi i studimit të vetive të një kulture bakteriale mund të jetë i dobishëm si për mikrobiologët që kanë vendosur qëllimin e studimit të qelizave prokariote, ashtu edhe për asistentët laboratorikë, detyra e të cilëve është të përcaktojnë patogjenitetin ose jopatogjenitetin e baktereve, dhe më pas të diagnostikojnë pacientin. .

Metodologjia për studimin e baktereve ndahet në tre faza:

1. Izolimi i baktereve nga kampioni origjinal.

2. Mbjellja e baktereve dhe rritja e studimit të vetive të tyre.

Faza e parë

Mostra, ose njollosja, merret nga sipërfaqja e lirë e mediumit ose nga pacienti. Kështu, ne marrim një "koktej" të shumë llojeve të baktereve që duhet të mbillen në një mjedis ushqyes. Ndonjëherë bëhet e mundur që menjëherë të izolohen bakteret e nevojshme, duke ditur vatrat e tyre të shpërndarjes në trup.

Pas dy ose tre ditësh, kolonitë e dëshiruara zgjidhen dhe mbillen në një shtresë të fortë të enëve Petri me ndihmën e një laku steril. Shumë laboratorë punojnë me epruveta, të cilat mund të përmbajnë lëndë ushqyese të ngurta ose të lëngshme. Kështu realizohet metoda bakteriologjike e hulumtimit në mikrobiologji.

Faza e dytë

Pas marrjes së kolonive individuale të baktereve, kryhet një makro- dhe mikroanalizë e drejtpërdrejtë. Maten të gjithë parametrat e kolonive, përcaktohet ngjyra dhe forma e secilës prej tyre. Nuk është e pazakontë të numërohen kolonitë në një pjatë Petri dhe më pas në materialin fillestar. Kjo është e rëndësishme në analizën e baktereve patogjene, numri i të cilave varet nga shkalla e sëmundjes.

Metoda e kërkimit bakteriologjik, faza e dytë e së cilës konsiston në studimin e kolonive individuale të mikroorganizmave, mund të shoqërohet me një metodë biologjike për analizimin e baktereve. Një qëllim tjetër i punës në këtë fazë është rritja e sasisë së materialit burimor. Kjo mund të bëhet në një medium ushqyes, ose mund të kryeni një eksperiment in vivo mbi organizmat e gjallë eksperimentalë. Bakteret patogjene do të shumohen, dhe si rezultat, gjaku do të përmbajë miliona qeliza prokariote. Është e lehtë të përgatitet materiali i nevojshëm i punës i baktereve nga gjaku i marrë.

Faza e tretë

Pjesa më e rëndësishme e studimit është përcaktimi i vetive morfologjike, biokimike, toksigjenike dhe antigjenike të kulturës bakteriale. Puna kryhet me kultura të pastruara paraprakisht në një mjedis ushqyes, si dhe me preparate (shpesh të njollosura) nën mikroskop.

Për të përcaktuar përkatësinë e baktereve patogjene ose oportuniste në një ose një grup tjetër sistematik, si dhe për të përcaktuar rezistencën e tyre ndaj ilaçeve, metoda bakteriologjike e hulumtimit lejon. Faza 3 - antibiotikët, d.m.th. analiza e sjelljes së qelizave bakteriale në kushtet e përmbajtjes së barnave në mjedis.

Studimi i rezistencës së kulturës ndaj antibiotikëve ka një rëndësi të madhe praktike kur është e nevojshme të përshkruhen barnat e nevojshme, dhe më e rëndësishmja, efektive për një pacient të caktuar. Këtu mund të ndihmojë metoda bakteriologjike e hulumtimit.

Çfarë është një medium ushqyes?

Për zhvillimin dhe riprodhimin, bakteret duhet të jenë në mjedise ushqyese të përgatitura paraprakisht. Sipas konsistencës, ato mund të jenë të lëngshme ose të ngurta, dhe nga origjina - bimore ose shtazore.

Kërkesat themelore për mediat ushqyese:

1. Steriliteti.

2. Transparencë maksimale.

3. Treguesit optimalë të aciditetit, aktivitetit të ujit dhe vlerave të tjera biologjike.

Marrja e kolonive të izoluara

1. Metoda Drygalsky. Ai konsiston në faktin se një njollë aplikohet në lakun bakterial me lloje të ndryshme mikroorganizmave. Ky lak kalohet përgjatë pjatës së parë Petri me një lëndë ushqyese. Më tej, pa ndryshuar lakin, metoda e materialit të mbetur kryhet në enët e dytë dhe të tretë Petri. Pra, në mostrat e fundit të kolonisë, bakteret nuk do të mbillen shumë dendur, duke thjeshtuar kështu aftësinë për të gjetur bakteret e nevojshme për punë.

2. Metoda e Koch. Ai përdor epruveta me lëndë ushqyese të shkrirë. Një lak ose pipetë me një njollë bakteresh vendoset atje, pas së cilës përmbajtja e epruvetës derdhet në një pjatë të veçantë. Agari (ose xhelatina) ngurtësohet pas ca kohësh dhe është e lehtë të gjesh kolonitë e dëshiruara të qelizave në trashësinë e tij. Është e rëndësishme të hollohet përzierja e baktereve në epruveta përpara fillimit të punës, në mënyrë që përqendrimi i mikroorganizmave të mos jetë shumë i lartë.

Fazat e të cilave bazohen në izolimin e kulturës së dëshiruar të baktereve, nuk mund të bëjnë pa këto dy metoda për gjetjen e kolonive të izoluara.

Antibiogrami

Vizualisht, reagimi i baktereve ndaj ilaçeve mund të shihet në dy mënyra praktike:

1. Metoda e disqeve prej letre.

2. Hollimi i baktereve dhe antibiotikut në një mjedis të lëngshëm.

Metoda e diskut të letrës kërkon një kulturë të mikroorganizmave që janë rritur në një mjedis të fortë ushqyes. Në një medium të tillë vendosni disa copa letre të rrumbullakosura të njomura me antibiotikë. Nëse ilaçi përballon me sukses neutralizimin e qelizave bakteriale, pas një trajtimi të tillë do të ketë një zonë pa koloni. Nëse reagimi ndaj antibiotikut është negativ, bakteret do të mbijetojnë.

Në rastin e përdorimit të një mediumi ushqyes të lëngshëm, fillimisht përgatitni disa epruveta me një kulturë bakteresh shkallë të ndryshme mbarështimit. Në këto epruveta u shtohen antibiotikë dhe gjatë ditës vërehet procesi i ndërveprimit ndërmjet substancës dhe mikroorganizmave. Në fund, merret një antibiogram me cilësi të lartë, sipas të cilit mund të gjykohet efektiviteti i ilaçit për një kulturë të caktuar.

Detyrat kryesore të analizës

Këtu janë renditur qëllimet dhe fazat e metodës bakteriologjike të hulumtimit.

1. Merrni materialin fillestar që do të përdoret për të izoluar kolonitë bakteriale. Mund të jetë një njollë nga sipërfaqja e çdo objekti, mukoze ose zgavër të një organi njerëzor, një test gjaku.

2. në një mjedis të fortë ushqyes. Pas 24-48 orësh, në pjatën Petri mund të gjenden koloni të llojeve të ndryshme të baktereve. Ne zgjedhim atë të dëshiruar sipas kritereve morfologjike dhe/ose biokimike dhe kryejmë punë të mëtejshme me të.

3. Riprodhimi i kulturës që rezulton. Metoda e hulumtimit bakteriologjik mund të bazohet në një metodë mekanike ose biologjike të rritjes së numrit të kulturave bakteriale. Në rastin e parë, puna kryhet me lëndë ushqyese të ngurta ose të lëngshme, mbi të cilat bakteret shumohen në një termostat dhe formojnë koloni të reja. Metoda biologjike kërkon kushte natyrore për rritjen e numrit të baktereve, kështu që këtu kafsha eksperimentale infektohet me mikroorganizma. Pas disa ditësh, shumë prokariote mund të gjenden në një mostër gjaku ose njollë.

4. Punoni me kulturë të pastruar. Për të përcaktuar pozicionin sistematik të baktereve, si dhe përkatësinë e tyre ndaj patogjenëve, është e nevojshme të kryhet një analizë e plotë e qelizave sipas karakteristikave morfologjike dhe biokimike. Kur studioni grupet patogjene të mikroorganizmave, është e rëndësishme të dini se sa efektiv është veprimi i antibiotikëve.

Ishte karakteristikat e përgjithshme metoda e hulumtimit bakteriologjik.

Karakteristikat e analizës

Rregulli kryesor i hulumtimit bakteriologjik është steriliteti maksimal. Nëse jeni duke punuar me provëza, kulturat dhe nënkulturat e baktereve duhet të kryhen vetëm mbi një llambë shpirtërore të ndezur.

Të gjitha fazat e metodës së kërkimit bakteriologjik kërkojnë përdorimin e një lak të veçantë ose një pipetë Pasteur. Të dy mjetet duhet të trajtohen paraprakisht në flakën e një llambë alkooli. Sa i përket pipetës Pasteur, atëherë para sterilizimit termik është e nevojshme të shkëputni majën e pipetës me piskatore.

Teknika e mbjelljes së baktereve gjithashtu ka karakteristikat e veta. Së pari, kur inokulohet në media të ngurta, një lak bakterial kalon mbi sipërfaqen e agarit. Lak, natyrisht, duhet të ketë tashmë një mostër të mikroorganizmave në sipërfaqe. Praktikohet edhe inokulimi, me ç'rast laku ose pipeta duhet të arrijë në fund të enës Petri.

Kur punoni me media të lëngshme, përdoren provëza. Këtu është e rëndësishme të siguroheni që lëngjet të mos prekin skajet e qelqit ose tapës laboratorike dhe instrumentet e përdorura (pipeta, lak) të mos prekin objekte dhe sipërfaqe të huaja.

