8 बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान विधि इसके चरण। बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति के चरण। भोले लिम्फोसाइटों का रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स

20. बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति के लक्षण

सांस्कृतिक (बैक्टीरियोलॉजिकल) अनुसंधान विधि - पोषक माध्यमों पर संवर्धन करके सूक्ष्मजीवों (बैक्टीरिया) की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने और पहचानने के उद्देश्य से विधियों का एक सेट।

एक शुद्ध संस्कृति एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों का एक संग्रह है। सबसे अधिक बार, एक अलग कॉलोनी (एक एकल माइक्रोबियल सेल की संतान) का चयन और खेती करके एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त की जाती है।

विधि कदम:

1. अनुसंधान के लिए सामग्री का संग्रह।

2. शुद्ध संस्कृति का अलगाव और उसकी पहचान।

3. निष्कर्ष।

अनुसंधान के लिए सामग्री का संग्रह।अध्ययन की गई सामग्री का प्रकार अध्ययन के उद्देश्य पर निर्भर करता है (निदान - रोगी से; महामारी विज्ञान विश्लेषण - पर्यावरण, भोजन, रोगी और (या) बैक्टीरिया वाहक से)।

शुद्ध संस्कृति का अलगाव. 3 या 4 चरण शामिल हैं:

1. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए घने पोषक माध्यम (अधिमानतः विभेदक निदान या चयनात्मक) के साथ एक कप पर सामग्री की बुवाई (प्रारंभिक माइक्रोस्कोपी के बाद)। यह सबसे अधिक बार यांत्रिक पृथक्करण की विधि द्वारा निर्मित होता है। कुछ मामलों में (उदाहरण के लिए, रक्त), सामग्री को एक तरल संवर्धन माध्यम में पूर्व-बीज किया जाता है, इसके बाद अगर माध्यम के साथ एक प्लेट पर उपसंस्कृति होती है। कभी-कभी टीकाकरण से पहले सामग्री का एक चयनात्मक उपचार किया जाता है (पृथक सूक्ष्मजीव के गुणों को ध्यान में रखते हुए, उदाहरण के लिए, प्रतिरोधी बैक्टीरिया को अलग करने के लिए एक एसिड या क्षार के साथ उपचार)। 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर खेती की जाती है। विभिन्न प्रकार के जीवाणुओं के लिए खेती का समय अलग-अलग हो सकता है।

2(3): क) अगर प्लेट (सांस्कृतिक लक्षण) पर उपनिवेशों का अध्ययन, सबसे विशिष्ट लोगों का चयन; बी) इन कॉलोनियों से धुंधला हो जाना (ग्राम या अन्य विधियों के अनुसार) तैयार करना; ए) संचय माध्यम पर अध्ययन की गई शेष कॉलोनी की स्क्रीनिंग करना और इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टैट में बढ़ना।

3(4). संचय माध्यम पर प्राप्त संस्कृति की शुद्धता का अध्ययन। इसके साथ

उद्देश्य एक धब्बा, दाग (आमतौर पर ग्राम के अनुसार) तैयार करना है, सूक्ष्म रूप से अध्ययन करना

रूपात्मक और टिंक्टोरियल समरूपता (विभिन्न क्षेत्रों में देखने के लिए)।

4(5)। शुद्ध संस्कृति की पहचान।

निष्कर्ष।संदर्भ (विशिष्ट) उपभेदों के गुणों की तुलना में विशेषताओं की समग्रता के अनुसार, सामग्री से पृथक सूक्ष्मजीव के प्रकार का संकेत दिया जाता है।

विधि मूल्यांकन:

लाभ:अपेक्षाकृत उच्च संवेदनशीलता और सटीकता, परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं की संख्या निर्धारित करने की क्षमता, साथ ही एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता; सीमाएं:सापेक्ष अवधि, विधि महंगी है।

21. एरोबेस और एनारोबेस के लिए पोषक माध्यम। पोषक मीडिया, वर्गीकरण के लिए आवश्यकताएँ।

आवश्यकताएं:

मीडिया पौष्टिक होना चाहिए

निश्चित ph . होना चाहिए

आइसोटोनिक होना चाहिए, अर्थात। माध्यम में आसमाटिक दबाव सेल के समान होना चाहिए।

नम होना चाहिए और बहुत बहना नहीं चाहिए

एक निश्चित रेडॉक्स क्षमता होनी चाहिए

बाँझ होना चाहिए

एकीकृत होना चाहिए, अर्थात्। व्यक्तिगत अवयवों की निरंतर मात्रा में होते हैं।

पोषक मीडिया को विभाजित किया जा सकता है:

ए) उत्पत्ति

1) प्राकृतिक - प्राकृतिक भोजन (मांस, दूध, आलू);

2) कृत्रिम - विशेष रूप से बढ़ते रोगाणुओं के लिए तैयार: - प्राकृतिक उत्पादों से मीडिया (मांस का पानी, मांस-पेप्टोन शोरबा (एमबीबी), मांस-पेप्टोन अगर (एमपीए), - एक निरंतर संरचना नहीं होना; - सिंथेटिक पोषक तत्व - सख्ती से समाधान आसुत जल में लवण, अमीनो एसिड, नाइट्रोजनस बेस, विटामिन की परिभाषित मात्रा - एक निरंतर संरचना है, टीकों, प्रतिरक्षा सीरा और एंटीबायोटिक दवाओं के उत्पादन में सूक्ष्मजीवों और सेल संस्कृतियों को विकसित करने के लिए उपयोग किया जाता है;

बी) नियुक्ति के द्वारा:

1) सामान्य प्रयोजन (एमपीबी, एमपीए) - अधिकांश रोगाणु उन पर उगते हैं;

2) वैकल्पिक - मिश्रण से एक प्रकार के रोगाणुओं के विकास को चुनिंदा रूप से बढ़ावा देना (उदाहरण के लिए, स्टेफिलोकोसी के लिए जर्दी-नमक अगर);

3) डिफरेंशियल डायग्नोस्टिक - एक प्रकार के माइक्रोब को पर्यावरण की उपस्थिति से दूसरों से अलग करने की अनुमति दें (उदाहरण के लिए, एंडो, लेविन मीडिया रोगाणुओं के आंतों के समूह के लिए)।

इसके अलावा, पर निर्भर करता है उपयोग के उद्देश्यशुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की योजना में, निम्नलिखित मीडिया को उद्देश्य से प्रतिष्ठित किया जा सकता है:

1) संवर्धन - रोगज़नक़ से जुड़े रोगाणुओं के विकास को रोकना;

2) पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए;

3) शुद्ध संस्कृति का संचय;

बी) संगति:

1) तरल;

2) अर्ध-तरल (0.5-0.7% की एकाग्रता में अगर-अगर के अलावा);

3) घना - 1% से ऊपर।

बैक्टीरिया का अध्ययन मनुष्यों के लिए बहुत व्यावहारिक महत्व रखता है। आज तक, बड़ी संख्या में प्रोकैरियोट्स की खोज की गई है, जो रोगजनकता, वितरण क्षेत्र, आकार, आकार, फ्लैगेला की संख्या और अन्य मापदंडों में एक दूसरे से भिन्न होते हैं। इस स्ट्रेन का विस्तार से अध्ययन करने के लिए, एक बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति का उपयोग किया जाता है।

कौन से सेल तरीके हैं?

यह निर्धारित करने के लिए कि क्या बैक्टीरिया रोगजनक हैं, विभिन्न तरीकों से संस्कृति की जांच की जाती है। उनमें से:

1. बैक्टीरियोस्कोपिक विधि।

2. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि।

3. जैविक विधि।

बैक्टीरियोस्कोपिक और बैक्टीरियोलॉजिकल प्रोकैरियोटिक कोशिकाओं के साथ सीधे काम पर आधारित होते हैं, जब प्रायोगिक जानवरों के जीवित जीवों पर ऐसी कोशिकाओं के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए जैविक विश्लेषण की आवश्यकता होती है। रोग के कुछ लक्षणों के प्रकट होने की डिग्री के अनुसार, वैज्ञानिक किसकी उपस्थिति या अनुपस्थिति के बारे में निष्कर्ष निकाल सकता है रोगजनक जीवाणुनमूने में, साथ ही स्वाभाविक रूप से पशु के शरीर में उन्हें अपनी संस्कृति प्राप्त करने और अन्य कार्यों में उपयोग करने के लिए प्रचारित करते हैं।

अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल विधि बैक्टीरियोस्कोपिक से भिन्न होती है। पहले में, जीवित प्रोकैरियोट्स की एक विशेष रूप से तैयार संस्कृति का विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है, जबकि दूसरे में, कांच की स्लाइड पर मृत या जीवित कोशिकाओं के साथ काम किया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति के चरण। कीटाणु-विज्ञान

जीवाणु संस्कृति के गुणों का अध्ययन करने का सिद्धांत प्रोकैरियोटिक कोशिकाओं के अध्ययन का लक्ष्य निर्धारित करने वाले सूक्ष्म जीवविज्ञानी दोनों के लिए उपयोगी हो सकता है, और प्रयोगशाला सहायकों के लिए जिसका कार्य बैक्टीरिया की रोगजनकता या गैर-रोगजनकता स्थापित करना है, और फिर रोगी का निदान करना है।

बैक्टीरिया के अध्ययन की पद्धति को तीन चरणों में बांटा गया है:

1. मूल नमूने से बैक्टीरिया का अलगाव।

2. जीवाणुओं को बोना और उगाना उनके गुणों का अध्ययन।

प्रथम चरण

नमूना, या स्मीयर, माध्यम की मुक्त सतह से या रोगी से लिया जाता है। इस प्रकार, हमें कई प्रकार के जीवाणुओं का "कॉकटेल" मिलता है जिसे पोषक माध्यम पर बोया जाना चाहिए। कभी-कभी शरीर में वितरण के उनके फोकस को जानकर, आवश्यक बैक्टीरिया को तुरंत अलग करना संभव हो जाता है।

दो या तीन दिनों के बाद, वांछित कालोनियों का चयन किया जाता है और एक बाँझ लूप की मदद से पेट्री डिश के ठोस मीडिया पर बोया जाता है। कई प्रयोगशालाएं टेस्ट ट्यूब के साथ काम करती हैं, जिसमें ठोस या तरल पोषक तत्व हो सकते हैं। इस प्रकार सूक्ष्म जीव विज्ञान में अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति को अंजाम दिया जाता है।

दूसरा चरण

बैक्टीरिया की अलग-अलग कॉलोनियों को प्राप्त करने के बाद, एक सीधा मैक्रो- और माइक्रोएनालिसिस किया जाता है। कॉलोनियों के सभी मापदंडों को मापा जाता है, उनमें से प्रत्येक का रंग और आकार निर्धारित किया जाता है। पेट्री डिश पर और फिर शुरुआती सामग्री में कॉलोनियों को गिनना असामान्य नहीं है। रोगजनक बैक्टीरिया के विश्लेषण में यह महत्वपूर्ण है, जिसकी संख्या रोग की डिग्री पर निर्भर करती है।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च विधि, जिसका दूसरा चरण सूक्ष्मजीवों के व्यक्तिगत उपनिवेशों का अध्ययन है, को बैक्टीरिया के विश्लेषण के लिए एक जैविक विधि से जोड़ा जा सकता है। इस स्तर पर काम करने का एक अन्य लक्ष्य स्रोत सामग्री की मात्रा में वृद्धि करना है। यह एक पोषक माध्यम पर किया जा सकता है, या आप जीवित प्रायोगिक जीवों पर विवो में एक प्रयोग कर सकते हैं। रोगजनक बैक्टीरिया गुणा करेंगे, और परिणामस्वरूप, रक्त में लाखों प्रोकैरियोटिक कोशिकाएं होंगी। लिए गए रक्त से जीवाणुओं की आवश्यक कार्यशील सामग्री तैयार करना आसान है।

तीसरा चरण

अध्ययन का सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा जीवाणु संस्कृति के रूपात्मक, जैव रासायनिक, विषाक्त और एंटीजेनिक गुणों का निर्धारण है। एक पोषक माध्यम पर पूर्व-साफ संस्कृतियों के साथ-साथ माइक्रोस्कोप के तहत तैयारी (अक्सर दागदार) के साथ काम किया जाता है।

एक या दूसरे व्यवस्थित समूह के लिए रोगजनक या अवसरवादी बैक्टीरिया से संबंधित स्थापित करने के लिए, साथ ही साथ दवाओं के लिए उनके प्रतिरोध को निर्धारित करने के लिए, अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल विधि अनुमति देती है। स्टेज 3 - एंटीबायोटिक्स, यानी पर्यावरण में दवाओं की सामग्री की स्थितियों में बैक्टीरिया कोशिकाओं के व्यवहार का विश्लेषण।

किसी विशेष रोगी के लिए आवश्यक, और सबसे महत्वपूर्ण, प्रभावी दवाओं को निर्धारित करना आवश्यक होने पर किसी संस्कृति के एंटीबायोटिक प्रतिरोध का अध्ययन बहुत व्यावहारिक महत्व का होता है। यह वह जगह है जहां अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल विधि मदद कर सकती है।

पोषक माध्यम क्या है?