Vlera e metodës së kërkimit biologjik

Analiza e mostrës bakteriale ka aplikimet e veta praktike. Para së gjithash, metoda bakteriologjike e hulumtimit mund të përdoret në mjekësi. Për shembull, është e nevojshme të studiohet mikroflora e pacientit për të vendosur diagnozën e saktë, si dhe për të zhvilluar kursin e duhur të trajtimit. Këtu ndihmon një antibiogram, i cili do të tregojë aktivitetin e barnave kundër patogjenit.

Analiza bakteriale përdoret në laborator për të zbuluar sëmundje të rrezikshme si tuberkulozi, ethet e përsëritura ose gonorreja. Përdoret gjithashtu për të studiuar përbërjen bakteriale të bajameve, zgavrave të organeve.

Metoda e kërkimit bakteriologjik mund të përdoret për të përcaktuar kontaminimin e mjedisit. Sipas të dhënave për përbërjen sasiore dhe cilësore të një njolleje nga sipërfaqja e një objekti, përcaktohet shkalla e popullimit të këtij mjedisi nga mikroorganizmat.

QËLLIMI I MËSIMIT: e di parimet e kultivimit të mikroorganizmave, mjediset ushqyese, klasifikimi i tyre; metodat e sterilizimit dhe dezinfektimit të përdorura në mikrobiologji dhe mjekësi; fazat e metodës diagnostike bakteriologjike sëmundjet infektive.

te jesh i afte te përdorni pajisje për kultivimin e baktereve (aerobe dhe anaerobe), zgjidhni mjetet, mënyrën e sterilizimit dhe dezinfektimit në përputhje me detyrat specifike, kryeni fazën e parë të metodës bakteriologjike për diagnostikimin e sëmundjeve infektive (inokulimi i materialit testues në densitet dhe të lëngshëm media ushqyese për të izoluar kulturat e pastra të mikroorganizmave aerobikë).

1. Pyetje për vetë-studim:

1. Përbërja dhe kërkesat për mjediset ushqyese

2. Klasifikimi i mediave të kulturës

3. Aseptik dhe antiseptik

4. Dezinfektimi, metodat dhe kontrolli i efektivitetit të dezinfektimit

5. Sterilizimi, metodat, pajisjet dhe mënyrat e sterilizimit

6. Metodat për përcaktimin e efektivitetit të sterilizimit

7. Llojet, shtamet, kolonitë, kultura e pastër e mikroorganizmave

8. Metodat për izolimin e kulturave të pastra të mikroorganizmave

9. Metoda bakteriologjike për diagnostikimin e sëmundjeve infektive. Qëllimi dhe sekuenca e fazës së parë të metodës bakteriologjike për izolimin e aerobeve

10. Teknika për inokulimin e mikroorganizmave në mjedise ushqyese të lëngëta dhe të ngurta

11. Veçoritë e kultivimit të mikroorganizmave anaerobe. Aparatet dhe pajisjet e përdorura për kultivimin e baktereve anaerobe

2. Pyetje sigurie:

1) Shkruani kërkesat për mjediset ushqyese

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2) Shkruani klasifikimin e mjediseve ushqyese

a) sipas konsistencës (me shembuj, tregoni përqendrimin e agar-agarit): ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) nga Qëllimi i synuar(përcaktoni, jepni shembuj)

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

3) Shkruani metodat e sterilizimit

a) duke përdorur temperaturat e larta ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) pa përdorimin e temperaturave të larta ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4) Listoni pajisjet për sterilizim ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5) Shkruani në një fletore a) metodat e kontrollit të regjimit të sterilizimit

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) metodat për monitorimin e sterilitetit të lëndëve ushqyese ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

c) metodat e kontrollit të sterilitetit të instrumenteve, veshjeve, materialit të qepjes etj. ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6) Listoni të gjitha metodat e kultivimit të aerobeve

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

7) Listoni të gjitha metodat e kultivimit të anaerobeve

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8) Studioni skemën e metodës së diagnostikimit bakteriologjik, emërtoni fazat e metodës

Shkruani qëllimin dhe skemën e metodës së kërkimit bakteriologjik

QËLLIMI I METODËS BAKTERIOLOGJIKE

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

SKEMA E METODËS BAKTERIOLOGJIKE

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Njihuni me materialet ushqyese dhe plotësoni tabelën "Mjetet ushqyese".

Plotësoni tabelën "Metodat themelore të sterilizimit"

teksti bazë

Përbërja dhe kërkesat për mjediset ushqyese

Mjetet ushqyese janë të nevojshme për marrjen e kulturave të pastra të mikroorganizmave, studimin e veçorive të morfologjisë dhe fiziologjisë së tyre, si dhe për ruajtjen e mikroorganizmave në formën e kulturave të pastra në kushte laboratorike dhe prodhimi.

Mjeti ushqyes duhet të plotësojë kërkesat e mëposhtme:

1. Vlera ushqyese (plotësia) - përmbajtja e faktorëve të nevojshëm për jetën e mikrobeve - burimet e karbonit, azotit, squfurit, burimet e energjisë, jonet e nevojshme inorganike në një formë të arritshme për t'u përthithur nga mikroorganizmat.

2. Izotoniciteti i krijuar nga 0,85% NaCl (përqendrimi i kripërave në mjedisin ushqyes duhet të korrespondojë me përqendrimin e tyre në qelizën mikrobike).

3. Vlerat optimale të një numri parametrash biokimikë: përqendrimi i joneve të hidrogjenit (varg pH 4,5-8,5, zakonisht 7,2-7,4), potenciali redoks (Eh për anaerobet - i ulët 0,0120-0,060 V, për aerobet - i lartë më shumë se 0,080 V), presioni osmotik.

4. Keni lagështi të mjaftueshme (të paktën 60% për mediat e dendura), pasi mikrobet ushqehen me ligjet e difuzionit dhe osmozës.

5. Një viskozitet i caktuar (më optimali për difuzionin e substancave).

6. Transparenca, për të vizualizuar rritjen e baktereve.

7. Steriliteti.

Përbërësit e medias së kulturës

Proteinat janë burimi i azotit për mikroorganizmat, por shumica e mikrobeve nuk janë në gjendje të asimilojnë proteinat vendase, prandaj përdoren produkte të ndarjes acidike dhe enzimatike të proteinave: pepton, kazeinë. Përbërësit fillestarë të lëndës ushqyese artificiale janë uji i mishit, hidrolizati acid dhe enzimatik i kazeinës, peptonit dhe klorur natriumi i shtohet gjithashtu bazës. Uji i mishit përmban minerale, karbohidrate, vitamina. Kazeina e acidit ushqimor është një mbetje e industrisë së qumështit, përmban një grup të plotë aminoacidesh dhe karakterizohet nga vlera të larta ushqyese. Peptoni është një produkt i tretjes jo të plotë të proteinave, i marrë nga hidroliza enzimatike ose acidike e produkteve të mbeturinave nga prodhimi i mishit ose produkteve të peshkut ose kazeinës së qumështit. Përmban albumoza, peptone dhe polipeptide të aminoacideve në sasi të vogla, përbërja e tyre varet nga thellësia e ndarjes së proteinave. Peptoni është një pluhur i verdhë i lehtë, i tretshëm në ujë, nuk mpikset kur nxehet. Përdoret si burim i azotit dhe karbonit.

Mediat e dendura ushqyese përgatiten nga ato të lëngshme me shtimin e një ngjitësi. Agar-agar zakonisht përdoret si izolues. Agar-agar - një produkt i marrë nga alga deti, është pluhur ose pllaka të verdhë, përmban polisaharide me peshë të lartë molekulare, nuk shpërbëhet nga shumica e mikroorganizmave, nuk shkatërrohet nga autoklavimi, vlera ushqyese media nuk ndryshon, nuk pengon rritjen e mikrobeve. Është në gjendje të formojë xhel në ujë, duke u shkrirë në 100°C dhe duke u ngjeshur në 45°C e më poshtë, që nuk përdoret nga mikroorganizmat si një substrat ushqyes. Disa cikle shkrirjeje dhe ngurtësimi nuk ndikojnë në aftësinë e agarit për të formuar një xhel, kështu që media agar mund të sterilizohet disa herë.

Gjithashtu, përbërja e mediave ushqyese përfshin gjak, serum, kripëra inorganike. Të gjitha mjediset ushqyese, si rregull, përmbajnë 0,5% klorur natriumi, i cili korrespondon me kushtet izoosmotike të mjedisit, të cilat janë optimale për jetën e mikrobeve. Funksioni i elementeve minerale në metabolizmin e mikrobeve është kryesisht aktivizimi i enzimave të ndryshme. Përveç kësaj, jonet inorganike (kryesisht Na + dhe K +) janë të përfshirë në transportin e substancave përmes membranave qelizore, në rregullimin e sintezës së proteinave.

Agjentët restaurues. Agjentët reduktues shtohen në mjediset e destinuara për kultivimin e mikroorganizmave anaerobe, në mënyrë që të ulin potencialin redoks (Eh) dhe ta balancojnë atë në një nivel optimal. Eh është një masë e aftësisë së një zgjidhjeje për të dhuruar ose pranuar elektrone. Kur kultivoni anaerobe, zakonisht përdoren si agjentë reduktues tioglikolati i natriumit (0.1%), cisteina (0.1%), acidi askorbik (0.1%).

Karbohidratet, alkoolet polihidrike, treguesit. Karbohidratet janë burimi më i mirë i karbonit për shumicën e mikroorganizmave heterotrofikë. Ato janë pjesë e mjeteve diagnostikuese diferenciale të krijuara për të përcaktuar vetitë biokimike të mikrobeve.

Përbërja e mediave ushqyese, përveç karbohidrateve dhe alkooleve polihidrike, përfshin të ndryshme treguesit, kryesisht acid-bazë. Një ndryshim në ngjyrën e mediumit gjatë inokulimit të mikroorganizmave tregon formimin e acidit ose alkalit kur aktiviteti enzimatik mikroorganizmave. Si tregues zakonisht përdoren e kuqe neutrale, blu bromothimol, e kuqe e Kongos, një përzierje e acidit rosolik dhe blu e ujit (BP), treguesi Andrede.

Ngjyrat. Aftësia e ngjyrave për të ndryshuar lehtësisht dhe në mënyrë të kthyeshme nga një formë me ngjyrë në një formë të reduktuar (pa ngjyrë) përdoret gjerësisht në praktikën bakteriologjike, në veçanti, për të diferencuar bakteret që dekompozojnë laktozën nga ato laktozë-negative. Si rezultat i këtij procesi, bakteret laktozë pozitive formojnë koloni me ngjyrë në mjedis, ndërsa ato laktozë-negative janë të pangjyrë. Ngjyrat më të përdorura që janë pjesë e mediave ushqyese janë fuchsin bazë, blu metilen dhe eozina.

Frenuesit. Kur ekzaminohet prania e baktereve patogjene, është e nevojshme të shtypet rritja e mikroflorës shoqëruese. Për këtë, përdoren inhibitorë të ndryshëm. Si frenues të mikroorganizmave gram-negativë, përbërja e mediave përfshin tetrationat natriumi dhe kaliumi, teluriti i kaliumit, acetati i taliumit, sulfati i taliumit, seleniti i natriumit. Për të penguar rritjen e mikrobeve gram-pozitive, përdoren ngjyra aniline: jeshile e shkëlqyeshme, vjollcë kristal, vjollcë etil, blu aniline. Biliare dhe kripërat biliare janë pjesë e mediave selektive për rritjen e enterobaktereve patogjene. Një përzierje e acideve biliare e marrë si rezultat i hidrolizës alkaline të biliare është pjesë e mediumit të Ploskirev. Jashtë vendit, si pjesë e mediave selektive, përdoren kripëra të acideve biliare individuale, kryesisht deoksikolat natriumi.

Media të thata ushqyese. Përgatitja e mediave ushqyese është një nga fushat më kritike të punës së një laboratori bakteriologjik. Në këtë drejtim, biondustria prodhon lëndë ushqyese standarde, të konservuara, të thata, për qëllime të ndryshme, për kultivimin e mikroorganizmave. Janë pluhura higroskopik me përmbajtje lagështie deri në 10%. Përgatitni median siç udhëzohet në etiketë. Qëndrueshmëria e përbërjes, standarditeti i mediumit, thjeshtësia dhe komoditeti në punë, lehtësia e transportit dhe ruajtjes janë avantazhet e mëdha të lëndëve ushqyese të thata. Pas vendosjes së pH-së së duhur, mediumi zihet, filtrohet, kthjellohet, hidhet në shishe, epruveta dhe sterilizohet. Duhet pasur parasysh që pas sterilizimit mjedisi bëhet më acid.

Speciet - një grup mikroorganizmash që kanë një origjinë të përbashkët evolucionare, një gjenotip të ngushtë (një shkallë e lartë e homologjisë gjenetike, zakonisht më shumë se 60%) dhe karakteristikat fenotipike më të afërta të mundshme. Strain - një kulturë e izoluar e një lloji të caktuar bakteri ("një mostër specifike e një specie të caktuar") Koloni - të dukshme për syrin një strukturë e izoluar e formuar si rezultat i riprodhimit dhe akumulimit të m/o për një periudhë të caktuar inkubimi dhe nga një qelizë mëmë ose nga disa qeliza identike.

Metodat diagnostikimi laboratorikØ Mikroskopik - zbulimi i m / o drejtpërdrejt në materialin klinik Ø Bakteriologjik - zbulimi i m / o nga materiali mbjellës në mjediset ushqyese Ø Biologjik - izolimi i m / o nga një kafshë laboratorike e infektuar më parë Ø Serologjike - zbulimi i antitrupave specifikë imunitarë në serumi i gjakut të pacientit Ø Alergjik - vendosja e testeve alergjike të lëkurës (ngusht specifike - tuberkulozi, tularemia, etj.)

Ø Kulturore - natyra e rritjes së një mikroorganizmi në mjediset ushqyese. Ø Biokimik - aftësia për të fermentuar substrate të ndryshme (karbohidrate, proteina dhe aminoacide, etj.), Për të formuar produkte të ndryshme biokimike në procesin e jetës për shkak të aktivitetit të sistemeve të ndryshme enzimë dhe karakteristikave metabolike. Ø Antigjenik – varen kryesisht nga përbërje kimike dhe struktura e murit qelizor, prania e flagjelave, kapsulave, njihen nga aftësia e makroorganizmit (strehuesi) për të prodhuar antitrupa dhe forma të tjera të përgjigjes imune, zbulohen në reaksionet imunologjike.

Metodat fiziologjike karbohidratet (autotrofet, heterotrofet), azoti (aminoautotrofet, aminoheterotrofet) dhe llojet e tjera te ushqyerjes, lloji i frymemarrjes (aerobet, mikroaerofilet, anaerobet fakultative, anaerobet strikte). Ø Lëvizshmëria dhe llojet e lëvizjes. Ø Aftësia për të sporuluar, natyra e mosmarrëveshjes. Ø Ndjeshmëria ndaj bakteriofagëve, tipizimi i fagut. Ø Përbërja kimike e mureve qelizore - sheqernat bazë dhe aminoacidet, përbërja e lipideve dhe acideve yndyrore. Ø Spektri proteinik (profili polipeptid). Ø Ø Ndjeshmëri ndaj antibiotikëve dhe të tjera barna. Ø Gjenotipike (përdorimi i metodave të gjenosistematikës).

Metoda bakteriologjike përfshin inokulimin e materialit klinik në mjedise ushqyese artificiale, izolimin e kulturave të pastra të mikrobeve dhe identifikimin e tyre pasues.

Përdoren metoda bakteriologjike: në diagnostikimin e sëmundjeve infektive; Ш Gjatë ekzaminimeve parandaluese për bartjen e baktereve grupi i zorrëve, bacil i difterisë etj.; III gjatë studimit të gjendjes sanitare dhe higjienike të objekteve mjedisore (uji, ajri, toka, ushqimi etj.) dhe ekzaminimi i tyre sipas indikacioneve epidemiologjike për infeksion me lloje patogjene të mikroorganizmave. W

Karakteristikat fiziologjike Lidhja me temperaturën Frymëmarrja Ushqyerja Enzimat Metabolizmi i proteinave dhe aminoacideve (xhelatinaza, kolagjenaza, dekarboksilaza, ureaza) Enzima të tjera (hemolizinat, lipazat, lecitinaza, DNaza) Produktet përfundimtare metabolike (kromatografia) Rezistenca/ndjeshmëria ndaj AMP

Elementet që janë kryesisht të nevojshme për rritjen e mikroorganizmave dhe duhet të përfshihen në përbërjen e mediumit ushqyes përcaktohen nga përbërja kimike e qelizave mikrobike, e cila, në parim, është e njëjtë në të gjithë organizmat e gjallë. Pjesa kryesore e masës totale qelizore përfaqësohet nga uji (80 - 90%) dhe vetëm 10 - 20% është lëndë e thatë. Sipas përmbajtjes sasiore në lëndën e thatë, dallohen makro- dhe mikroelementet. Të parat përfshijnë: karbon, oksigjen, azot, hidrogjen, squfur, fosfor, kalium, natrium, magnez, kalcium, hekur. Elementet gjurmë janë mangani, molibden, zinku, bakri, kobalti etj., shumica e të cilëve nevojiten në sasi të vogla. Për këtë arsye, mikroelementet nuk shtohen në përbërjen e shumë mediave, pasi nevoja për to mund të plotësohet nga papastërtitë në kripërat e makroelementeve. Përveç kësaj, jo të gjithë mikroorganizmat kanë nevojë për elementë gjurmë. katërmbëdhjetë

Ndryshe nga organizmat shtazorë dhe bimorë, mikroorganizmat karakterizohen nga një shumëllojshmëri e llojeve të të ushqyerit, të cilat dallohen sipas tre kritereve kryesore - një burim karboni, një burim energjie dhe një dhurues elektroni (hidrogjen). Në varësi të natyrës së burimit të karbonit, të gjithë mikroorganizmat ndahen në 2 grupe të mëdha - autotrofe, duke përdorur dioksid karboni dhe heterotrofë, që kërkojnë substanca organike të gatshme për rritje dhe riprodhim. Duke marrë parasysh shumëllojshmërinë e burimeve të energjisë dhe të dhuruesve të elektroneve, këto grupe ndahen në nëngrupe, si rezultat i të cilave janë identifikuar 8 lloje të ushqyerjes në mikroorganizma. Çdo lloj ushqimi është karakteristik për disa mikroorganizma dhe pasqyron vetitë e tyre fiziologjike dhe biokimike. Shumica e mikroorganizmave, duke përfshirë patogjenët, kanë një lloj ushqimi në të cilin substancat organike janë burimi i karbonit, energjisë dhe dhuruesve të elektroneve. 16

Nevojat e mikroorganizmave në burimet organike të karbonit janë shumë të ndryshme. Disa specie janë "gjithgrënëse" dhe mund të konsumojnë substanca të natyrave të ndryshme kimike, të tjerat janë më selektive dhe përdorin vetëm disa prej tyre. Specifikimi i grupit të përbërjeve organike karakteristike për secilin lloj mikroorganizmash merret parasysh kur krijohen mjete diagnostikuese zgjedhore dhe diferenciale të përdorura gjerësisht në mikrobiologjinë sanitare dhe klinike për identifikimin e shpejtë të grupeve të caktuara të mikroorganizmave. Kur zgjidhni një substrat që përmban karbon, duhet të merret parasysh se tretshmëria e substancave organike gjithashtu varet në masë të madhe nga vetitë e tyre - tretshmëria, shkalla e oksidimit të atomeve të karbonit, konfigurimi hapësinor dhe polimerizimi i molekulave të tyre. Zakonisht, mikroorganizmat asimilojnë disa izomerë optikë - sheqerna që i përkasin serisë D, aminoacide - në serinë L. Shumë pak mikroorganizma kanë enzima që konvertojnë një izomer optik në një tjetër. Biopolimerët si niseshteja, polisaharidet, proteinat, yndyrat mund të përdoren vetëm nga mikroorganizmat që sintetizojnë disa enzima hidrolitike - amilaza, proteaza, lipaza në formën e ekzoenzimave, pra enzimave të sekretuara nga qeliza në mjedis. 17