विकास और प्रजनन के लिए, बैक्टीरिया पहले से तैयार पोषक माध्यम में होना चाहिए। संगति से, वे तरल या ठोस हो सकते हैं, और मूल रूप से - सब्जी या जानवर।

पोषक मीडिया के लिए बुनियादी आवश्यकताएं:

1. बाँझपन।

2. अधिकतम पारदर्शिता।

3. अम्लता, जल गतिविधि और अन्य जैविक मूल्यों के इष्टतम संकेतक।

पृथक कालोनियों को प्राप्त करना

1. ड्राईगल्स्की विधि। यह इस तथ्य में शामिल है कि जीवाणु लूप पर एक स्मीयर लगाया जाता है विभिन्न प्रकार केसूक्ष्मजीव। यह लूप पोषक माध्यम के साथ पहले पेट्री डिश के साथ पारित किया जाता है। इसके अलावा, लूप को बदले बिना, दूसरे और तीसरे पेट्री डिश पर अवशिष्ट सामग्री की विधि की जाती है। तो, कॉलोनी के अंतिम नमूनों पर, बैक्टीरिया को बहुत सघनता से नहीं बोया जाएगा, जिससे काम के लिए आवश्यक बैक्टीरिया को खोजने की क्षमता सरल हो जाएगी।

2. कोच की विधि। यह पिघले हुए पोषक माध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब का उपयोग करता है। बैक्टीरिया के स्मीयर के साथ एक लूप या पिपेट वहां रखा जाता है, जिसके बाद टेस्ट ट्यूब की सामग्री को एक विशेष प्लेट पर डाला जाता है। अगर (या जिलेटिन) कुछ समय बाद जम जाता है, और इसकी मोटाई में वांछित सेल कॉलोनियों को खोजना आसान होता है। काम शुरू करने से पहले टेस्ट ट्यूब में बैक्टीरिया के मिश्रण को पतला करना महत्वपूर्ण है ताकि सूक्ष्मजीवों की एकाग्रता बहुत अधिक न हो।

जिसके चरण बैक्टीरिया की वांछित संस्कृति के अलगाव पर आधारित हैं, इन दो विधियों के बिना पृथक कालोनियों को खोजने के लिए नहीं कर सकते।

एंटीबायोटिकोग्राम

दृष्टिगत रूप से, जीवाणुओं की दवाओं के प्रति प्रतिक्रिया को दो व्यावहारिक तरीकों से देखा जा सकता है:

1. पेपर डिस्क की विधि।

2. एक तरल माध्यम में बैक्टीरिया और एंटीबायोटिक का कमजोर पड़ना।

पेपर डिस्क विधि में सूक्ष्मजीवों की संस्कृति की आवश्यकता होती है जो एक ठोस पोषक माध्यम पर उगाए गए हैं। ऐसे माध्यम पर एंटीबायोटिक्स में भीगे हुए गोल कागज के कुछ टुकड़े डालें। यदि दवा बैक्टीरिया की कोशिकाओं के बेअसर होने का सफलतापूर्वक मुकाबला करती है, तो इस तरह के उपचार के बाद कालोनियों से रहित क्षेत्र होगा। यदि एंटीबायोटिक की प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो बैक्टीरिया जीवित रहेंगे।

तरल पोषक माध्यम का उपयोग करने के मामले में, पहले बैक्टीरिया की संस्कृति के साथ कई टेस्ट ट्यूब तैयार करें अलग डिग्रीप्रजनन। इन परखनलियों में प्रतिजैविक मिलाए जाते हैं, और दिन के दौरान पदार्थ और सूक्ष्मजीवों के बीच परस्पर क्रिया की प्रक्रिया देखी जाती है। अंत में, एक उच्च-गुणवत्ता वाला एंटीबायोग्राम प्राप्त किया जाता है, जिसके अनुसार कोई किसी दिए गए संस्कृति के लिए दवा की प्रभावशीलता का न्याय कर सकता है।

विश्लेषण के मुख्य कार्य

अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति के लक्ष्यों और चरणों को यहां सूचीबद्ध किया गया है।

1. प्रारंभिक सामग्री प्राप्त करें जिसका उपयोग जीवाणु कालोनियों को अलग करने के लिए किया जाएगा। यह किसी भी वस्तु की सतह, श्लेष्मा झिल्ली या मानव अंग की गुहा, रक्त परीक्षण से एक धब्बा हो सकता है।

2. एक ठोस पोषक माध्यम पर। 24-48 घंटों के बाद, पेट्री डिश पर विभिन्न प्रकार के बैक्टीरिया की कॉलोनियां पाई जा सकती हैं। हम रूपात्मक और / या जैव रासायनिक मानदंडों के अनुसार वांछित का चयन करते हैं और इसके साथ आगे का काम करते हैं।

3. परिणामी संस्कृति का प्रजनन। बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति जीवाणु संस्कृतियों की संख्या बढ़ाने की यांत्रिक या जैविक पद्धति पर आधारित हो सकती है। पहले मामले में, ठोस या तरल पोषक माध्यम के साथ काम किया जाता है, जिस पर बैक्टीरिया थर्मोस्टैट में गुणा करते हैं और नए उपनिवेश बनाते हैं। जीवाणुओं की संख्या बढ़ाने के लिए जैविक विधि के लिए प्राकृतिक परिस्थितियों की आवश्यकता होती है, इसलिए यहां प्रायोगिक पशु सूक्ष्मजीवों से संक्रमित हो जाता है। कुछ दिनों के बाद, रक्त के नमूने या स्मीयर में कई प्रोकैरियोट्स पाए जा सकते हैं।

4. शुद्ध संस्कृति के साथ काम करें। बैक्टीरिया की व्यवस्थित स्थिति, साथ ही साथ रोगजनकों से संबंधित होने के लिए, रूपात्मक और जैव रासायनिक विशेषताओं के अनुसार कोशिकाओं का गहन विश्लेषण करना आवश्यक है। सूक्ष्मजीवों के रोगजनक समूहों का अध्ययन करते समय, यह जानना महत्वपूर्ण है कि एंटीबायोटिक दवाओं की क्रिया कितनी प्रभावी है।

ये था सामान्य विशेषताएँजीवाणु अनुसंधान विधि।

विश्लेषण की विशेषताएं

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च का मुख्य नियम अधिकतम बाँझपन है। यदि आप टेस्ट ट्यूब के साथ काम कर रहे हैं, तो बैक्टीरिया की संस्कृतियों और उपसंस्कृति को केवल एक गर्म स्पिरिट लैंप पर ही किया जाना चाहिए।

बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति के सभी चरणों में एक विशेष लूप या पाश्चर पिपेट के उपयोग की आवश्यकता होती है। अल्कोहल लैंप की लौ में दोनों उपकरणों का पूर्व-उपचार किया जाना चाहिए। पाश्चर पिपेट के लिए, थर्मल नसबंदी से पहले चिमटी के साथ पिपेट की नोक को तोड़ना आवश्यक है।

बैक्टीरिया को बोने की तकनीक की भी अपनी विशेषताएं हैं। सबसे पहले, ठोस मीडिया पर टीका लगाते समय, अगर की सतह पर एक जीवाणु लूप पारित किया जाता है। लूप, निश्चित रूप से, सतह पर पहले से ही सूक्ष्मजीवों का एक नमूना होना चाहिए। इनोक्यूलेशन का भी अभ्यास किया जाता है, ऐसे में लूप या पिपेट पेट्री डिश के नीचे तक पहुंच जाना चाहिए।

तरल मीडिया के साथ काम करते समय, टेस्ट ट्यूब का उपयोग किया जाता है। यहां यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि तरल पदार्थ प्रयोगशाला के कांच के बने पदार्थ या कॉर्क के किनारों को नहीं छूते हैं, और उपयोग किए गए उपकरण (पिपेट, लूप) विदेशी वस्तुओं और सतहों को नहीं छूते हैं।

जैविक अनुसंधान पद्धति का मूल्य

बैक्टीरियल नमूना विश्लेषण के अपने व्यावहारिक अनुप्रयोग हैं। सबसे पहले, अनुसंधान की बैक्टीरियोलॉजिकल पद्धति का उपयोग चिकित्सा में किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, सही निदान स्थापित करने के साथ-साथ उपचार के सही पाठ्यक्रम को विकसित करने के लिए रोगी के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन करना आवश्यक है। एक एंटीबायोग्राम यहां मदद करता है, जो रोगज़नक़ के खिलाफ दवाओं की गतिविधि दिखाएगा।

तपेदिक, आवर्तक बुखार या सूजाक जैसी खतरनाक बीमारियों का पता लगाने के लिए प्रयोगशाला में जीवाणु विश्लेषण का उपयोग किया जाता है। इसका उपयोग टॉन्सिल, अंग गुहाओं की जीवाणु संरचना का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है।

पर्यावरण के संदूषण को निर्धारित करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति का उपयोग किया जा सकता है। किसी वस्तु की सतह से स्मीयर की मात्रात्मक और गुणात्मक संरचना के आंकड़ों के अनुसार, सूक्ष्मजीवों द्वारा इस वातावरण की जनसंख्या की डिग्री निर्धारित की जाती है।

पाठ का उद्देश्य: जानना सूक्ष्मजीवों की खेती के सिद्धांत, पोषक माध्यम, उनका वर्गीकरण; सूक्ष्म जीव विज्ञान और चिकित्सा में उपयोग की जाने वाली नसबंदी और कीटाणुशोधन विधियां; बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक विधि के चरण संक्रामक रोग.

करने में सक्षम हो बैक्टीरिया (एरोबेस और एनारोबेस) की खेती के लिए उपकरण का उपयोग करें, साधन चुनें, विशिष्ट कार्यों के अनुसार नसबंदी और कीटाणुशोधन का तरीका, संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के पहले चरण को पूरा करें (घने और तरल पर परीक्षण सामग्री का टीकाकरण) एरोबिक सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के लिए पोषक तत्व मीडिया)।

1. स्वाध्याय के लिए प्रश्न:

1. पोषक तत्व मीडिया के लिए संरचना और आवश्यकताएं

2. संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण

3. सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्टिक

4. कीटाणुशोधन, तरीके और कीटाणुशोधन की प्रभावशीलता का नियंत्रण

5. नसबंदी, तरीके, उपकरण और नसबंदी के तरीके

6. नसबंदी की प्रभावशीलता का निर्धारण करने के तरीके

7. प्रजाति, नस्ल, कॉलोनी, सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति

8. सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके

9. संक्रामक रोगों के निदान के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि। एरोबेस के अलगाव के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल विधि के पहले चरण का उद्देश्य और क्रम

10. तरल और ठोस पोषक माध्यम पर सूक्ष्मजीवों के टीकाकरण की तकनीक

11. अवायवीय सूक्ष्मजीवों की खेती की विशेषताएं। अवायवीय जीवाणुओं की खेती के लिए प्रयुक्त उपकरण और उपकरण

2. सुरक्षा प्रश्न:

1) पोषक माध्यमों की आवश्यकताएँ लिखिए

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2) पोषक माध्यमों का वर्गीकरण लिखिए

क) संगति द्वारा (उदाहरणों के साथ, अगर-अगर की एकाग्रता को इंगित करें):

बी) द्वारा इच्छित उद्देश्य(परिभाषित करें, उदाहरण दें)

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3) नसबंदी के तरीके लिखिए

ए) का उपयोग करना उच्च तापमान ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

बी) उच्च तापमान के उपयोग के बिना

4) नसबंदी के लिए उपकरणों की सूची बनाएं

5) एक नोटबुक में लिखें a) नसबंदी व्यवस्था को नियंत्रित करने के तरीके

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ख) पोषक माध्यमों की बंध्यता की निगरानी के तरीके

सी) उपकरणों, ड्रेसिंग, सिवनी सामग्री, आदि की बाँझपन को नियंत्रित करने के तरीके

6) एरोबिक्स की खेती के सभी तरीकों की सूची बनाएं

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

7) अवायवीय खेती की सभी विधियों की सूची बनाएं

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8) बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक पद्धति की योजना का अध्ययन करें, विधि के चरणों का नाम दें

बैक्टीरियोलॉजिकल शोध पद्धति का उद्देश्य और योजना लिखिए

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का उद्देश्य

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बैक्टीरियोलॉजिकल विधि की योजना

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पोषक माध्यम से स्वयं को परिचित कराएं और "पोषक माध्यम" तालिका भरें।

तालिका भरें "नसबंदी के बुनियादी तरीके"

आधार पाठ

पोषक मीडिया के लिए संरचना और आवश्यकताएं

सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करने, उनके आकारिकी और शरीर विज्ञान की विशेषताओं का अध्ययन करने के साथ-साथ प्रयोगशाला और उत्पादन स्थितियों में शुद्ध संस्कृतियों के रूप में सूक्ष्मजीवों को संरक्षित करने के लिए पोषक माध्यम आवश्यक हैं।

पोषक माध्यम को निम्नलिखित आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए:

1. पोषण मूल्य (पूर्णता) - रोगाणुओं के जीवन के लिए आवश्यक कारकों की सामग्री - कार्बन, नाइट्रोजन, सल्फर, ऊर्जा स्रोत, सूक्ष्मजीवों द्वारा अवशोषण के लिए सुलभ रूप में आवश्यक अकार्बनिक आयनों के स्रोत।

2. 0.85% NaCl द्वारा निर्मित आइसोटोनिटी (पोषक माध्यम में लवण की सांद्रता माइक्रोबियल सेल में उनकी एकाग्रता के अनुरूप होनी चाहिए)।

3. कई जैव रासायनिक मापदंडों के इष्टतम मूल्य: हाइड्रोजन आयनों की सांद्रता (पीएच रेंज 4.5-8.5, आमतौर पर 7.2-7.4), रेडॉक्स क्षमता (एनारोबेस के लिए एह - कम 0.0120-0.060 वी, एरोबेस के लिए - 0.080 से अधिक) वी), आसमाटिक दबाव।

4. पर्याप्त आर्द्रता (घने मीडिया के लिए कम से कम 60%) रखें, क्योंकि रोगाणु प्रसार और परासरण के नियमों पर फ़ीड करते हैं।

5. एक निश्चित चिपचिपाहट (पदार्थों के प्रसार के लिए सबसे इष्टतम)।

6. जीवाणु वृद्धि की कल्पना करने के लिए पारदर्शिता।

7. बाँझपन।

संस्कृति मीडिया के घटक

प्रोटीन सूक्ष्मजीवों के लिए नाइट्रोजन का स्रोत हैं, लेकिन अधिकांश रोगाणु देशी प्रोटीन को आत्मसात करने में असमर्थ हैं, इसलिए अम्लीय और एंजाइमी प्रोटीन दरार के उत्पादों का उपयोग किया जाता है: पेप्टोन, कैसिइन। कृत्रिम पोषक माध्यम के प्रारंभिक घटक हैं मांस का पानी, कैसिइन के अम्लीय और एंजाइमेटिक हाइड्रोलाइज़ेट, पेप्टोन, और सोडियम क्लोराइड को भी आधार में जोड़ा जाता है। मांस के पानी में खनिज, कार्बोहाइड्रेट, विटामिन होते हैं। खाद्य एसिड कैसिइन डेयरी उद्योग का अपशिष्ट है, इसमें अमीनो एसिड का एक पूरा सेट होता है और उच्च पोषण मूल्य की विशेषता होती है। पेप्टोन अधूरे प्रोटीन पाचन का एक उत्पाद है, जो मांस या मछली उत्पादों या दूध कैसिइन के उत्पादन से अपशिष्ट उत्पादों के एंजाइमेटिक या अम्लीय हाइड्रोलिसिस द्वारा प्राप्त किया जाता है। कम मात्रा में अमीनो एसिड के एल्बमोज, पेप्टोन और पॉलीपेप्टाइड होते हैं, उनकी संरचना प्रोटीन दरार की गहराई पर निर्भर करती है। पेप्टोन एक हल्का पीला पाउडर है, जो पानी में घुलनशील है, गर्म होने पर जमा नहीं होता है। इसका उपयोग नाइट्रोजन और कार्बन के स्रोत के रूप में किया जाता है।

सीलेंट के अतिरिक्त तरल से घने पोषक तत्व मीडिया तैयार किए जाते हैं। आगर-अगर का उपयोग आमतौर पर सीलेंट के रूप में किया जाता है। अगर-अगर - समुद्री शैवाल से प्राप्त उत्पाद, एक पीले रंग का पाउडर या प्लेट होता है, जिसमें उच्च आणविक भार पॉलीसेकेराइड होते हैं, अधिकांश सूक्ष्मजीवों द्वारा तोड़ा नहीं जाता है, ऑटोक्लेविंग द्वारा नष्ट नहीं होता है, पोषण का महत्वमीडिया नहीं बदलता है, रोगाणुओं के विकास को रोकता नहीं है। यह पानी में जैल बनाने में सक्षम है, 100 डिग्री सेल्सियस पर पिघलता है और 45 डिग्री सेल्सियस और उससे कम पर संकुचित होता है, सूक्ष्मजीवों द्वारा पोषक तत्व सब्सट्रेट के रूप में उपयोग नहीं किया जाता है। पिघलने और जमने के कई चक्र अगर की जेल बनाने की क्षमता को प्रभावित नहीं करते हैं, इसलिए अगर मीडिया को कई बार निष्फल किया जा सकता है।

इसके अलावा, पोषक माध्यम की संरचना में रक्त, सीरम, अकार्बनिक लवण शामिल हैं। सभी पोषक माध्यमों में, एक नियम के रूप में, 0.5% सोडियम क्लोराइड होता है, जो पर्यावरण की आइसो-ऑस्मोटिक स्थितियों से मेल खाता है, जो रोगाणुओं के जीवन के लिए इष्टतम हैं। रोगाणुओं के चयापचय में खनिज तत्वों का कार्य मुख्य रूप से विभिन्न एंजाइमों की सक्रियता है। इसके अलावा, अकार्बनिक आयन (मुख्य रूप से Na + और K +) प्रोटीन संश्लेषण के नियमन में, कोशिका झिल्ली के माध्यम से पदार्थों के परिवहन में शामिल होते हैं।

रिस्टोरेटिव एजेंट।रेडॉक्स क्षमता (एह) को कम करने और इसे इष्टतम स्तर पर संतुलित करने के लिए अवायवीय सूक्ष्मजीवों की खेती के लिए मीडिया में कम करने वाले एजेंटों को जोड़ा जाता है। एह इलेक्ट्रॉनों को दान करने या स्वीकार करने के लिए एक समाधान की क्षमता का एक उपाय है। एनारोबेस की खेती करते समय, सोडियम थियोग्लाइकोलेट (0.1%), सिस्टीन (0.1%), एस्कॉर्बिक एसिड (0.1%) आमतौर पर कम करने वाले एजेंटों के रूप में उपयोग किया जाता है।

कार्बोहाइड्रेट, पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल, संकेतक. अधिकांश विषमपोषी सूक्ष्मजीवों के लिए कार्बोहाइड्रेट कार्बन का सबसे अच्छा स्रोत हैं। वे रोगाणुओं के जैव रासायनिक गुणों को निर्धारित करने के लिए डिज़ाइन किए गए विभेदक निदान मीडिया का हिस्सा हैं।

कार्बोहाइड्रेट और पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल के अलावा पोषक तत्व मीडिया की संरचना में विभिन्न शामिल हैं संकेतक, ज्यादातर एसिड-बेस। सूक्ष्मजीवों के टीकाकरण के दौरान माध्यम के रंग में परिवर्तन अम्ल या क्षार के बनने को इंगित करता है जब एंजाइमी गतिविधिसूक्ष्मजीव। संकेतक के रूप में, तटस्थ लाल, ब्रोमोथाइमॉल नीला, कांगो लाल, रसोलिक एसिड और पानी नीला (बीपी) का मिश्रण, एंड्रीड संकेतक आमतौर पर उपयोग किया जाता है।

रंग।रंगीन रूप से कम (रंगहीन) रूप में आसानी से और विपरीत रूप से बदलने के लिए रंगों की क्षमता का व्यापक रूप से बैक्टीरियोलॉजिकल अभ्यास में उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से, लैक्टोज-नकारात्मक लोगों से लैक्टोज को विघटित करने वाले बैक्टीरिया को अलग करने के लिए। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप, लैक्टोज-पॉजिटिव बैक्टीरिया माध्यम पर रंगीन कॉलोनियों का निर्माण करते हैं, जबकि लैक्टोज-नकारात्मक बैक्टीरिया रंगहीन होते हैं। सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले रंग जो पोषक तत्व मीडिया का हिस्सा होते हैं, वे हैं बेसिक फुकसिन, मेथिलीन ब्लू और ईओसिन।

अवरोधक।रोगजनक बैक्टीरिया की उपस्थिति की जांच करते समय, साथ के माइक्रोफ्लोरा के विकास को दबाने के लिए आवश्यक है। इस प्रयोजन के लिए, विभिन्न अवरोधकों का उपयोग किया जाता है। ग्राम-नकारात्मक सूक्ष्मजीवों के अवरोधकों के रूप में, मीडिया की संरचना में सोडियम और पोटेशियम टेट्राथियोनेट, पोटेशियम टेल्यूराइट, थैलियम एसीटेट, थैलियम सल्फेट, सोडियम सेलेनाइट शामिल हैं। ग्राम-पॉजिटिव रोगाणुओं के विकास को रोकने के लिए, एनिलिन रंगों का उपयोग किया जाता है: शानदार हरा, क्रिस्टल वायलेट, एथिल वायलेट, एनिलिन ब्लू। पित्त और पित्त लवण रोगजनक एंटरोबैक्टीरिया बढ़ने के लिए चयनात्मक मीडिया का हिस्सा हैं। पित्त के क्षारीय हाइड्रोलिसिस के परिणामस्वरूप प्राप्त पित्त अम्लों का मिश्रण प्लॉस्किरेव माध्यम का हिस्सा है। विदेशों में, चयनात्मक मीडिया के हिस्से के रूप में, व्यक्तिगत पित्त अम्लों के लवण, मुख्य रूप से सोडियम डीओक्सीकोलेट का उपयोग किया जाता है।

शुष्क पोषक माध्यम।पोषक तत्व मीडिया की तैयारी एक बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला के काम के सबसे महत्वपूर्ण क्षेत्रों में से एक है। इस संबंध में, जैव उद्योग सूक्ष्मजीवों की खेती के लिए विभिन्न प्रयोजनों के लिए मानक, डिब्बाबंद, शुष्क पोषक माध्यम का उत्पादन करता है। वे 10% तक नमी वाले हीड्रोस्कोपिक पाउडर हैं। मीडिया को लेबल पर निर्देशित के अनुसार तैयार करें। संरचना की स्थिरता, माध्यम की मानकता, काम में सादगी और सुविधा, परिवहन और भंडारण में आसानी शुष्क पोषक मीडिया के महान लाभ हैं। उपयुक्त पीएच स्थापित करने के बाद, माध्यम को उबाला जाता है, फ़िल्टर किया जाता है, स्पष्ट किया जाता है, शीशियों, टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है और निष्फल किया जाता है। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि नसबंदी के बाद वातावरण अधिक अम्लीय हो जाता है।

प्रजातियां - सूक्ष्मजीवों का एक समूह जिसमें एक सामान्य विकासवादी उत्पत्ति होती है, एक करीबी जीनोटाइप (आनुवांशिक होमोलॉजी की एक उच्च डिग्री, आमतौर पर 60% से अधिक) और निकटतम संभव फेनोटाइपिक विशेषताएं होती हैं। स्ट्रेन - किसी दिए गए प्रकार के बैक्टीरिया की एक पृथक संस्कृति ("किसी दी गई प्रजाति का एक विशिष्ट नमूना") कॉलोनी - आँख को दिखाई देने वालाऊष्मायन की एक निश्चित अवधि के लिए और एक मूल कोशिका से या कई समान कोशिकाओं से एम / ओ के प्रजनन और संचय के परिणामस्वरूप गठित एक पृथक संरचना।

तरीकों प्रयोगशाला निदानसूक्ष्मदर्शी - नैदानिक ​​सामग्री में सीधे m/o का पता लगाना बैक्टीरियोलॉजिकल - पोषक मीडिया पर सामग्री को बोने से m / o का पता लगाना Ø जैविक - पहले से संक्रमित प्रयोगशाला जानवर से m/o का अलगाव सीरोलॉजिकल - विशिष्ट प्रतिरक्षा एंटीबॉडी का पता लगाना रोगी का रक्त सीरम एलर्जी - त्वचा-एलर्जी परीक्षण सेट करना (संकीर्ण रूप से विशिष्ट - तपेदिक, टुलारेमिया, आदि)