Për shumicën dërrmuese të mikroorganizmave heterotrofikë, karbohidratet, aminoacidet, proteinat dhe acidet organike janë burimet kryesore lehtësisht të arritshme të karbonit dhe energjisë. Kur karakterizohet nevoja e mikroorganizmave për burime organike të karbonit, duhet të theksohet se shkalla më e lartë e heterotrofisë është e natyrshme në mikroorganizmat patogjenë që janë përshtatur me jetën në organizmat e njeriut dhe të kafshëve. Përbërja e mjediseve ushqyese për kultivimin e tyre është veçanërisht komplekse. Ato përmbajnë proteina ose produkte të hidrolizës së tyre të cekët (peptide), vitamina, fragmente të acideve nukleike, etj. Për përgatitjen e këtyre mediumeve përdoren lloje të ndryshme hidrolizash dhe ekstraktesh mishi, gjaku ose serumi, ekstrakte të majave dhe bimëve, e shumë të tjera. të përdorura. Këto media janë të përshtatshme për kultivimin e një shumëllojshmërie të gjerë speciesh dhe janë veçanërisht të dobishme në rastet kur nevoja e mikrobit për faktorë të rritjes është e panjohur ose ka nevojë për shumë faktorë rritjes në të njëjtën kohë. Disavantazhi i mediave të tilla është vështirësia ose pamundësia e arritjes së standardizimit të tyre për shkak të kontrollueshmërisë jo standarde dhe të kufizuar të përbërjes dhe vetive të lëndës së parë. tetëmbëdhjetë

Metabolizmi konstruktiv i mikroorganizmave në përgjithësi synon sintezën e katër llojeve kryesore të biopolimerëve - proteinave, acideve nukleike, polisaharideve dhe lipideve. Për biosintezën e proteinave dhe acideve nukleike, elementi më i rëndësishëm, përveç karbonit, është azoti. Burimi më i arritshëm i azotit për shumicën e mikroorganizmave janë jonet e amonit, të cilat ata mund t'i marrin nga kripërat e acideve organike dhe inorganike, aminoacideve, proteinave dhe substancave të tjera që përmbajnë azot. Për një grup të madh bakteresh, kryesisht patogjenë, substancat organike që përmbajnë azot janë të nevojshme si burime të azotit. Nëse aminoacidet janë një burim i tillë i azotit, mikroorganizmat mund t'i përdorin ato drejtpërdrejt për sintezën e proteinave, ose paraprakisht të kryejnë deaminimin e tyre, dhe amino-grupet e çliruara në këtë rast mund të përdoren për sintezën e aminoacideve të tyre, proteinave. 19

Megjithatë, disa mikroorganizma kërkojnë aminoacide të caktuara për t'u rritur, të cilat nuk mund t'i sintetizojnë vetë. Mikroorganizmat që kanë nevojë për aminoacide të tilla "thelbësore" përfshijnë Staphylococcus aureus, streptokokun hemolitik, bakteret e acidit laktik dhe disa të tjerë. Në varësi të karakteristikave fiziologjike të mikrobeve, numri i aminoacideve "thelbësore" është i ndryshëm - për Staphylococcus aureus, vetëm triptofani dhe cistina kërkohen në mediumin ushqyes, dhe për streptokokun hemolitik - 17 aminoacide. Proteinat, si burime të azotit, janë të disponueshme vetëm për ata mikroorganizma që formojnë enzima proteolitike të çliruara në mjedis (d.m.th., në ekzoform). Nën veprimin e këtyre enzimave, proteinat ndahen në substanca me peshë molekulare më të ulët - peptone dhe aminoacide. njëzet

Metabolizmi i energjisë i mikroorganizmave, si dhe konstruktiv, karakterizohet nga një shumëllojshmëri mekanizmash biokimikë. Në këtë metabolizëm, dallohen tre lloje kryesore - frymëmarrja aerobe, frymëmarrja anaerobe dhe fermentimi, nga të cilat më e zakonshme është frymëmarrja aerobe. Në këtë proces, lënda organike oksidohet në dioksid karboni dhe ujë me çlirimin maksimal të energjisë që përmban kjo substancë. Shumë mikroorganizma me frymëmarrje aerobike janë aerobe strikte, por disa prej tyre janë aerobe fakultative, pasi mund të formojnë edhe ATP në kushte anaerobe nëpërmjet fermentimit. Disa mikroorganizma, kryesisht bakteret, marrin energji në frymëmarrjen anaerobe, d.m.th., si rezultat i oksidimit të substancave, ku jo oksigjeni, por përbërjet inorganike veprojnë si pranues të elektroneve. Pra, disa lloje të gjinisë Bacillus, E. coli kryejnë frymëmarrje anaerobe, gjatë së cilës nitrat (NO 3) reduktohet në amoniak; Clostridium aceticum oksidon hidrogjenin molekular duke përdorur dioksidin e karbonit si një pranues elektronesh. 21

Lloji më i thjeshtë metabolik i metabolizmit të energjisë është fermentimi. Proceset e fermentimit zhvillohen në kushte anaerobe dhe shoqërohen me çlirimin e energjisë. Substrati kryesor për fermentim janë karbohidratet, por bakteret mund të fermentojnë acidet organike, duke përfshirë aminoacidet, si dhe purinat dhe pirimidinat. Njihen shumë lloje fermentimi, secila prej të cilave shkaktohet nga një grup specifik mikroorganizmash dhe, në përputhje me mekanizmin, shoqërohet me formimin e produkteve përfundimtare specifike. Produktet përfundimtare të fermentimit janë zakonisht acide të ndryshme organike - laktik, acetik, succinic, citrik, etj., Si dhe alkoolet (etil, butil, propil), dioksid karboni dhe hidrogjeni. Sipas prodhimit të produktit përfundimtar kryesor, dallohen edhe llojet përkatëse të fermentimit. Për faktin se gjatë fermentimit nuk ka oksidim të plotë të substratit dhe substancat pjesërisht të oksiduara lëshohen në mjedis, të cilat ende përmbajnë energji - acide organike, alkoole, etj., Rendimenti total i ATP në këtë proces për 1 mol të fermentuar. substrati është i rëndësishëm (~ 30 herë) është më i ulët se gjatë metabolizmit të të njëjtit substrat në proceset e frymëmarrjes. 22

Një rol të veçantë i takon Robert Koch. Duke postuar nevojën për të izoluar një kulturë të pastër të një mikrobi, ai përcaktoi në këtë mënyrë nevojën për të krijuar kushte për zgjidhjen e këtij problemi. Më e rëndësishmja prej tyre ishte mediumi ushqyes mbi të cilin mund të fitohej rritja e mikroorganizmit. Futja e lëndëve ushqyese të dendura në praktikën mikrobiologjike në 1881 lidhet me emrin e Koch. Vetë ideja e përdorimit të tyre lindi më herët dhe i përket studiuesit gjerman Bredfeld. Për më tepër, që në vitin 1877, Schroeter kultivoi baktere në feta patate, të cilat gjithashtu mund të interpretohen si përdorimi i një mediumi ushqyes. Merita e Koch qëndron në një qasje të thellë shkencore ndaj problemit, përdorimin e gjerë të mediave ushqyese në kërkimin e tij. Ai propozoi gjithashtu forcuesin e parë, xhelatinë, si një përbërës të një mediumi të dendur. 25

Agar-agar, i njohur për mikrobiologët modernë, u fut nga Frost në praktikën e përditshme shumë më vonë, në 1919, megjithëse do të ishte e drejtë të kujtonim që në 1881, studiuesi gjerman Hesse propozoi agar-agar. Për më tepër, në vitin 1913, mikrobiologu rus V. L. Omelyansky, duke i kushtuar haraç lëndëve ushqyese me xhelatinë, vuri në dukje se mjediset ushqyese të agarit preferohen në rastet kur mikrobi lëngëzon xhelatinë. Idetë dhe veprimtaritë praktike të Koch u zhvilluan intensivisht në fund të shekullit të 19-të dhe në çerekun e parë të shekullit të 20-të. Pikërisht gjatë kësaj periudhe studiues nga një sërë vendesh propozuan mjete ushqyese për qëllime të ndryshme, roli i të cilave për mikrobiologjinë praktike ishte dhe mbetet shumë domethënës. Mikrobiologu modern çdo ditë në punën e tij kujton emrat e tyre. Në këto pak vite, një japonez me origjinë, Sh. Endo, propozoi agarin e tij për diferencimin e enterobaktereve, austriak E. Levenshtein - medium për mykobakteret dhe anglezi A. Mak. Konki - medium diagnostik selektiv dhe diferencial për mikroorganizmat e zorrëve, gjermanisht T. Kitt dhe italian D. Tarozzi - medium për bakteret anaerobe të detyruara, francez R. Saburo, çek F. Chapek dhe amerikan A. Doks - medium për kërpudhat, brazilian R. Hottinger – Mjete shumëfunksionale të bazuara në mish të pjekur shumë, etj. 26

Kërkesa të përgjithshme Përmbajtja e të gjithë elementëve për ndërtimin e një qelize mikrobike Lagështia e mjaftueshme Sigurimi i izotonitetit Një përqendrim i caktuar i joneve të hidrogjenit Potenciali redoks Steriliteti

Fazat kryesore të rritjes së kulturës periodike: fillestare (lag-) - 1, eksponenciale (abolologarithmike) - 2, stacionare - 3 duke vdekur - 4 (Fig. 12) 12. Fazat kryesore të rritjes së popullsisë mikrobike në mjedise ushqyese të lëngshme.