सांस्कृतिक - पोषक माध्यम पर एक सूक्ष्मजीव के विकास की प्रकृति। जैव रासायनिक - विभिन्न एंजाइम प्रणालियों और चयापचय सुविधाओं की गतिविधि के कारण जीवन की प्रक्रिया में विभिन्न जैव रासायनिक उत्पादों को बनाने के लिए विभिन्न सब्सट्रेट (कार्बोहाइड्रेट, प्रोटीन और अमीनो एसिड, आदि) को किण्वित करने की क्षमता। एंटीजेनिक - मुख्य रूप से निर्भर करता है रासायनिक संरचनाऔर कोशिका भित्ति की संरचना, फ्लैगेला, कैप्सूल की उपस्थिति, एंटीबॉडी और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अन्य रूपों का उत्पादन करने के लिए मैक्रोऑर्गेनिज्म (होस्ट) की क्षमता से पहचाने जाते हैं, प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं में पाए जाते हैं।

शारीरिक तरीकेकार्बोहाइड्रेट (ऑटोट्रॉफ़्स, हेटरोट्रॉफ़्स), नाइट्रोजन (एमिनोऑटोट्रॉफ़्स, एमिनोहेटरोट्रॉफ़्स) और अन्य प्रकार के पोषण, श्वसन के प्रकार (एरोबेस, माइक्रोएरोफाइल्स, फैकल्टी एनारोबेस, सख्त एनारोबेस)। गतिशीलता और गति के प्रकार। स्पोरुलेट करने की क्षमता, विवाद की प्रकृति। बैक्टीरियोफेज, फेज टाइपिंग के प्रति संवेदनशीलता। कोशिका भित्ति की रासायनिक संरचना - मूल शर्करा और अमीनो एसिड, लिपिड और फैटी एसिड संरचना। प्रोटीन स्पेक्ट्रम (पॉलीपेप्टाइड प्रोफाइल)। एंटीबायोटिक दवाओं और अन्य के प्रति संवेदनशीलता दवाई. जीनोटाइपिक (जीनोसिस्टमेटिक्स के तरीकों का उपयोग)।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि में कृत्रिम पोषक माध्यम पर नैदानिक ​​सामग्री का टीकाकरण, रोगाणुओं की शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव और उनकी बाद की पहचान शामिल है।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधियों का उपयोग किया जाता है: संक्रामक रोगों के निदान में; जीवाणुओं के वहन के लिए निवारक परीक्षाओं के दौरान आंतों का समूह, डिप्थीरिया बेसिलस, आदि; III पर्यावरणीय वस्तुओं (पानी, वायु, मिट्टी, भोजन, आदि) की स्वच्छता और स्वच्छ स्थिति के अध्ययन में और रोगजनक सूक्ष्मजीव प्रजातियों के संक्रमण के लिए महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार उनकी परीक्षा। वू

शारीरिक विशेषताएं तापमान से संबंध श्वसन पोषण एंजाइम प्रोटीन और अमीनो एसिड चयापचय (जिलेटिनेज, कोलेजनेज, डिकारबॉक्साइलेस, यूरेस) अन्य एंजाइम (हेमोलिसिन, लिपेज, लेसिथिनेज, डीएनसे) मेटाबोलिक अंत उत्पाद (क्रोमैटोग्राफी) एएमपी प्रतिरोध / संवेदनशीलता

तत्व जो मुख्य रूप से सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए आवश्यक हैं और पोषक माध्यम की संरचना में शामिल होने चाहिए, माइक्रोबियल कोशिकाओं की रासायनिक संरचना से निर्धारित होते हैं, जो सिद्धांत रूप में, सभी जीवित जीवों में समान होते हैं। कुल कोशिका द्रव्यमान का मुख्य भाग पानी (80 - 90%) द्वारा दर्शाया जाता है और केवल 10 - 20% शुष्क पदार्थ होता है। शुष्क पदार्थ में मात्रात्मक सामग्री के अनुसार, मैक्रो- और माइक्रोलेमेंट्स को प्रतिष्ठित किया जाता है। पूर्व में शामिल हैं: कार्बन, ऑक्सीजन, नाइट्रोजन, हाइड्रोजन, सल्फर, फास्फोरस, पोटेशियम, सोडियम, मैग्नीशियम, कैल्शियम, लोहा। ट्रेस तत्व मैंगनीज, मोलिब्डेनम, जस्ता, तांबा, कोबाल्ट, आदि हैं, जिनमें से अधिकांश की ट्रेस मात्रा में आवश्यकता होती है। इस कारण से, कई मीडिया की संरचना में माइक्रोलेमेंट्स नहीं जोड़े जाते हैं, क्योंकि मैक्रोलेमेंट्स के लवण में अशुद्धियों से उनकी आवश्यकता को पूरा किया जा सकता है। इसके अलावा, सभी सूक्ष्मजीवों को ट्रेस तत्वों की आवश्यकता नहीं होती है। चौदह

जानवरों और पौधों के जीवों के विपरीत, सूक्ष्मजीवों को विभिन्न प्रकार के पोषण की विशेषता होती है, जिन्हें तीन मुख्य मानदंडों के अनुसार प्रतिष्ठित किया जाता है - एक कार्बन स्रोत, एक ऊर्जा स्रोत और एक इलेक्ट्रॉन (हाइड्रोजन) दाता। कार्बन स्रोत की प्रकृति के आधार पर, सभी सूक्ष्मजीवों को 2 बड़े समूहों में विभाजित किया जाता है - ऑटोट्रॉफ़्स, कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करते हुए, और हेटरोट्रॉफ़, विकास और प्रजनन के लिए तैयार कार्बनिक पदार्थों की आवश्यकता होती है। ऊर्जा स्रोतों और इलेक्ट्रॉन दाताओं की विविधता को ध्यान में रखते हुए, इन समूहों को उपसमूहों में विभाजित किया गया है, जिसके परिणामस्वरूप सूक्ष्मजीवों में 8 प्रकार के पोषण की पहचान की गई है। प्रत्येक प्रकार का पोषण कुछ सूक्ष्मजीवों की विशेषता है और उनके शारीरिक और जैव रासायनिक गुणों को दर्शाता है। रोगजनकों सहित अधिकांश सूक्ष्मजीवों में एक प्रकार का पोषण होता है जिसमें कार्बनिक पदार्थ कार्बन, ऊर्जा और इलेक्ट्रॉन दाताओं के स्रोत होते हैं। 16

कार्बनिक कार्बन स्रोतों में सूक्ष्मजीवों की जरूरतें बहुत विविध हैं। कुछ प्रजातियां "सर्वाहारी" हैं और विभिन्न रासायनिक प्रकृति के पदार्थों का उपभोग कर सकती हैं, अन्य अधिक चयनात्मक हैं और उनमें से कुछ का ही उपयोग करते हैं। सूक्ष्मजीवों के कुछ समूहों की तेजी से पहचान के लिए सैनिटरी और क्लिनिकल माइक्रोबायोलॉजी में व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले वैकल्पिक और विभेदक नैदानिक ​​​​मीडिया बनाते समय प्रत्येक प्रकार के सूक्ष्मजीवों की विशेषता वाले कार्बनिक यौगिकों के सेट की विशिष्टता को ध्यान में रखा जाता है। कार्बन युक्त सब्सट्रेट चुनते समय, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि कार्बनिक पदार्थों की पाचनशक्ति भी काफी हद तक उनके गुणों पर निर्भर करती है - घुलनशीलता, कार्बन परमाणुओं के ऑक्सीकरण की डिग्री, स्थानिक विन्यास और उनके अणुओं के पोलीमराइजेशन। आमतौर पर, सूक्ष्मजीव कुछ ऑप्टिकल आइसोमर्स - डी-सीरीज़ से संबंधित शर्करा, अमीनो एसिड - को एल-सीरीज़ में आत्मसात कर लेते हैं। बहुत कम सूक्ष्मजीवों में एंजाइम होते हैं जो एक ऑप्टिकल आइसोमर को दूसरे में परिवर्तित करते हैं। स्टार्च, पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, वसा जैसे बायोपॉलिमर का उपयोग केवल सूक्ष्मजीवों द्वारा किया जा सकता है जो कुछ हाइड्रोलाइटिक एंजाइमों को संश्लेषित करते हैं - एमाइलेज, प्रोटीज, लाइपेस एक्सोएंजाइम के रूप में, यानी पर्यावरण में कोशिका द्वारा स्रावित एंजाइम। 17

हेटरोट्रॉफ़िक सूक्ष्मजीवों के भारी बहुमत के लिए, कार्बोहाइड्रेट, अमीनो एसिड, प्रोटीन और कार्बनिक अम्ल कार्बन और ऊर्जा के मुख्य आसानी से सुलभ स्रोत हैं। कार्बन के कार्बनिक स्रोतों के लिए सूक्ष्मजीवों की आवश्यकता को चिह्नित करते समय, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि हेटरोट्रॉफी की उच्चतम डिग्री रोगजनक सूक्ष्मजीवों में निहित है जो मानव और पशु जीवों में जीवन के अनुकूल हो गए हैं। उनकी खेती के लिए पोषक माध्यम की संरचना विशेष रूप से जटिल है। उनमें उनके उथले हाइड्रोलिसिस (पेप्टाइड्स), विटामिन, न्यूक्लिक एसिड के टुकड़े आदि के प्रोटीन या उत्पाद होते हैं। ऐसे मीडिया की तैयारी के लिए, विभिन्न प्रकार के हाइड्रोलाइज़ेट्स और मांस के अर्क, रक्त या सीरम, खमीर और पौधे के अर्क, और बहुत कुछ हैं। उपयोग किया गया। ये मीडिया प्रजातियों की एक विस्तृत विविधता की खेती के लिए उपयुक्त हैं और विशेष रूप से उन मामलों में उपयोगी होते हैं जहां विकास कारकों के लिए सूक्ष्म जीव की आवश्यकता अज्ञात होती है या एक ही समय में कई विकास कारकों की आवश्यकता होती है। ऐसे मीडिया का नुकसान फीडस्टॉक की संरचना और गुणों की गैर-मानक और सीमित नियंत्रणीयता के कारण उनके मानकीकरण को प्राप्त करने में कठिनाई या असंभवता है। अठारह

सूक्ष्मजीवों का रचनात्मक चयापचय आम तौर पर चार मुख्य प्रकार के बायोपॉलिमर-प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड, पॉलीसेकेराइड और लिपिड के संश्लेषण के उद्देश्य से होता है। प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड के जैवसंश्लेषण के लिए कार्बन के अलावा सबसे महत्वपूर्ण तत्व नाइट्रोजन है। अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए नाइट्रोजन का सबसे सुलभ स्रोत अमोनियम आयन है, जिसे वे कार्बनिक और अकार्बनिक एसिड, अमीनो एसिड, प्रोटीन और अन्य नाइट्रोजन युक्त पदार्थों के लवण से प्राप्त कर सकते हैं। बैक्टीरिया के एक बड़े समूह के लिए, मुख्य रूप से रोगजनक, नाइट्रोजन युक्त कार्बनिक पदार्थ नाइट्रोजन के स्रोत के रूप में आवश्यक हैं। यदि अमीनो एसिड नाइट्रोजन का एक ऐसा स्रोत है, तो सूक्ष्मजीव सीधे प्रोटीन के संश्लेषण के लिए उनका उपयोग कर सकते हैं, या प्रारंभिक रूप से अपना बहरापन कर सकते हैं, और इस मामले में जारी किए गए अमीनो समूहों का उपयोग अपने स्वयं के अमीनो एसिड, प्रोटीन के संश्लेषण के लिए किया जा सकता है। 19

हालांकि, कुछ सूक्ष्म जीवों को विकास के लिए कुछ अमीनो एसिड की आवश्यकता होती है, जिन्हें वे स्वयं संश्लेषित नहीं कर सकते हैं। ऐसे "आवश्यक" अमीनो एसिड की आवश्यकता वाले सूक्ष्मजीवों में स्टैफिलोकोकस ऑरियस, हेमोलिटिक स्ट्रेप्टोकोकस, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया और कुछ अन्य शामिल हैं। रोगाणुओं की शारीरिक विशेषताओं के आधार पर, "आवश्यक" अमीनो एसिड की संख्या भिन्न होती है - स्टैफिलोकोकस ऑरियस के लिए, पोषक माध्यम में केवल ट्रिप्टोफैन और सिस्टीन की आवश्यकता होती है, और हेमोलिटिक स्ट्रेप्टोकोकस के लिए - 17 अमीनो एसिड। प्रोटीन, नाइट्रोजन के स्रोत के रूप में, केवल उन सूक्ष्मजीवों के लिए उपलब्ध होते हैं जो पर्यावरण में जारी प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम बनाते हैं (यानी, एक्सोफॉर्म में)। इन एंजाइमों की कार्रवाई के तहत, प्रोटीन कम आणविक भार वाले पदार्थों - पेप्टोन और अमीनो एसिड में टूट जाते हैं। बीस

सूक्ष्मजीवों की ऊर्जा चयापचय, साथ ही रचनात्मक, विभिन्न जैव रासायनिक तंत्रों की विशेषता है। इस चयापचय में, तीन मुख्य प्रकार प्रतिष्ठित हैं - एरोबिक श्वसन, अवायवीय श्वसन और किण्वन, जिनमें से सबसे आम एरोबिक श्वसन है। इस प्रक्रिया में, इस पदार्थ में निहित ऊर्जा की अधिकतम रिहाई के साथ कार्बनिक पदार्थ कार्बन डाइऑक्साइड और पानी में ऑक्सीकृत हो जाते हैं। एरोबिक श्वसन वाले कई सूक्ष्मजीव सख्त एरोबेस होते हैं, लेकिन उनमें से कुछ ऐच्छिक एरोबिक होते हैं, क्योंकि वे किण्वन के माध्यम से अवायवीय परिस्थितियों में एटीपी भी बना सकते हैं। कुछ सूक्ष्मजीव, मुख्य रूप से बैक्टीरिया, अवायवीय श्वसन में ऊर्जा प्राप्त करते हैं, अर्थात, पदार्थों के ऑक्सीकरण के परिणामस्वरूप, जहां ऑक्सीजन नहीं, बल्कि अकार्बनिक यौगिक इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में कार्य करते हैं। तो, जीनस बैसिलस, ई. कोलाई की कुछ प्रजातियां अवायवीय श्वसन करती हैं, जिसके दौरान नाइट्रेट (NO 3) अमोनिया में अपचित हो जाता है; क्लोस्ट्रीडियम एसिटिकम एक इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता के रूप में कार्बन डाइऑक्साइड का उपयोग करके आणविक हाइड्रोजन का ऑक्सीकरण करता है। 21

ऊर्जा चयापचय का सबसे सरल चयापचय प्रकार किण्वन है। किण्वन प्रक्रियाएं अवायवीय परिस्थितियों में होती हैं और ऊर्जा की रिहाई के साथ होती हैं। किण्वन के लिए मुख्य सब्सट्रेट कार्बोहाइड्रेट है, लेकिन बैक्टीरिया कार्बनिक अम्लों को किण्वित कर सकता है, जिसमें अमीनो एसिड, साथ ही प्यूरीन और पाइरीमिडाइन शामिल हैं। कई प्रकार के किण्वन ज्ञात हैं, जिनमें से प्रत्येक सूक्ष्मजीवों के एक विशिष्ट समूह के कारण होता है और, तंत्र के अनुसार, विशिष्ट अंत उत्पादों के गठन के साथ होता है। किण्वन के अंतिम उत्पाद आमतौर पर विभिन्न कार्बनिक अम्ल होते हैं - लैक्टिक, एसिटिक, स्यूसिनिक, साइट्रिक, आदि, साथ ही साथ अल्कोहल (एथिल, ब्यूटाइल, प्रोपाइल), कार्बन डाइआक्साइडऔर हाइड्रोजन। मुख्य अंत उत्पाद के उत्पादन के अनुसार, इसी प्रकार के किण्वन को भी प्रतिष्ठित किया जाता है। इस तथ्य के कारण कि किण्वन के दौरान सब्सट्रेट का पूर्ण ऑक्सीकरण नहीं होता है और आंशिक रूप से ऑक्सीकृत पदार्थों को माध्यम में छोड़ा जाता है, जिसमें अभी भी ऊर्जा होती है - कार्बनिक अम्ल, अल्कोहल, आदि, इस प्रक्रिया में कुल एटीपी उपज प्रति 1 मोल किण्वित होता है। सब्सट्रेट महत्वपूर्ण है (~ 30 गुना) श्वसन की प्रक्रियाओं में एक ही सब्सट्रेट के चयापचय के दौरान की तुलना में कम है। 22

एक विशेष भूमिका रॉबर्ट कोच की है। एक सूक्ष्म जीव की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की आवश्यकता को मानते हुए, उन्होंने इस समस्या को हल करने के लिए परिस्थितियों को बनाने की आवश्यकता निर्धारित की। इनमें से सबसे महत्वपूर्ण पोषक माध्यम था जिस पर सूक्ष्म जीवों की वृद्धि प्राप्त की जा सकती थी। 1881 में सूक्ष्मजैविक अभ्यास में सघन पोषक माध्यम का परिचय कोच के नाम से जुड़ा है। उनके उपयोग का विचार पहले उत्पन्न हुआ और जर्मन शोधकर्ता ब्रेडफेल्ड का है। इसके अलावा, 1877 की शुरुआत में, श्रोएटर ने आलू के स्लाइस पर बैक्टीरिया की खेती की, जिसे पोषक माध्यम के उपयोग के रूप में भी व्याख्या किया जा सकता है। कोच की योग्यता समस्या के लिए एक गहन वैज्ञानिक दृष्टिकोण में निहित है, अपने स्वयं के शोध में पोषक तत्व मीडिया का व्यापक उपयोग। उन्होंने घने माध्यम के एक घटक के रूप में पहला हार्डनर, जिलेटिन भी प्रस्तावित किया। 25

आधुनिक सूक्ष्म जीवविज्ञानी से परिचित अग्र-अगार को फ्रॉस्ट ने 1919 में बहुत बाद में रोजमर्रा के अभ्यास में पेश किया था, हालांकि यह याद रखना उचित होगा कि 1881 में, जर्मन शोधकर्ता हेस्से ने अगर-अगर का प्रस्ताव रखा था। इसके अलावा, 1913 में, रूसी माइक्रोबायोलॉजिस्ट वी.एल. ओमेलेंस्की ने जिलेटिन के साथ पोषक मीडिया को श्रद्धांजलि देते हुए कहा कि अगर माइक्रोब जिलेटिन को द्रवीभूत करता है, तो पोषक तत्व मीडिया बेहतर होता है। 19वीं सदी के अंत और 20वीं सदी की पहली तिमाही में कोच के विचारों और व्यावहारिक गतिविधियों का गहन विकास हुआ। यह इस अवधि के दौरान था कि कई देशों के शोधकर्ताओं ने विभिन्न उद्देश्यों के लिए पोषक तत्व मीडिया का प्रस्ताव रखा, जिसकी भूमिका व्यावहारिक सूक्ष्म जीव विज्ञान के लिए बहुत महत्वपूर्ण थी और बनी हुई है। आधुनिक सूक्ष्म जीवविज्ञानी हर दिन अपने काम में उनके नाम याद करते हैं। इन कुछ वर्षों में, मूल रूप से एक जापानी, श्री एंडो, ने एंटरोबैक्टीरिया के भेदभाव के लिए अपने स्वयं के अगर का प्रस्ताव रखा, ऑस्ट्रियाई ई। लेवेनशेटिन - माइकोबैक्टीरिया के लिए एक माध्यम, और अंग्रेज ए। मैक। कोंकी - आंतों के सूक्ष्मजीवों के लिए एक चयनात्मक और विभेदक निदान माध्यम, जर्मन टी। किट और इतालवी डी। तारोज़ी - अवायवीय बैक्टीरिया को बाध्य करने के लिए माध्यम, फ्रेंचमैन आर। सबुरो, चेक एफ। चापेक और अमेरिकी ए। डॉक्स - कवक के लिए माध्यम, ब्राजीलियाई आर। हॉटिंगर - अधिक पके हुए मांस आदि पर आधारित बहुउद्देश्यीय मीडिया। 26

सामान्य आवश्यकताएं माइक्रोबियल सेल के निर्माण के लिए सभी तत्वों की सामग्री पर्याप्त आर्द्रता आइसोटोनिटी प्रदान करना हाइड्रोजन आयनों की एक निश्चित एकाग्रता रेडॉक्स संभावित बाँझपन

आवधिक संस्कृति के विकास के मुख्य चरण: प्रारंभिक (अंतराल-) - 1, घातीय (एबोलोगरिदमिक) - 2, स्थिर - 3 मरना - 4 (चित्र। 12) 12. तरल पोषक माध्यम पर माइक्रोबियल जनसंख्या वृद्धि के मुख्य चरण।

तरल पोषक माध्यम पर सूक्ष्मजीवों के विकास की प्रकृति माध्यम की एक समान मैलापन के साथ बैक्टीरिया का विकास, जिसका रंग नहीं बदलता है या संस्कृति में गठित पानी में घुलनशील वर्णक के रंग के अनुसार बदलता है। सूक्ष्म जीव; बैक्टीरिया की निचली वृद्धि - तलछट का निर्माण (कम या प्रचुर मात्रा में, टुकड़े टुकड़े, सजातीय, रेशेदार, आदि); पोषक माध्यम की पारदर्शिता के संरक्षण के साथ पार्श्विका विकास; बैक्टीरिया की सतही वृद्धि - माध्यम की सतह पर एक फिल्म (पतली, नाजुक, रंगहीन या नम, मोटी, नग्न आंखों को स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाली, झुर्रियों वाली घनी सूखी, और कभी-कभी मस्सा सतह); फिल्म का रंग, पोषक माध्यम की तरह, सूक्ष्म जीव की बढ़ती संस्कृति द्वारा उत्पादित वर्णक पर निर्भर करता है।

अर्ध-तरल पोषक माध्यम पर सूक्ष्मजीवों के विकास की प्रकृति अध्ययन के तहत संस्कृति को 0.2 - 0.5% अर्ध-तरल अगर के कॉलम में टीका लगाया गया है। सूक्ष्मजीव की गति करने की क्षमता निर्धारित की जाती है - टेस्ट ट्यूब की दीवार के तत्काल आसपास के क्षेत्र में एक इंजेक्शन द्वारा बुवाई (इंजेक्शन) के स्थान से माध्यम में फैलता है।

बुधवार एंडो डिफरेंशियल-डायग्नोस्टिक संरचना: आधार - पोषक तत्व अगर डिफ। कारक - लैक्टोज संकेतक - सोडियम सल्फाइट के साथ विरंजित मूल फुकसिन धात्विक चमक के साथ लैक्टोज + लाल रंग की कॉलोनियों की वृद्धि

बुधवार Ploskirev चयनात्मक, विभेदक निदान संरचना: आधार - पोषक तत्व अगर वैकल्पिक कारक - पित्त लवण, शानदार हरा, आयोडीन डिफ। कारक - लैक्टोज संकेतक - तटस्थ लाल लैक्टोज + लिंगोनबेरी कॉलोनियों की वृद्धि

नमक अगर चयनात्मक माध्यम संरचना: आधार - पोषक तत्व अगर चयनात्मक कारक - नमक 10% संकेतक - कोई नहीं नमक प्रतिरोधी कॉलोनियों की वृद्धि

जर्दी-नमक अगर (चिस्टोविच) वैकल्पिक, नैदानिक ​​संरचना: आधार - पोषक तत्व अगर वैकल्पिक कारक - नमक 10% अंतर। कारक - अंडे की जर्दी संकेतक - नमक प्रतिरोधी कॉलोनियों का विकास नहीं + लेसीटोविटेलस गतिविधि के कारण कॉलोनियों के आसपास मैलापन

मुलर-कॉफमैन टेट्राथियोनेट माध्यम जीनस साल्मोनेला के बैक्टीरिया का पता लगाने में चयनात्मक संवर्धन के लिए अभिप्रेत है संरचना: आधार - पोषक तत्व शोरबा वैकल्पिक कारक - सेलिनस एसिड का नमक संकेतक - सोडियम सेलाइन के लिए प्रतिरोधी बैक्टीरिया का कोई विकास नहीं

नमक शोरबा वैकल्पिक माध्यम सामग्री: आधार - पोषक तत्व शोरबा वैकल्पिक कारक - 6.5% ना। सीएल संकेतक - कोई नहीं नमक-सहनशील सूक्ष्मजीवों की वृद्धि

सघन पोषक माध्यम पर सूक्ष्मजीवों की वृद्धि की प्रकृति। मुख्य संकेत: ü आकार - बिंदीदार (≤ 1 मिमी) - बड़ा (4 - 6 मिमी और अधिक); ü फॉर्म - सही (गोल); अनियमित (अमीबिड), प्रकंद; ü किनारे की आकृति - सम या असमान (स्कैलप्ड, वेवी, आदि) ü कॉलोनियों की राहत (गुंबददार, सपाट-उत्तल, उदास केंद्र वाली कॉलोनियां, आदि। ü कॉलोनी की सतह (मैट या चमकदार) S-R-forms); ü कॉलोनी का रंग (पिग्मेंटेशन); ü कॉलोनी की संरचना (बारीक या मोटे दानेदार); ü संगति (चिपचिपा, श्लेष्मा, पेस्टी, आदि।