Natyra e rritjes së mikroorganizmave në mjedise të lëngshme ushqyese Ø Ø Ø Rritja e baktereve me një turbullirë uniforme të mjedisit, ngjyra e të cilave nuk ndryshon ose ndryshon në përputhje me ngjyrën e pigmentit të tretshëm në ujë të formuar në kulturën e mikrobi; Rritja e poshtme e baktereve - formimi i sedimentit (i pakët ose i bollshëm, i thërrmueshëm, homogjen, fijor, etj.); Rritja parietale me ruajtjen e transparencës së mediumit ushqyes; Rritja sipërfaqësore e baktereve - një film në sipërfaqen e mediumit (i hollë, delikat, i pangjyrë ose i lagësht, i trashë, qartë i dukshëm me sy të lirë, i thatë i dendur me një sipërfaqe të rrudhur dhe ndonjëherë me lytha); Ngjyra e filmit, si mediumi ushqyes, varet nga pigmenti i prodhuar nga kultura në rritje e mikrobit.

Natyra e rritjes së mikroorganizmave në mjedise ushqyese gjysmë të lëngshme Kultura në studim inokulohet në një kolonë prej 0,2 - 0,5% agar gjysmë të lëngshëm. Aftësia e mikroorganizmit për të lëvizur përcaktohet - përhapet nga vendi i mbjelljes (injektimit) në mjedis me një injeksion në afërsi të murit të epruvetës.

E mërkurë Endo Diferenciale-diagnostike Përbërja: Baza - agar ushqyes Diff. faktor - laktozë Treguesi - fuksina bazë e çngjyrosur me sulfit natriumi Rritja e laktozës + koloni me ngjyrë të kuqe me shkëlqim metalik

E mërkurë Ploskirev selektiv, diagnostikues diferencial Përbërja: Baza - agar ushqyes Faktori zgjedhor - kripëra biliare, jeshile shkëlqyese, jod Diff. faktor - laktozë Treguesi - e kuqe neutrale Rritja e kolonive të laktozës + manaferrës

Salt agar Medium selektiv Përbërja: Baza - agar ushqyes Faktor selektiv - kripë 10% Treguesi - asnjë Rritja e kolonive rezistente ndaj kripës

Agar i verdhë-kripë (Chistovich) Zgjedhor, diagnostik Përbërja: Baza - agar ushqyes Faktori zgjedhor - kripë 10% Dif. faktori - e verdha e vezes Treguesi - jo Rritja e kolonive rezistente ndaj kripes + turbullira rreth kolonive per shkak te aktivitetit lecitovitellase

Mjeti tetrationat Muller-Kaufmann Mediumi është i destinuar për pasurim selektiv në zbulimin e baktereve të gjinisë Salmonella Përbërja: Baza - supë ushqyese Faktori zgjedhor - kripë e acidit selinoz Treguesi - jo Rritja e baktereve rezistente ndaj seline natriumit

Supë me kripë Mesatare zgjedhore Përbërësit: Baza - supë ushqyese Faktori zgjedhor - 6,5% Na. Treguesi Cl - asnjë Rritja e mikroorganizmave tolerantë ndaj kripës

Natyra e rritjes së mikroorganizmave në mjedise të dendura ushqyese. Shenjat kryesore: ü Madhësia - me pika (≤ 1 mm) - e madhe (4 - 6 mm dhe më shumë); ü Forma - e saktë (rrumbullakët); i parregullt (amoeboid), rizoid; ü Konturet e skajit - të njëtrajtshme ose të pabarabarta (të lëmuara, të valëzuara, etj.) ü Relievi i kolonive (kube, konveks i sheshtë, koloni me qendër të zhytur, etj. ü Sipërfaqja e kolonisë (mat ose me shkëlqim ( Format S-R); ü Ngjyra e kolonisë (pigmentimi); ü Struktura e kolonisë (granulare e imët ose e trashë); ü Konsistenca (viskoze, mukoze, pastë, etj.

Formimi i pigmentit të baktereve E kuqe-kafe (prodigiosin) Serratia marcessens Verdha-portokalli, (karotenoidet) Staphylococcus, Sarcina, M. tuberculosis gjini E zezë, kafe (melaninë) B. cubtilis, kërpudhat Candida Blu (pyocyanin) P. aeruginosa fluoreshente e verdhë-gjelbër ( pyoverdin) Gjinia Vibrio

Izolimi i kulturave të pastra: filtrimi përmes filtrave të membranës Mikroorganizmat në filtër Kafaze metalike për filtra bërthamorë

4.2. FAKTORËT BIOLOGJIK DHE MIKROBILOGJIK

Diagnoza bakteriologjike e etheve tifoide dhe etheve paratifoide A, B dhe C

Data e prezantimit: nga momenti i miratimit

1. ZHVILLUAR: FGUN Shën Petersburg NIIEM ato. Pasteur i Rospotrebnadzor (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "Akademia Mjekësore Shtetërore e Shën Petersburgut me emrin I.I. Mechnikov" e Agjencisë Federale për Shëndetësi dhe Zhvillim Social (A.G. Boytsov).

3. MIRATUAR nga titullari Shërbimi Federal mbi mbikëqyrjen në fushën e mbrojtjes së të drejtave të konsumatorit dhe mirëqenies njerëzore, Mjeku Kryesor Sanitar Shtetëror i Federatës Ruse G.G. Onishchenko 29 dhjetor 2007 0100/13745-07-34

4. PARAQITET nga momenti i miratimit.

5. PARAQITET PER HERE TE PARE.

1 zonë përdorimi

1 zonë përdorimi

1.1. Udhëzimet përcaktojnë parimet dhe veçoritë bazë të diagnozës bakteriologjike të etheve tifoide dhe etheve paratifoide A, B dhe C; përmban informacion modern rreth vetive biologjike të patogjenëve, rezistencës ndaj barnave antibakteriale, lëndëve ushqyese për izolimin e tyre dhe veçorive të diferencimit të patogjenëve tifo dhe paratifoide nga variantet e tjera serologjike të Salmonellës.

2. Lista e shkurtesave

ABP - ilaç antibakterial

BCA - agar sulfit bismut

MPU - institucion mjekësor dhe parandalues

MIC - përqendrimi minimal frenues

P - e ndërmjetme

U - e qëndrueshme

H - i ndjeshëm

RIF - reaksion imunofluoreshence

CNS - sistemi nervor qendror

Në tabela:

"+" - reagim pozitiv në ditën e parë;

"-" - reagim negativ për 4-20 ditë;

"(+)" - reagim pozitiv i vonuar për 2-20 ditë;

d - reaksione të ndryshme enzimatike.

Diferencimi në variante enzimatike është i mundur.

3. Dispozitat e përgjithshme

3.1. Ethet tifoide dhe paratifoja A, B dhe C janë infeksione antroponotike të zorrëve të shkaktuara nga Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B dhe Salmonella Paratyphi C. rrallë - paratifoi C.

3.2. Sëmundjet karakterizohen nga lezione ulceroze të sistemit limfatik të zorrës së hollë, bakteremi, ethe, ecuri klinike ciklike me intoksikim të rëndë, skuqje roseoloze në lëkurën e trungut, hepato- dhe splenomegalia. Kapsllëku është më i zakonshëm se diarreja. Ulçera e njollave Peyer të ileumit në rreth 1% të rasteve çon në gjakderdhje të zorrëve dhe perforimi i zorres me pasojat me te pafavorshme per pacientin.

3.3. Diagnoza e etheve tifoide dhe paratifos A, B dhe C bëhet në bazë të shenjave klinike të sëmundjes, duke marrë parasysh historinë epidemiologjike dhe të dhënat nga një ekzaminim laboratorik gjithëpërfshirës, ​​i cili përfshin metoda klasike bakteriologjike dhe serologjike. Diagnostifikimi bakteriologjik është i një rëndësie prioritare, sepse në këtë rast, është e mundur të merret informacioni më i plotë në lidhje me vetitë biologjike të patogjenit, duke përfshirë ndjeshmërinë e tij ndaj barnave antibakteriale.

3.4. Përdorimi i barnave antimikrobike për terapinë etiotropike të etheve tifoide dhe paratifoide, nga njëra anë, uli vdekshmërinë nga 10-20% në më pak se 1%, dhe nga ana tjetër, diagnozën e komplikuar laboratorike, sepse shpeshherë marrja e mostrave të materialit për hulumtime laboratorike kryhet pas fillimit të terapisë me antibiotikë. Ky fakt e bën të domosdoshëm qasjen më të kujdesshme ndaj çështjes së zgjedhjes së materialit për kërkim, marrjes së materialit në studim dhe teknikave të kërkimit.

3.5. Një tipar modern i epidemiologjisë së etheve tifoide është një rritje e mprehtë e shpeshtësisë së importimit (bartimit) të infeksionit nga territoret endemike për këtë sëmundje, vendet e afërta dhe të largëta jashtë vendit, si dhe infeksioni i banorëve rusë kur largohen për në këto vende dhe në procesin e migrimit brenda vendit. Karakteristikë tjetër është prania e një kontigjenti të madh me rrezik të lartë epidemiologjik në formën e personave pa vendbanim fiks, ndër të cilët regjistrohet një incidencë e lartë e etheve tifoide.

3.6. Këto udhëzime u hartuan për të unifikuar metodat e diagnostikimit bakteriologjik të etheve tifoide dhe paratifos A, B dhe C, si dhe interpretimin e saktë të rezultateve të një studimi laboratorik, duke marrë parasysh veçoritë moderne të klinikës, trajtimin dhe situatën epidemiologjike në zona të veçanta.