बैक्टीरिया का वर्णक गठन लाल-भूरा (प्रोडिगियोसिन) सेराटिया मार्सेसेंस पीला-नारंगी, (कैरोटेनॉयड्स) स्टैफिलोकोकस, सरसीना, एम। ट्यूबरकुलोसिस जेनेरा काला, भूरा (मेलेनिन) बी। क्यूबटिलिस, कैंडिडा कवक नीला (पियोसायनिन) पी। एरुगिनोसा फ्लोरोसेंट पीला-हरा (पाइओवरडिन) जीनस विब्रियो

शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव: झिल्ली फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन फिल्टर पर सूक्ष्मजीव परमाणु फिल्टर के लिए धातु पिंजरे

4.2. जैविक और सूक्ष्मजीवविज्ञानी कारक

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार का बैक्टीरियोलॉजिकल निदान ए, बी और सी

परिचय की तिथि: अनुमोदन के क्षण से

1. विकसित: FGUN सेंट पीटर्सबर्ग NIIEM उन्हें। Rospotrebnadzor के पाश्चर (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "सेंट पीटर्सबर्ग स्टेट मेडिकल एकेडमी का नाम I.I. Mechnikov के नाम पर रखा गया है" फेडरल एजेंसी फॉर हेल्थ एंड सोशल डेवलपमेंट (A.G. Boytsov) के।

3. प्रमुख द्वारा अनुमोदित संघीय सेवाउपभोक्ता अधिकारों के संरक्षण और मानव कल्याण के क्षेत्र में पर्यवेक्षण पर, रूसी संघ के मुख्य राज्य सेनेटरी डॉक्टर जी.जी. ओनिशचेंको 29 दिसंबर, 2007 0100/13745-07-34

4. अनुमोदन के क्षण से पेश किया गया।

5. पहली बार पेश किया गया।

1 उपयोग का क्षेत्र

1 उपयोग का क्षेत्र

1.1. दिशानिर्देश टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार ए, बी और सी के बैक्टीरियोलॉजिकल निदान के बुनियादी सिद्धांतों और विशेषताओं को निर्धारित करते हैं; इसमें रोगजनकों के जैविक गुणों, जीवाणुरोधी दवाओं के प्रतिरोध, उनके अलगाव के लिए पोषक माध्यम, और साल्मोनेला के अन्य सीरोलॉजिकल वेरिएंट से टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगजनकों के भेदभाव की विशेषताएं शामिल हैं।

2. संक्षिप्ताक्षरों की सूची

एबीपी - जीवाणुरोधी दवा

बीसीए - बिस्मथ सल्फाइट अगर

एमपीयू - चिकित्सा और निवारक संस्थान

एमआईसी - न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता

पी - मध्यवर्ती

यू - स्थिर

एच - संवेदनशील

आरआईएफ - इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया

सीएनएस - केंद्रीय तंत्रिका तंत्र

तालिकाओं में:

"+" - पहले दिन सकारात्मक प्रतिक्रिया;

"-" - 4-20 दिनों के लिए नकारात्मक प्रतिक्रिया;

"(+)" - 2-20 दिनों के लिए सकारात्मक प्रतिक्रिया में देरी;

डी - विभिन्न एंजाइमेटिक प्रतिक्रियाएं।

एंजाइमी वेरिएंट में अंतर संभव है।

3. सामान्य प्रावधान

3.1. टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी साल्मोनेला टाइफी, साल्मोनेला पैराटाइफी ए, साल्मोनेला पैराटाइफी बी और साल्मोनेला पैराटाइफी सी के कारण होने वाले एंथ्रोपोनोटिक आंतों के संक्रमण हैं। शायद ही कभी - पैराटाइफाइड सी।

3.2. रोगों की विशेषता छोटी आंत के लसीका तंत्र के अल्सरेटिव घावों, बैक्टीरिया, बुखार, गंभीर नशा के साथ चक्रीय नैदानिक ​​​​पाठ्यक्रम, शरीर की त्वचा पर गुलाब के दाने, हेपेटो- और स्प्लेनोमेगाली से होती है। दस्त की तुलना में कब्ज अधिक आम है। लगभग 1% मामलों में पीयर के इलियम के पैच का अल्सरेशन होता है आंतों से खून बहनाऔर रोगी के लिए सबसे प्रतिकूल परिणामों के साथ आंत का वेध।

3.3. टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी का निदान रोग के नैदानिक ​​लक्षणों के आधार पर किया जाता है, जिसमें महामारी विज्ञान के इतिहास और व्यापक प्रयोगशाला परीक्षा के आंकड़ों को ध्यान में रखा जाता है, जिसमें शास्त्रीय बैक्टीरियोलॉजिकल और सीरोलॉजिकल तरीके शामिल हैं। बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स प्राथमिकता का महत्व है, क्योंकि इस मामले में, रोगज़नक़ के जैविक गुणों के बारे में पूरी जानकारी प्राप्त करना संभव है, जिसमें जीवाणुरोधी दवाओं के प्रति संवेदनशीलता भी शामिल है।

3.4. टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के एटियोट्रोपिक उपचार के लिए रोगाणुरोधी दवाओं के उपयोग ने एक ओर, मृत्यु दर को 10-20% से 1% से कम करना संभव बना दिया, और दूसरी ओर, यह जटिल प्रयोगशाला निदान, क्योंकि अक्सर प्रयोगशाला अनुसंधान के लिए सामग्री का नमूना एंटीबायोटिक चिकित्सा की शुरुआत के बाद किया जाता है। यह तथ्य अनुसंधान के लिए सामग्री चुनने, अध्ययन के तहत सामग्री लेने और अनुसंधान तकनीकों को अधिक सावधानी से लेने के मुद्दे पर संपर्क करना आवश्यक बनाता है।

3.5. टाइफाइड बुखार की महामारी विज्ञान की एक आधुनिक विशेषता इस बीमारी के लिए स्थानिक क्षेत्रों से संक्रमण के आयात (ले जाने) की आवृत्ति में तेज वृद्धि है, निकट और दूर के देशों के साथ-साथ इन देशों में जाने पर रूसी निवासियों का संक्रमण और देश के भीतर प्रवास की प्रक्रिया में। एक अन्य विशेषता उच्च महामारी विज्ञान के जोखिम के एक बड़े दल की उपस्थिति है, जिसमें निवास का एक निश्चित स्थान नहीं है, जिनके बीच टाइफाइड बुखार की एक उच्च घटना दर्ज की गई है।

3.6. ये दिशानिर्देश टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार ए, बी और सी के बैक्टीरियोलॉजिकल निदान के तरीकों को एकजुट करने के लिए तैयार किए गए थे, साथ ही क्लिनिक की आधुनिक विशेषताओं को ध्यान में रखते हुए प्रयोगशाला अध्ययन के परिणामों की सही व्याख्या के लिए तैयार किए गए थे। विशिष्ट क्षेत्रों में उपचार और महामारी विज्ञान की स्थिति।

4. बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स के लिए संकेत

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार ए, बी और सी के रोगजनकों की उपस्थिति के लिए जैविक सामग्री की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए एक संकेत परीक्षा की आवश्यकता है:

4.1) संदिग्ध टाइफाइड बुखार के साथ-साथ अज्ञात एटियलजि के बुखार के साथ, 5 या अधिक दिनों तक चलने वाले;

4.2) जिन व्यक्तियों का टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार ए, बी, सी के रोगियों के संपर्क में था;

4.3) कुछ व्यवसायों, उद्योगों और संगठनों के कर्मचारी काम पर प्रवेश पर और महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार;

4.4) नैदानिक ​​और महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार अस्पतालों और विशेष सैनिटोरियम में प्रवेश से पहले व्यक्ति;

4.5) एक मनो-न्यूरोलॉजिकल (मनोदैहिक) प्रोफ़ाइल के अस्पतालों (विभागों) में इनपेशेंट उपचार के लिए पंजीकरण पर, नर्सिंग होम, पुरानी मानसिक बीमारी और सीएनएस घावों वाले व्यक्तियों के लिए बोर्डिंग स्कूल, और चौबीसों घंटे बंद संस्थानों के अन्य प्रकार रहना;

4.6) अस्पताल से छुट्टी से पहले रोग के नैदानिक ​​लक्षणों के गायब होने के बाद टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड के रोगी;

4.7) डिस्पेंसरी अवलोकन के दौरान टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड से पीड़ित व्यक्ति;

4.8) इन उद्यमों और सुविधाओं में पुन: रोजगार पर कुछ व्यवसायों, उद्योगों और संगठनों के कर्मचारियों के बीच पहचाने जाने वाले पुराने बैक्टीरिया वाहक;

4.9) संदिग्ध टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के मामले में अनुभागीय सामग्री।

5. विधि का रसद

5.1. मानक परीक्षण और सहायक उपकरण, सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं के लिए माप उपकरण।

5.2. खेती, अलगाव, पहचान और टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी के प्रेरक एजेंटों की जीवाणुरोधी दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के निर्धारण के लिए पोषक माध्यम, नैदानिक ​​सीरा और रासायनिक अभिकर्मक।

5.3. टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगों के प्रयोगशाला निदान के लिए और स्थापित प्रक्रिया के अनुसार रूसी संघ के क्षेत्र में उपयोग के लिए अनुमोदित बैक्टीरिया वाहक, पोषक माध्यम और अभिकर्मकों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाना चाहिए।

6. टाइफाइड और पैराटाइफाइड का प्रयोगशाला निदान

6.1. बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का सिद्धांत रोग के चरण के आधार पर विभिन्न जैविक सब्सट्रेट्स (रक्त, मूत्र, मल, पित्त, अस्थि मज्जा, गुलाबोला) में जीवित सूक्ष्मजीवों का पता लगाने पर आधारित है। ऐसा करने के लिए, विशेष पोषक माध्यम पर जैविक सामग्री की एक निश्चित मात्रा बोई जाती है, इसके बाद थर्मोस्टैट में ऊष्मायन और सूक्ष्मजीवों की विकसित कालोनियों की पहचान की जाती है, जो एस। टाइफी, एस। पैराटाइफी ए, एस। पैराटाइफी बी और एस। पैराटाइफी की विशेषता है। सी, सांस्कृतिक और एंजाइमेटिक गुणों और एंटीजेनिक विशेषताओं के अनुसार।

6.2. केवल एक बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन रोगज़नक़ से शरीर की रिहाई का एक सटीक एटियलॉजिकल निदान और नियंत्रण प्रदान कर सकता है। रिश्ते में क्रमानुसार रोग का निदानटाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार, एकमात्र तरीका रोगजनक के अलगाव के साथ जैविक सामग्री का एक प्रयोगशाला अध्ययन है और इसकी पहचान एक सीरोलॉजिकल संस्करण के स्तर तक है। संक्रामक प्रक्रिया का नैदानिक ​​​​पाठ्यक्रम हमेशा इन नोसोलॉजिकल रूपों के बीच अंतर करना संभव नहीं बनाता है।

7. बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा

7.1 टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी के प्रेरक एजेंटों का अलगाव बायोमैटिरियल्स की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा की एक ही योजना के अनुसार किया जाता है।

7.2. टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगों के लिए प्रयोगशाला परीक्षणों के लिए सामग्री एकत्र करने की प्रक्रिया एसपी 3.1.1.2137-06 द्वारा निर्धारित की जाती है।

7.3. जैव सामग्री को सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं में एकत्रित करने और परिवहन करने की तकनीक का वर्णन एमयू 4.2.2039-05 में किया गया है।

7.4. टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के निदान के उद्देश्य से बैक्टीरियोलॉजिकल जांच के लिए सामग्री हैं:

रक्त;

मलमूत्र;

मूत्र;


रोगजनकों को भी अलग किया जा सकता है:

गुलाबोल;

अस्थि मज्जा;

स्तन का दूध।

एसपी 3.1.1.2137-06 के अनुसार बैक्टीरिया वाहकों की पहचान करने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च की सामग्री हैं:

मलमूत्र;

मूत्र;

पित्त (ग्रहणी सामग्री)।

7.5. निदान को स्पष्ट करने के लिए अनुभागीय सामग्री का अध्ययन किया जाता है।

7.6. प्रयोगशाला अनुसंधान के लिए जैविक सामग्री का संग्रह एटियोट्रोपिक उपचार की शुरुआत से पहले किया जाता है: एक चिकित्सा कर्मचारी द्वारा जिसे टाइफाइड-पैराटाइफाइड संक्रमण का संदेह होता है; समूह और प्रकोप रुग्णता के मामले में - Rospotrebnadzor संस्थानों के विशेषज्ञों और चिकित्सा संस्थानों के कर्मियों द्वारा। अस्पताल में भर्ती मरीजों से बैक्टीरियोलॉजिकल जांच के लिए सामग्री ली जाती है प्रवेश कार्यालयअस्पताल।

7.7. रोगियों या वाहक (संपर्कों) के साथ संवाद करने वाले व्यक्तियों से, सामग्री का संग्रह स्वास्थ्य सुविधाओं और अन्य संगठनों और संस्थानों के चिकित्सा कर्मचारियों द्वारा उस स्थान पर किया जाता है जहां रोगियों की पहचान की जाती है।

7.8. प्रयोगशाला अनुसंधान के लिए जैव सामग्री एक विशेष दिशा के साथ है। विषयों द्वारा स्वयं सामग्री के वितरण की अनुमति नहीं है। यदि सामग्री का समय पर वितरण असंभव है, तो परिरक्षकों और परिवहन माध्यमों का उपयोग किया जाता है (तालिका 1)।

8. बैक्टीरियोलॉजिकल रक्त परीक्षण

रक्त परीक्षण के लिए एक संकेत टाइफाइड-पैराटाइफाइड रोगों या अज्ञात मूल की ज्वर की स्थिति (अज्ञात मूल का बुखार) का संदेह है, जो 5 या अधिक दिनों के लिए मनाया जाता है (एसपी 3.1.1.2137-06)।

रक्त-पोषक माध्यम का अनुपात 1:10-1:60 होना चाहिए। स्वतंत्र रूप से लिए गए रक्त के नमूनों की संख्या और उनके लेने का समय उपस्थित चिकित्सक द्वारा अज्ञात मूल के बुखार के लिए MU 4.2.2039-05 के अनुसार या USSR के स्वास्थ्य मंत्रालय के MU 04-723 / 3 के अनुसार निर्धारित किया जाता है ( 1984) संदिग्ध टाइफाइड-पैराटाइफाइड रोगों के लिए। प्राप्त करने वाले रोगियों में जीवाणुरोधी दवाएं, दवा की अगली खुराक की शुरूआत (रिसेप्शन) से ठीक पहले नमूने एकत्र किए जाने चाहिए।

बुखार की उपस्थिति में, शरीर के तापमान में वृद्धि (लेकिन तापमान के चरम पर नहीं!) की पृष्ठभूमि के खिलाफ रक्त लेना इष्टतम है। पोषक माध्यम पर बुवाई सीधे रोगी के बिस्तर पर की जाती है।

यदि टाइफाइड-पैराटाइफाइड रोगों का संदेह है, तो रक्त संवर्धन के लिए रैपोपोर्ट माध्यम, 20% पित्त शोरबा, 1% ग्लूकोज (100 मिलीलीटर शीशियों में) के साथ मांस-पेप्टोन शोरबा का उपयोग किया जा सकता है। पहले बाँझ आसुत (नल) पानी में रक्त संस्कृतियों का उपयोग किया जाता था। हालांकि, विशेष रक्त संस्कृति मीडिया का उपयोग करना बेहतर है।

बुखार की ऊंचाई पर बोए गए रक्त की मात्रा 10 मिली, बाद की तारीख में - 20 मिली तक (बच्चों में - 5 मिली तक) हो सकती है।

5 दिनों से अधिक समय तक अज्ञात मूल के बुखार के लिए, एक नियम के रूप में, कई रक्त नमूनों की जांच की जानी चाहिए। MU 4.2.2039-05 के अनुसार एक नस से रक्त का नमूना लिया जाता है। वेनिपंक्चर के दौरान आकस्मिक रक्त संदूषण से सच्चे बैक्टीरिमिया को अलग करने के लिए यह आवश्यक है (वसामय या पसीने की ग्रंथि के आकस्मिक पंचर के कारण नमूना संदूषण की संभावना 3% है)। इस मामले में, रक्त संवर्धन के लिए दो माध्यमों का उपयोग किया जाता है: 1) एरोबेस और ऐच्छिक अवायवीय के लिए माध्यम और 2) बाध्यकारी अवायवीय के लिए माध्यम (उदाहरण के लिए, यूएसएसआर के स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेश के अनुसार "डबल" माध्यम + थियोग्लाइकॉल माध्यम दिनांक 12.04.85 एन 535) या एरोबिक्स और अवायवीय जीवों के लिए एक सार्वभौमिक माध्यम।

रूस में उपयोग के लिए स्वीकृत औद्योगिक रूप से उत्पादित मीडिया का उपयोग करना बेहतर है।

फसलों को प्रतिदिन देखने के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 दिनों के लिए ऊष्मायन किया जाता है। इस मामले में, माध्यम के घने हिस्से को धोते हुए, "डबल" माध्यम वाली शीशियों को झुकाया जाता है।

10 वें दिन वृद्धि के संकेतों की अनुपस्थिति में, एक नकारात्मक उत्तर जारी किया जाता है।

यदि वृद्धि के संकेत हैं (मैलापन, रैपोपोर्ट माध्यम की लाली, "डबल" माध्यम के घने हिस्से पर दृश्यमान कॉलोनियों की उपस्थिति), तो पॉलीकार्बोहाइड्रेट माध्यम पर समानांतर में और पेट्री डिश में घने माध्यम में बीजारोपण किया जाता है ( अज्ञात मूल के बुखार के मामले में रक्त अगर और संदिग्ध टाइफाइड पैराटाइफाइड रोगों के मामले में एंडो माध्यम)।

पॉलीकार्बोहाइड्रेट मीडिया पर प्रत्यक्ष टीकाकरण अध्ययन के समय को कम करने के लिए किया जाता है, इस धारणा के आधार पर कि जब रक्त को उच्च संभावना के साथ टीका लगाया जाता है, तो रोगज़नक़ मोनोकल्चर की वृद्धि देखी जाएगी। इस धारणा को नियंत्रित करने और अलग-अलग कॉलोनियों को विभाजित करके एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए एंडो माध्यम या रक्त अगर पर समानांतर चढ़ाना आवश्यक है।

यदि इन मीडिया पर मोनोकल्चर वृद्धि देखी जाती है, तो पॉलीकार्बोहाइड्रेट माध्यम के जैव रासायनिक गुणों को ध्यान में रखा जा सकता है। संस्कृति की शुद्धता को नियंत्रित करने के लिए ग्राम द्वारा दागे गए पॉलीकार्बोहाइड्रेट माध्यम से स्मीयर की माइक्रोस्कोपी करना आवश्यक है। इस स्तर पर, संबंधित एग्लूटीनेटिंग ओ- और एच-साल्मोनेला सेरा के साथ कांच पर एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया स्थापित करना और प्रारंभिक उत्तर जारी करना भी संभव है।

संदिग्ध टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की योजना चित्र 1 में दिखाई गई है।

चित्र एक। संदिग्ध टाइफाइड और पैराटायफायड के रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की योजना

चित्र एक। संदिग्ध टाइफाइड और पैराटायफायड के रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की योजना

अज्ञात मूल के बुखार वाले रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा की योजना चित्र 2 में दिखाई गई है।

रेखा चित्र नम्बर 2। अज्ञात मूल के बुखार वाले रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की योजना

रेखा चित्र नम्बर 2। अज्ञात मूल के बुखार वाले रोगियों के रक्त की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की योजना

सांस्कृतिक-रूपात्मक, एंजाइमी गुणों और सीरोलॉजिकल विशेषताओं द्वारा संस्कृति की आगे की पहचान के पाठ्यक्रम को संबंधित वर्गों में आगे वर्णित किया गया है।

9. मल की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा

शौच के तुरंत बाद एक कीटाणुरहित और अच्छी तरह से धोए गए बर्तन से मल के नमूने लिए जाते हैं, जिसके तल पर मोटे साफ कागज की एक शीट रखी जाती है। सामग्री को एक बाँझ कंटेनर के ढक्कन में लगे चम्मच-स्पैटुला का उपयोग करके एकत्र किया जाता है। एक रंग के साथ एक कंटेनर की अनुपस्थिति में, सामग्री लेने के लिए किसी भी बाँझ उपकरण (बाँझ लकड़ी के रंग, तार लूप, चम्मच, आदि) का उपयोग किया जाता है। रोग संबंधी अशुद्धियों की उपस्थिति में, बलगम, मवाद, गुच्छे वाले क्षेत्रों का चयन करना आवश्यक है, लेकिन रक्त से मुक्त। एक बंद जलाशय के साथ एक बाँझ प्लास्टिक पाश्चर पिपेट का उपयोग करके तरल मल के नमूने लिए जाते हैं।

ली जाने वाली सामग्री की मात्रा कम से कम 2 ग्राम होनी चाहिए। अखरोट; ढीले मल के मामले में, कंटेनर में इसकी परत कम से कम 1.5-2.0 सेमी होनी चाहिए। एक बाँझ कंटेनर में रखी गई सामग्री को 2 घंटे के भीतर प्रयोगशाला में पहुंचा दिया जाता है।

यदि सामग्री 2 घंटे के भीतर प्रयोगशाला में नहीं पहुंचाई जा सकती है, तो इसे एक परिरक्षक (एक माध्यम के साथ परिवहन प्रणाली) में एकत्र किया जाता है। सामग्री का आयतन माध्यम के आयतन से अधिक नहीं होना चाहिए।

माध्यम में मल को सावधानीपूर्वक समरूप बनाना चाहिए। नमूने दिन के दौरान अध्ययन शुरू होने से पहले एक रेफ्रिजरेटर (4-6 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किए जा सकते हैं।

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी के प्रेरक एजेंटों के साथ-साथ तीव्र आंतों के संक्रमण के अन्य रोगजनकों को अलग करने के लिए उपयोग किए जाने वाले परिवहन मीडिया और संरक्षक तालिका 1 में प्रस्तुत किए गए हैं।

तालिका एक

परिवहन माध्यम और परिरक्षक मल के परिवहन के लिए सबसे अधिक उपयोग किए जाते हैं

मलाशय से सीधे मलाशय से एकत्र किए गए मल के नमूनों का उपयोग मुख्य रूप से निदान को स्पष्ट करने के लिए किया जाता है (एमयू 4.2.2039-05)। सामग्री पैरामेडिकल कर्मियों द्वारा ली जाती है। एक नियम के रूप में, स्मीयर लेने के लिए एक विशेष जांच परिवहन प्रणाली का हिस्सा है। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि रेक्टल म्यूकोसा पर परिवहन मीडिया का प्रवेश अस्वीकार्य है! इसलिए रेक्टल स्वैब को सामग्री लेने के बाद ही परिवहन माध्यम में डुबोना चाहिए। रोगी को पेट की ओर खींचे गए कूल्हों और हाथों की हथेलियों के साथ नितंबों के साथ अपनी तरफ लेटने के लिए कहा जाता है। स्वैब जांच को गुदा में 4-5 सेमी की गहराई तक डाला जाता है और इसे धीरे से अक्ष के चारों ओर घुमाते हुए, गुदा क्रिप्ट से सामग्री एकत्र की जाती है। स्वाब प्रोब को सावधानी से निकालें और इसे परिवहन माध्यम में विसर्जित करें। बिना माध्यम के टैम्पोन के परिवहन की अनुमति नहीं है।

प्रयोगशाला में, मल के नमूनों का टीकाकरण सीधे सघन विभेदक नैदानिक ​​पोषक माध्यम पर और समानांतर में संवर्धन माध्यम पर किया जाता है।

मल की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा की योजना चित्र 3 में दिखाई गई है।

चित्र 3. मल की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा की योजना

चित्र 3. मल की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा की योजना

देशी मल से, 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान में 1:5-1:10 के अनुपात में एक निलंबन तैयार किया जाता है, बड़े कणों को व्यवस्थित करने के लिए 30 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। उसके बाद, सतह पर तैरनेवाला की एक बूंद घने पोषक मीडिया के साथ व्यंजन में टीका लगाया जाता है और निलंबन के 1 मिलीलीटर को संवर्धन माध्यम में टीका लगाया जाता है (सामग्री-मध्यम अनुपात 1:5 होना चाहिए)।

एक परिरक्षक (परिवहन माध्यम) में प्रयोगशाला में पहुंचाए गए मल को टीकाकरण से पहले माध्यम में सावधानी से समरूप किया जाना चाहिए, जिसके बाद सामग्री को सीधे ठोस माध्यम और संवर्धन माध्यम पर देशी मल के समान अनुपात में लगाया जाता है।

रेक्टल स्वैब से एकत्र किए गए मल के नमूनों की जांच उसी तरह की जाती है जैसे किसी परिरक्षक में दिए गए मल की। यह याद रखना चाहिए कि मलाशय की सूजन में देशी मल की तुलना में कम सूक्ष्मजीव होते हैं, इसलिए इनोकुलम की खुराक बढ़ाई जानी चाहिए।

मल में एस. टाइफी, एस. पैराटाइफी ए, एस. पैराटाइफी बी और एस. पैराटाइफी सी का अधिकतम पता लगाने के लिए संवर्धन माध्यम का उपयोग किया जाता है, हालांकि रोग की तीव्र अवधि में रोगियों में, रोगज़नक़ को अक्सर प्रत्यक्ष टीकाकरण द्वारा अलग किया जाता है। प्रत्यक्ष टीकाकरण के समानांतर संवर्धन मीडिया पर टीकाकरण अनिवार्य है!