4. Indikacionet për diagnostifikimin bakteriologjik

Një tregues për ekzaminimin bakteriologjik të materialit biologjik për praninë e patogjenëve të etheve tifoide dhe etheve paratifoide A, B dhe C është nevoja për ekzaminim:

4.1) pacientët me ethe të dyshuar tifoide, si dhe me ethe me etiologji të panjohur, që zgjat 5 ose më shumë ditë;

4.2) personat që kanë pasur kontakt me të sëmurët me ethe tifoide dhe paratifoide A, B, C;

4.3) punonjësit e profesioneve, industrive dhe organizatave të caktuara pas pranimit në punë dhe sipas indikacioneve epidemiologjike;

4.4) personat para pranimit në spitale dhe sanatoriume të specializuara sipas indikacioneve klinike dhe epidemiologjike;

4.5) personat me regjistrimin për trajtim spitalor në spitale (departamente) të profilit psiko-neurologjik (psikosomatik), shtëpi pleqsh, konvikte për personat me sëmundje kronike mendore dhe lezione të SNQ dhe lloje të tjera të institucioneve të mbyllura me 24 orë. qëndroj;

4.6) pacientët me ethe tifoide dhe paratifoide pas zhdukjes së simptomave klinike të sëmundjes para daljes nga spitali;

4.7) personat të cilët kanë qenë të sëmurë me ethe tifoide dhe paratifo gjatë vëzhgimit dispens;

4.8) bartës të baktereve kronike të identifikuar në mesin e punonjësve të profesioneve, industrive dhe organizatave të caktuara, pas ripunësimit në këto ndërmarrje dhe objekte;

4.9) material seksional në rast të dyshimit për ethe tifoide dhe ethe paratifoide.

5. Logjistika e metodës

5.1. Testim standard dhe pajisje ndihmëse, instrumente matëse për laboratorët mikrobiologjikë.

5.2. Mjetet ushqyese, serumet diagnostike dhe reagentët kimikë për kultivimin, izolimin, identifikimin dhe përcaktimin e ndjeshmërisë ndaj barnave antibakteriale të agjentëve shkaktarë të etheve tifoide dhe paratifos A, B dhe C.

5.3. Për diagnozën laboratorike të sëmundjeve tifoide dhe paratifoide dhe zbulimin e bartësve të baktereve, duhet të përdoren media ushqyese dhe reagentë të miratuar për përdorim në territorin e Federatës Ruse në përputhje me procedurën e vendosur.

6. Diagnoza laboratorike e tifos dhe paratifos

6.1. Parimi i metodës bakteriologjike bazohet në zbulimin e mikroorganizmave të gjallë në substrate të ndryshme biologjike (gjak, urinë, feçe, biliare, palcë kockore, roseola) në varësi të fazës së sëmundjes. Për ta bërë këtë, një sasi e caktuar e materialit biologjik mbillet në mjedise të veçanta ushqyese, e ndjekur nga inkubimi në një termostat dhe identifikimi i kolonive të rritura të mikroorganizmave karakteristikë për S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B dhe S. Paratyphi. C, sipas vetive kulturore dhe enzimatike dhe karakteristikave antigjenike.

6.2. Vetëm një studim bakteriologjik mund të sigurojë një diagnozë të saktë etiologjike dhe kontroll të çlirimit të trupit nga patogjeni. Në një lidhje diagnoza diferenciale tifoja dhe ethet paratifoide, metoda e vetme është studimi laboratorik i materialit biologjik me izolimin e patogjenit dhe identifikimin e tij në nivelin e një varianti serologjik, tk. ecuria klinike e procesit infektiv jo gjithmone ben te mundur dallimin midis ketyre formave nozologjike.

7. Ekzaminimi bakteriologjik

7.1. Izolimi i agjentëve shkaktarë të etheve tifoide dhe paratifoideve A, B dhe C kryhet sipas të njëjtës skemë të ekzaminimit bakteriologjik të biomaterialeve.

7.2. Procedura për mbledhjen e materialit për analizat laboratorike për sëmundjet tifoide dhe paratifoide përcaktohet nga SP 3.1.1.2137-06.

7.3. Teknika për mbledhjen dhe transportimin e biomaterialeve në laboratorët mikrobiologjikë është përshkruar në MU 4.2.2039-05.

7.4. Materiali për ekzaminim bakteriologjik me qëllim të diagnostikimit të etheve tifoide dhe paratifoide janë:

gjaku;

jashtëqitje;

urinë;


Patogjenët gjithashtu mund të izolohen nga:

roseol;

palca e eshtrave;

Qumështi i gjirit.

Materialet për kërkime bakteriologjike për të identifikuar bartësit e baktereve, sipas SP 3.1.1.2137-06, janë:

jashtëqitje;

urinë;

biliare (përmbajtja duodenale).

7.5. Studimi i materialit seksional kryhet për të sqaruar diagnozën.

7.6. Mbledhja e materialit biologjik për kërkime laboratorike kryhet përpara fillimit të trajtimit etiotropik: nga një punonjës mjekësor që dyshon për një infeksion tifo-paratifo; në rast të sëmundshmërisë në grup dhe shpërthim - nga specialistë të institucioneve Rospotrebnadzor dhe personel të institucioneve mjekësore. Nga pacientët e shtruar në spital merret material për ekzaminim bakteriologjik zyra e pranimeve spitali.

7.7. Nga personat që kanë komunikuar me pacientë ose transportues (kontakte), grumbullimi i materialit bëhet nga punonjësit mjekësorë të objekteve shëndetësore dhe organizatave dhe institucioneve të tjera në vendin ku identifikohen pacientët.

7.8. Biomateriali për kërkime laboratorike shoqërohet me një drejtim të veçantë. Nuk lejohet dorëzimi i materialit nga vetë subjektet. Nëse dorëzimi në kohë i materialit është i pamundur, përdoren konservues dhe mjete transporti (Tabela 1).

8. Analiza bakteriologjike e gjakut

Një tregues për një analizë gjaku është një dyshim për sëmundje tifo-paratifoide ose një gjendje febrile me origjinë të panjohur (ethe me origjinë të panjohur), e vëzhguar për 5 ose më shumë ditë (SP 3.1.1.2137-06).

Raporti gjak - lëndë ushqyese duhet të jetë 1:10-1:60. Numri i mostrave të gjakut të marra në mënyrë të pavarur dhe koha e marrjes së tyre përcaktohet nga mjeku që merr pjesë sipas MU 4.2.2039-05 për ethe me origjinë të panjohur ose sipas MU 04-723/3 të Ministrisë së Shëndetësisë së BRSS ( 1984) për sëmundjet e dyshuara tifo-paratifoide. Në pacientët që marrin barna antibakteriale, mostrat duhet të mblidhen menjëherë përpara futjes (marrjes) të dozës tjetër të barit.

Në prani të etheve, është optimale të merret gjak në sfondin e një rritje të temperaturës së trupit (por jo në kulmin e temperaturës!). Mbjellja në mjedise ushqyese kryhet drejtpërdrejt në shtratin e pacientit.

Nëse dyshohet për sëmundje tifo-paratifoide, për kultivimin e gjakut mund të përdoret medium Rapoport, lëng biliar 20%, lëng mishi-pepton me shtimin e glukozës 1% (në flakon 100 ml). Kulturat e gjakut të përdorura më parë në ujë steril të distiluar (rubineti). Megjithatë, preferohet përdorimi i mjeteve speciale të kultivimit të gjakut.

Sasia e gjakut të mbjellë në kulmin e etheve mund të jetë 10 ml, në një datë të mëvonshme - deri në 20 ml (tek fëmijët - deri në 5 ml).

Për ethet me origjinë të panjohur që zgjasin më shumë se 5 ditë, si rregull duhet të ekzaminohen disa mostra gjaku. Marrja e mostrave të gjakut nga një venë kryhet sipas MU 4.2.2039-05. Kjo është e nevojshme për të dalluar baktereminë e vërtetë nga kontaminimi aksidental i gjakut gjatë venipunkturës (probabiliteti i kontaminimit të mostrës për shkak të shpimit aksidental të gjëndrës dhjamore ose të djersës është 3%). Në këtë rast, për kultivimin e gjakut përdoren dy mediume: 1) një medium për aerobet dhe anaerobet fakultative dhe 2) një medium për anaerobet e detyrueshme (për shembull, një medium "i dyfishtë" + mjedis tioglikoli sipas urdhrit të Ministrisë së Shëndetësisë. i BRSS i datës 12.04.85 N 535) ose një medium universal për aerobet dhe anaerobet.

Preferohet të përdorni media të prodhuara në mënyrë industriale të miratuara për përdorim në Rusi.

Të lashtat inkubohen në 37 °C për 10 ditë me shikim ditor. Në këtë rast, shishet me medium "të dyfishtë" anohen, duke larë pjesën e dendur të mediumit.

Në mungesë të shenjave të rritjes në ditën e 10-të, jepet një përgjigje negative.

Nëse ka shenja rritjeje (turbullira, skuqje e mediumit Rapoport, shfaqja e kolonive të dukshme në pjesën e dendur të mediumit "të dyfishtë"), mbjellja kryhet paralelisht në një mjedis polikarbohidrat dhe një mjedis të dendur në enët Petri ( agar gjaku në rast të etheve me origjinë të panjohur dhe Endo medium në rast të sëmundjeve të dyshuara tifoide paratifoide).

Mbjellja e drejtpërdrejtë në media polikarbohidrate kryhet për të zvogëluar kohën e studimit, bazuar në supozimin se kur kultivohet gjaku, rritja e monokulturës së patogjenit do të vërehet me një probabilitet të lartë. Veshja paralele në medium Endo ose agar gjaku është e nevojshme për të kontrolluar këtë supozim dhe për të izoluar një kulturë të pastër duke ndarë kolonitë individuale.

Nëse në këto mjedise vërehet rritja e monokulturës, atëherë mund të merren parasysh vetitë biokimike të mediumit polikarbohidrat. Për të kontrolluar pastërtinë e kulturës, është e nevojshme të kryhet një mikroskopi e një njollë nga një medium polikarbohidrat i njollosur me Gram. Në këtë fazë, është gjithashtu e mundur të vendoset një reaksion aglutinimi në xhami me serumet përkatëse aglutinuese O- dhe H-salmonella dhe të jepet një përgjigje paraprake.

Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me ethe të dyshuar tifoide dhe paratifoide është paraqitur në Fig.1.

Fig.1. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me tifo dhe paratifo të dyshuar

Fig.1. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me tifo dhe paratifo të dyshuar

Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me ethe me origjinë të panjohur është paraqitur në Fig. 2.

Fig.2. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me ethe me origjinë të panjohur

Fig.2. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të gjakut të pacientëve me ethe me origjinë të panjohur

Ecuria e identifikimit të mëtejshëm të kulturës nga vetitë kulturo-morfologjike, enzimatike dhe karakteristikat serologjike përshkruhet më tej në seksionet përkatëse.

9. Ekzaminimi bakteriologjik i feçeve

Mostrat e jashtëqitjes merren menjëherë pas defekimit nga një enë e dezinfektuar dhe e larë mirë, në fund të së cilës është vendosur një fletë letre e trashë e pastër. Materiali mblidhet duke përdorur një shpatull luge të montuar në kapakun e një ene sterile. Në mungesë të një ene me shpatull, për marrjen e materialit përdoret çdo instrument steril (spatull druri steril, unazë teli, lugë etj.). Në prani të papastërtive patologjike, është e nevojshme të zgjidhni zona që përmbajnë mukus, qelb, thekon, por pa gjak. Mostrat e jashtëqitjeve të lëngshme merren duke përdorur një pipetë sterile plastike Pasteur me një rezervuar të mbyllur.

Vëllimi i materialit që do të merret duhet të jetë së paku 2 g. arre; në rastin e jashtëqitjeve të lirshme shtresa e saj në enë duhet të jetë së paku 1.5-2.0 cm Materiali i vendosur në një enë sterile dorëzohet në laborator brenda 2 orëve.

Nëse materiali nuk mund të dorëzohet në laborator brenda 2 orëve, ai mblidhet në një konservues (sistem transporti me një medium). Vëllimi i materialit nuk duhet të kalojë vëllimin e mediumit.

Jashtëqitja duhet të homogjenizohet me kujdes në medium. Mostrat mund të ruhen përpara fillimit të studimit gjatë ditës në frigorifer (4-6 °C).

Mjetet e transportit dhe konservantët e përdorur për të izoluar agjentët shkaktarë të etheve tifoide dhe paratifoit A, B dhe C, si dhe patogjenë të tjerë të infeksioneve akute të zorrëve, janë paraqitur në Tabelën 1.

Tabela 1

Mjetet e transportit dhe konservantët që përdoren më së shpeshti për transportin e feçeve

Mostrat e jashtëqitjes të mbledhura direkt nga rektumi duke përdorur një tampon rektal përdoren kryesisht për të objektivizuar diagnozën (MU 4.2.2039-05). Materiali merret nga personeli paramjekësor. Si rregull, një sondë speciale për marrjen e një njollosje është pjesë e sistemit të transportit. Është e rëndësishme të theksohet se hyrja e mjeteve transportuese në mukozën e rektumit është e papranueshme! Prandaj, tamponi rektal duhet të zhytet në mjetin transportues vetëm pas marrjes së materialit. Pacientit i kërkohet të shtrihet në anën e tij me ijet të tërhequr drejt stomakut dhe të pasmet të ndara me pëllëmbët e duarve. Sonda-tamponi futet në anus në një thellësi prej 4-5 cm dhe, duke e rrotulluar butësisht rreth boshtit, materiali mblidhet nga kriptat e anusit. Hiqeni me kujdes sondën e shtupës dhe zhytni në mjetin transportues. Nuk lejohet transportimi i një tamponi pa medium.

Në laborator, inokulimi i mostrave të jashtëqitjes kryhet drejtpërdrejt në mjedise ushqyese të dendura diagnostikuese diferenciale dhe paralelisht në mjedisin pasurues.

Skema e ekzaminimit bakteriologjik të feçeve është paraqitur në Fig.3.

Fig.3. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të feces

Fig.3. Skema e ekzaminimit bakteriologjik të feces

Nga feçet vendase, përgatitet një suspension në një tretësirë ​​0,9% klorur natriumi në një raport 1:5-1:10, lihet për 30 minuta që grimcat e mëdha të vendosen. Pas kësaj, një pikë e supernatantit inokulohet në enë me lëndë ushqyese të dendura dhe 1 ml suspension inokulohet në mjedisin pasurues (raporti material-mesatar duhet të jetë 1:5).

Feçet e dorëzuara në laborator në një konservues (mjete transporti) duhet të homogjenizohen plotësisht në mjedis përpara inokulimit, pas së cilës materiali inokulohet drejtpërdrejt në media të ngurta dhe medium pasurues në të njëjtat përmasa si feçet vendase.

Mostrat e jashtëqitjes të mbledhura me një shtupë rektale ekzaminohen në mënyrë të ngjashme me jashtëqitje të dorëzuar në një konservues. Duhet mbajtur mend se një tampon rektal përmban më pak mikroorganizma në krahasim me jashtëqitjet vendase, kështu që doza e inokulimit duhet të rritet.

Zbulimi maksimal i S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B dhe S. Paratyphi C në feces arrihet duke përdorur mjete pasuruese, megjithëse në pacientët në periudhën akute të sëmundjes, patogjeni shpesh izolohet me inokulim të drejtpërdrejtë. Inokulimi në mjete pasuruese paralelisht me inokulimin direkt është i detyrueshëm!

Të gjitha inokulimet inkubohen në 37 °C në mjedise diagnostike diferenciale për 18-24 orë, në agar bismut-sulfit për 24-48 orë. Pas 24 orësh, mbjellja nga mjediset pasuruese kryhet në mjedise të dendura (agar bismut-sulfit ose Endo e mesme). Kolonitë karakteristike të këtyre patogjenëve, të rritura në mjedise të dendura, ekzaminohen në një mjedis polikarbohidrat.

Duhet të theksohet se teknika e përhapjes së materialit mbi sipërfaqen e enës me media të dendura duhet të sigurojë rritjen e kolonive të izoluara të një lloji tipik, të cilat mund të përdoren për të vlerësuar vizualisht vetitë kulturore të mikroorganizmit.

Bismut sulfit agar (BCA) është metoda e preferuar për izolimin e S. Typhi. Kolonitë tipike të S. Typhi janë të zeza dhe të rrethuara nga një buzë e zezë ose kafe me një shkëlqim metalik. Megjithatë, S. Typhi shpesh nuk prodhon nxirjen karakteristike të ICA kur ndodh rritje e bollshme, kështu që pllakat duhet të inokulohen për të lejuar rritjen e një kolonie të vetme.

Mostrat fekale mund të inokulohen në media standarde selektive për enterobakteret e miratuara për përdorim në Federatën Ruse. Megjithatë, agari sulfit bismut është metoda e preferuar për izolimin e S. tymhi. Ecuria e identifikimit të mëtejshëm të kulturave nga vetitë enzimatike dhe karakteristikat serologjike përshkruhet më tej në seksionet përkatëse.

10. Ekzaminimi bakteriologjik i urinës

Urinokultura kryhet për diagnozë që nga ditët e para të sëmundjes e deri në daljen e pacientit, si dhe për të identifikuar bartësin e baktereve. Meqenëse ekskretimi i tifos dhe paratifoit i patogjenit në urinë ndodh periodikisht dhe për një kohë të shkurtër, testet e urinës duhet të përsëriten në intervale prej 5-7 ditësh.

Duhet të respektohet rreptësisht Rregulla të përgjithshme mbledhja e urinës e përcaktuar në MU 4.2.2039-05. Pavarësisht nga mënyra e marrjes së urinës, ajo duhet të dorëzohet në laborator brenda 2 orëve.Në raste ekstreme, urina mund të ruhet gjatë natës në frigorifer.

Duhet mbajtur mend se, në varësi të përbërjes kimike të urinës, bakteret në të mund të vdesin gjatë ruajtjes dhe të shumohen.

Një rritje në jetëgjatësinë e materialit mund ta bëjë jashtëzakonisht të vështirë interpretimin e rezultatit.

Inokulimi i drejtpërdrejtë i urinës (ose sedimentit pas centrifugimit) kryhet pa pasurim paraprak në përputhje me urdhrin e Ministrisë së Shëndetësisë të BRSS N 535 për mediat e dendura diagnostikuese diferenciale të rekomanduara për salmonelën, duke përfshirë patogjenët tifoide dhe paratifoide. Në të njëjtën kohë, urina amtare inokulohet në mjedise pasuruese me përqendrim të dyfishtë në një raport 1:1, ose sedimenti i urinës inokulohet në media me përqendrim normal. Inokulimet vendosen në një termostat në 37 °C për 18-24 orë, dhe më pas mjedisi pasurues inokulohet në media të dendura diagnostikuese diferenciale. Kolonitë e rritura në mjedise të ngurta identifikohen nga vetitë kulturore-enzimatike dhe serologjike.

11. Ekzaminimi bakteriologjik i biliare (përmbajtja duodenale)

Biliari mblidhet në tre epruveta sterile ose enë sterile të disponueshme veçmas në porcione A, B, C sipas MU 4.2.2039-05 dhe dorëzohet në laborator.

Kryeni një studim të çdo porcioni (A, B, C) veç e veç ose përgatitni një përzierje prej tre porcionesh. Mostrat janë inokuluar:

në mediume të dendura diagnostike diferenciale (ICA, Endo, EMS, etj.) në sasinë 0,5 ml;

në një epruvetë (shishe) me lëng mishi ushqyes në raport 1:10. Nuk ka nevojë të inokulohet biliare në media pasuruese, si Vetë biliare është një terren i mirë mbarështues për patogjenët e tifos dhe paratifoit.

Mediat e inokuluara inkubohen me mbetje biliare në 37°C.

Pas 18-24 orësh, inokulimet ekzaminohen në mjedise të dendura ushqyese (rezultatet e rritjes në ICA merren parasysh pas 24 dhe 48 orësh) dhe bëhet rimbjellja e kolonive të dyshimta në një mjedis polikarbohidrat.

Nga supa e lëndës ushqyese, farat bëhen në media të dendura diagnostikuese diferenciale.

Nga bilia e mbetur në rast të një rezultati negativ të mbjelljes direkte, mbjelljet e përsëritura bëhen në media të dendura diagnostikuese diferenciale pas 18-24 orësh dhe në ditët 3, 5, 7 dhe 10.

Mikroorganizmat e rritur identifikohen nga vetitë kulturo-morfologjike, enzimatike dhe serologjike.

12. Ekzaminimi bakteriologjik i materialit nga roseola

Ekzaminimi bakteriologjik (“skrapimi” me roseola) kryhet në prani të roseolës së mirëpërcaktuar. Materiali mblidhet në mënyrë aseptike. Për ta bërë këtë, zona e lëkurës sipër roseolës trajtohet me 70% alkool etilik, më pas fshijeni me një shtupë pambuku të lagur me një tretësirë ​​sterile 0,9% klorur natriumi dhe thajeni me një shtupë sterile.

Materiali për kërkime (lëngu i indeve) merret duke gërryer lëkurën mbi roseola me bisturi. 1-2 pika supë biliare ose tretësirë ​​izotonike të klorurit të natriumit aplikohen në lëkurën e dëmtuar, përzihen me lëngun e indeve të dalë dhe mblidhen me një pipetë Pasteur ose një pajisje të ngjashme sterile të disponueshme në një epruvetë me një nga mjetet e pasurimit të lëngshëm (bila supë, medium Rapoport, etj.). Në laborator, inokulimi mbahet në 37 °C për 18-24 orë, i ndjekur nga inokulimi në mediume të dendura diagnostike diferenciale (Endo, EMS, ICA).

13. Ekzaminimi bakteriologjik i palcës kockore

Dihet mirë se në rast të konfirmimit laboratorik të diagnozës së tifos, më efektivi është ekzaminimi bakteriologjik i palcës së eshtrave (inokulimi i patogjenit është 90-95%). Edhe në pacientët me forma të buta dhe të fshira të etheve tifoide, të vështira për t'u njohur klinik, si dhe në sfondin e marrjes së barnave antimikrobike, shkalla e vaksinimit të mielokulturave është dukshëm më e lartë se ajo e kulturave të gjakut.

Megjithatë, në praktikë, ekzaminimi bakteriologjik i palcës së eshtrave kryhet shumë rrallë, vetëm për indikacione klinike të veçanta, në mungesë të të dhënave të tjera laboratorike që konfirmojnë diagnozën e etheve tifoide ose etheve paratifoide, tk. kjo procedurë invazive është mjaft traumatike. Marrja e mostrave të materialit për kërkime kryhet vetëm në spital me praninë e një specialisti përkatës.

Materiali për ekzaminim bakteriologjik (aspirati) në sasi prej 0,50-0,75 ml merret në mënyrë aseptike duke shpuar sternumin (dorezën ose trupin) dhe inokulohet në epruvetë me një nga mjetet pasuruese (sup biliare, medium Rapoport etj.).

Nëse aspirati nuk mund të inokulohet në mjedisin pasurues menjëherë pas punksionit, ai mblidhet në një tub steril dhe dërgohet menjëherë në laborator, ku kryhet inokulimi në mjedisin pasurues. Në laborator, inokulimet inkubohen në 37 °C për 18-24 orë, të ndjekura nga inokulimi në mjedise të dendura diagnostike diferenciale.

Kërkime të mëtejshme kryhen, si në studimin bakteriologjik të materialit tjetër biologjik.

14. Mjetet ushqyese dhe reagentët

Lista e mjediseve të kulturës për izolimin dhe identifikimin e patogjenëve infeksionet e zorrëve, në veçanti Enterobacteriaceae, është i gjerë dhe në mënyrë të qëndrueshme në zgjerim. Zgjedhja e mjediseve specifike përcaktohet kryesisht nga kushtet dhe traditat ekonomike lokale. Megjithatë, ajo duhet të udhëhiqet nga disa parime themelore.

14.1. Përshkrimi i mjedisit të kulturës duhet të tregojë se ai mund të përdoret jo vetëm për zbulimin e Salmonellës, por edhe Salmonella Typhi dhe S. Paratyphi A, B dhe C.

14.2. Mediat e dehidratuara të kulturës nga prodhuesit me reputacion duhet të preferohen mbi mediat e përgatitura direkt në laborator.

14.3. Çdo grup i mediumit të kulturës në laborator duhet të kontrollohet nga shtamet testuese (kontrolli i brendshëm i cilësisë).

14.4. Për diagnozën laboratorike të sëmundjeve tifoide dhe paratifoide dhe zbulimin e bartësve të baktereve, duhet të përdoren media ushqyese dhe reagentë të miratuar për përdorim në territorin e Federatës Ruse në përputhje me procedurën e vendosur.

15. Metodat për studimin e vetive enzimatike

Aktualisht, për të studiuar aktivitetin enzimatik të mikroorganizmave të familjes Enterobacteriaceae, duke përfshirë patogjenët tifoide dhe paratifoide, janë zhvilluar, prodhuar dhe regjistruar sisteme të ndryshme testimi diagnostikues vendas dhe të huaj (nga mediat klasike më të thjeshta Hiss në epruveta dhe pllaka deri tek analizuesit automatikë). . Nëse sistemet e testimit lejojnë identifikimin e një mikroorganizmi në nivelin e një gjinie dhe identifikimin e veçorive të aktivitetit enzimatik të shtameve, atëherë ato mund të përdoren për të identifikuar patogjenët e etheve tifoide dhe paratifoide. Metoda e punës me sistemet e testimit është e detajuar në udhëzimet për përdorim dhe ato duhet të respektohen rreptësisht.

16. Vetitë biologjike të patogjenëve

Shkaktarët e etheve tifoide dhe paratifoideve A, B dhe C i përkasin familjes Enterobacteriaceae, gjinisë Salmonella, specieve enterica, nënspecieve I (enterica) dhe kanë veti morfologjike, kulturore dhe enzimatike karakteristike për këtë nëngrup, lloj, gjini dhe familje.

Përfaqësuesit e gjinisë Salmonella species enterica kanë zhvilluar historikisht një situatë ku serovarët nuk përcaktoheshin nga një formulë antigjenike, si në bakteret e tjera, por nga emrat e sëmundjeve (njerëzore ose kafshë), vendin, qytetin ose rrugën ku ata ishin izoluar, etj. Është gabim të merren në konsideratë emrat e këtyre specieve, sepse nuk kanë status taksonomik. Megjithatë, emrat e serovarëve më të zakonshëm të Salmonellës janë aq të njohur sa është pothuajse e pamundur t'i zëvendësosh me formula antigjenike. Prandaj, në skemën moderne Kaufman-White, kur përcaktojmë Salmonella vetëm nëngrupin enterica I, në vend të përcaktimit të specieve, përdoret emri i serovarit, por ai shkruhet me shkronjë të madhe.

Kështu, emrat e plotë të agjentëve shkaktarë të etheve tifoide dhe etheve paratifoide janë si më poshtë:

Salmonella enterica subsp. enterica serovari Typhi;

Salmonella enterica subsp. enterica serovari Paratyphi A;

Salmonella enterica subsp. enterica serovari Paratyphi B;

Salmonella enterica subsp. serovari enterica Paratyphi C

Në praktikën e zakonshme, është e mundur të përdoren versione të shkurtuara të emrave:

Salmonella ser. Typhi ose Salmonella Typhi ose S. Typhi;

Salmonella ser. Paratyphi A ose Salmonella Paratyphi A ose S. Paratyphi A;

Salmonella ser. Paratyphi B ose Salmonella Paratyphi B ose S. Paratyphi B;

Salmonella ser. Paratyphi C ose Salmonella Paratyphi C ose S. Paratyphi C

16.1. Vetitë kulturore dhe morfologjike

Shufrat lëvizëse gram-negative nuk formojnë spore dhe kapsula; anaerobet fakultative rriten mirë në mjediset e zakonshme ushqyese.

Në një agar të thjeshtë ushqyes - pak konveks me një skaj të lëmuar dhe një sipërfaqe të lëmuar, të lagur me një shkëlqim të kolonisë më shumë se 1 mm.

Në mediat diagnostike diferenciale (që përmbajnë laktozë si një substancë diferencuese) - transparente, pa ngjyrë ose kaltërosh, dhe nganjëherë rozë ose ngjyrë e mjedisit të kolonisë (Endo, Ploskirev, EMS dhe mjete të tjera të ngjashme).

Në SS-arape, koloni me ngjyrë mesatare me qendër të zezë.

Në mjedisin bismut-sulfit, kolonitë e izoluara të S. Typhi, S. Paratyphi B janë të zeza me një shkëlqim metalik karakteristik; mediumi nën koloni është i lyer me ngjyrë të zezë. Kolonitë e S. Paratyphi A janë të gjelbërta, të lehta në ngjyrën e mesme, të buta.

Llojet e S. Paratyphi B (agjenti shkaktar i paratifoit B) në agarin e mishit-peptonit mund të formojnë një mur mukoid të ngritur përgjatë periferisë së kolonive. Boshti i mukozës zhvillohet për 2-5 ditë kur të korrat ruhen në temperaturën e dhomës. Kjo shenjë nuk është e përhershme dhe diagnostike.

16.2. Vetitë enzimatike

Studimi i vetive enzimatike kryhet në lidhje me një grup karbohidratesh, alkoolesh polihidrike, aminoacide dhe përbërje të tjera organike të përdorura në identifikimin dhe studimin e salmonelës dhe enterobaktereve të tjera. Si rregull, në laboratorët praktikë përdoren një numër i vogël testesh për të identifikuar gjinitë kryesore që janë pjesë e familjes së baktereve të zorrëve. Karakteristikat e vetive enzimatike të Salmonellës, duke përfshirë agjentët shkaktarë të etheve tifoide dhe paratifoit A, B dhe C, janë paraqitur në Tabelën 2.

tabela 2

Vetitë enzimatike të patogjenëve të etheve tifoide dhe paratifoideve A, B, C

Një gabim ka ndodhur

Pagesa nuk u krye për shkak të një gabimi teknik, fonde nga llogaria juaj
nuk janë shlyer. Mundohuni të prisni disa minuta dhe përsërisni pagesën përsëri.