सभी टीकों को डिफरेंशियल डायग्नोस्टिक मीडिया पर 18-24 घंटों के लिए, बिस्मथ-सल्फाइट अगर पर 24-48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। 24 घंटों के बाद, सॉलिड मीडिया (बिस्मथ-सल्फाइट एगर या एंडो) पर संवर्धन मीडिया से सीडिंग की जाती है। मध्यम)। घने मीडिया पर उगाए गए इन रोगजनकों की कालोनियों की विशेषता पॉलीकार्बोहाइड्रेट माध्यम पर जांच की जाती है।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि घने मीडिया के साथ प्लेट की सतह पर सामग्री को फैलाने की तकनीक को एक विशिष्ट प्रकार की पृथक कॉलोनियों की वृद्धि सुनिश्चित करनी चाहिए, जिसका उपयोग सूक्ष्मजीव के सांस्कृतिक गुणों का नेत्रहीन मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है।

एस टाइफी को अलग करने के लिए बिस्मथ सल्फाइट अगर (बीसीए) पसंदीदा तरीका है। एस टाइफी की विशिष्ट कॉलोनियां काले रंग की होती हैं और धातु की चमक के साथ काले या भूरे रंग के रिम से घिरी होती हैं। हालांकि, प्रचुर मात्रा में वृद्धि होने पर एस. टाइफी अक्सर आईसीए की विशेषता ब्लैकिंग का उत्पादन नहीं करता है, इसलिए एकल कॉलोनी विकास की अनुमति देने के लिए प्लेटों को टीका लगाया जाना चाहिए।

रूसी संघ में उपयोग के लिए स्वीकृत एंटरोबैक्टीरिया के लिए मानक चयनात्मक मीडिया पर फेकल नमूनों को टीका लगाया जा सकता है। हालांकि, एस tymhi को अलग करने के लिए बिस्मथ सल्फाइट अगर पसंदीदा तरीका है। एंजाइमी गुणों और सीरोलॉजिकल विशेषताओं द्वारा संस्कृतियों की आगे की पहचान के पाठ्यक्रम को आगे संबंधित अनुभागों में वर्णित किया गया है।

10. मूत्र की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच

रोग के पहले दिनों से निदान के लिए और रोगी के डिस्चार्ज होने तक, साथ ही बैक्टीरियोकैरियर की पहचान करने के लिए यूरिन कल्चर किया जाता है। चूंकि मूत्र में टाइफाइड और पैराटाइफाइड का उत्सर्जन समय-समय पर होता है और थोड़े समय के लिए, मूत्र परीक्षण 5-7 दिनों के अंतराल पर दोहराया जाना चाहिए।

का कड़ाई से पालन करना चाहिए सामान्य नियमएमयू 4.2.2039-05 में निर्धारित मूत्र संग्रह। मूत्र प्राप्त करने की विधि के बावजूद, इसे 2 घंटे के भीतर प्रयोगशाला में पहुंचाया जाना चाहिए। चरम मामलों में, मूत्र को रात भर रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जा सकता है।

यह याद रखना चाहिए कि, मूत्र की रासायनिक संरचना के आधार पर, इसमें मौजूद बैक्टीरिया भंडारण के दौरान मर सकते हैं और गुणा कर सकते हैं।

सामग्री के शेल्फ जीवन में वृद्धि से परिणाम की व्याख्या करना बेहद मुश्किल हो सकता है।

टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगजनकों सहित साल्मोनेला के लिए अनुशंसित घने विभेदक निदान मीडिया पर यूएसएसआर एन 535 के स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेश के अनुसार मूत्र का प्रत्यक्ष टीकाकरण (या सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद तलछट) बिना पूर्व संवर्धन के किया जाता है। उसी समय, देशी मूत्र को 1:1 के अनुपात में दोहरी सांद्रता के संवर्धन माध्यम में टीका लगाया जाता है, या मूत्र तलछट को सामान्य एकाग्रता के माध्यम में टीका लगाया जाता है। इनोक्यूलेशन को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 18-24 घंटों के लिए रखा जाता है, और फिर संवर्धन माध्यम को घने विभेदक निदान मीडिया पर टीका लगाया जाता है। सॉलिड मीडिया पर उगाई जाने वाली कालोनियों की पहचान सांस्कृतिक-एंजाइमी और सीरोलॉजिकल गुणों से होती है।

11. पित्त की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा (ग्रहणी संबंधी सामग्री)

एमयू 4.2.2039-05 के अनुसार पित्त को तीन बाँझ टेस्ट ट्यूब या बाँझ डिस्पोजेबल कंटेनरों में अलग-अलग भाग ए, बी, सी में एकत्र किया जाता है और प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है।

प्रत्येक भाग (ए, बी, सी) का अलग-अलग अध्ययन करें या तीन भागों का मिश्रण तैयार करें। नमूने लगाए गए हैं:

0.5 मिलीलीटर की मात्रा में घने विभेदक निदान मीडिया (आईसीए, एंडो, ईएमएस, आदि) पर;

1:10 के अनुपात में पोषक तत्व शोरबा के साथ एक टेस्ट ट्यूब (बोतल) में। संवर्धन माध्यम पर पित्त को टीका लगाने की कोई आवश्यकता नहीं है, जैसे पित्त अपने आप में टाइफाइड और पैराटाइफाइड के रोगजनकों के लिए एक अच्छा प्रजनन स्थल है।

टीकाकृत मीडिया 37 डिग्री सेल्सियस पर पित्त अवशेषों के साथ इनक्यूबेट किया जाता है।

18-24 घंटों के बाद, सघन पोषक माध्यम पर टीकाकरण की जांच की जाती है (आईसीए पर वृद्धि के परिणामों को 24 और 48 घंटों के बाद ध्यान में रखा जाता है) और पॉलीकार्बोहाइड्रेट माध्यम पर संदिग्ध कॉलोनियों की पुन: सीडिंग की जाती है।

पोषक तत्व शोरबा से, सघन विभेदक निदान माध्यमों पर बीजारोपण किया जाता है।

प्रत्यक्ष बोने के नकारात्मक परिणाम के मामले में शेष पित्त से, 18-24 घंटों के बाद और 3, 5, 7 और 10 दिनों के बाद घने विभेदक निदान मीडिया पर बार-बार बीजारोपण किया जाता है।

उगाए गए सूक्ष्मजीवों की पहचान सांस्कृतिक-रूपात्मक, एंजाइमेटिक और सीरोलॉजिकल गुणों द्वारा की जाती है।

12. गुलाबोला से सामग्री की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा

बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा (गुलाबेला के साथ "स्क्रैपिंग") अच्छी तरह से परिभाषित गुलाबोला की उपस्थिति में की जाती है। सामग्री को असमान रूप से एकत्र किया जाता है। ऐसा करने के लिए, गुलाबोला के ऊपर के त्वचा क्षेत्र को 70% से उपचारित किया जाता है। एथिल अल्कोहोल, फिर एक बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ सिक्त एक कपास झाड़ू के साथ पोंछें और एक बाँझ झाड़ू के साथ सूखें।

शोध के लिए सामग्री (ऊतक द्रव) गुलाबोला के ऊपर की त्वचा को स्केलपेल से दागकर प्राप्त की जाती है। पित्त शोरबा या आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की 1-2 बूंदों को क्षतिग्रस्त त्वचा पर लगाया जाता है, उभरे हुए ऊतक द्रव के साथ मिलाया जाता है और एक पाश्चर पिपेट या एक समान डिस्पोजेबल बाँझ उपकरण के साथ एक टेस्ट ट्यूब में तरल संवर्धन मीडिया (पित्त) के साथ एकत्र किया जाता है। शोरबा, रैपोपोर्ट माध्यम, आदि)। प्रयोगशाला में, इनोक्यूलेशन को 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है, इसके बाद सघन डिफरेंशियल डायग्नोस्टिक मीडिया (एंडो, ईएमएस, आईसीए) पर टीकाकरण किया जाता है।

13. अस्थि मज्जा की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा

यह सर्वविदित है कि टाइफाइड बुखार के निदान की प्रयोगशाला पुष्टि के मामले में, सबसे प्रभावी अस्थि मज्जा की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा है (रोगज़नक़ का टीकाकरण 90-95%) है। टाइफाइड बुखार के हल्के और मिटने वाले रूपों वाले रोगियों में भी, नैदानिक ​​​​पहचान के लिए मुश्किल है, साथ ही साथ रोगाणुरोधी दवाएं लेने की पृष्ठभूमि के खिलाफ, मायलोकल्चर का टीकाकरण रक्त संस्कृतियों की तुलना में काफी अधिक है।

हालांकि, व्यवहार में, अस्थि मज्जा की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच बहुत कम ही की जाती है, केवल विशेष नैदानिक ​​​​संकेतों के लिए, टाइफाइड बुखार या पैराटाइफाइड बुखार के निदान की पुष्टि करने वाले अन्य प्रयोगशाला डेटा की अनुपस्थिति में, टीके। यह आक्रामक प्रक्रिया काफी दर्दनाक है। अनुसंधान के लिए सामग्री का नमूना केवल एक उपयुक्त विशेषज्ञ की उपस्थिति में एक अस्पताल में किया जाता है।

0.50-0.75 मिली की मात्रा में बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा (एस्पिरेट) के लिए सामग्री उरोस्थि (हैंडल या बॉडी) को पंचर करके असमान रूप से प्राप्त की जाती है और एक संवर्धन माध्यम (पित्त शोरबा, रैपोपोर्ट माध्यम, आदि) के साथ एक टेस्ट ट्यूब में टीका लगाया जाता है।

यदि पंचर के तुरंत बाद महाप्राण को संवर्धन माध्यम में टीका नहीं लगाया जा सकता है, तो इसे एक बाँझ ट्यूब में एकत्र किया जाता है और तुरंत प्रयोगशाला में भेजा जाता है, जहां संवर्धन माध्यम में टीकाकरण किया जाता है। प्रयोगशाला में, 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर टीका लगाया जाता है, इसके बाद घने विभेदक निदान मीडिया पर टीका लगाया जाता है।

अन्य जैविक सामग्री की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के रूप में आगे का शोध किया जाता है।

14. पोषक माध्यम और अभिकर्मक

रोगजनकों के अलगाव और पहचान के लिए संस्कृति मीडिया की सूची आंतों में संक्रमण, विशेष रूप से एंटरोबैक्टीरियासी, व्यापक और लगातार विस्तार कर रहा है। विशिष्ट वातावरण का चुनाव काफी हद तक स्थानीय आर्थिक स्थितियों और परंपराओं द्वारा निर्धारित किया जाता है। हालांकि, इसे कई बुनियादी सिद्धांतों द्वारा निर्देशित किया जाना चाहिए।

14.1. संस्कृति माध्यम के विवरण से संकेत मिलता है कि इसका उपयोग न केवल साल्मोनेला का पता लगाने के लिए किया जा सकता है, बल्कि साल्मोनेला टाइफी और एस। पैराटाइफी ए, बी और सी के लिए भी किया जा सकता है।

14.2 प्रतिष्ठित निर्माताओं से निर्जलित संस्कृति मीडिया को सीधे प्रयोगशाला में तैयार मीडिया पर प्राथमिकता दी जानी चाहिए।

14.3. प्रयोगशाला में संस्कृति माध्यम के प्रत्येक बैच को परीक्षण उपभेदों (आंतरिक गुणवत्ता नियंत्रण) द्वारा नियंत्रित किया जाना चाहिए।

14.4. टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगों के प्रयोगशाला निदान के लिए और स्थापित प्रक्रिया के अनुसार रूसी संघ के क्षेत्र में उपयोग के लिए अनुमोदित बैक्टीरिया वाहक, पोषक माध्यम और अभिकर्मकों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाना चाहिए।

15. एंजाइमी गुणों के अध्ययन के तरीके

वर्तमान में, टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगजनकों सहित एंटरोबैक्टीरियासी परिवार के सूक्ष्मजीवों की एंजाइमेटिक गतिविधि का अध्ययन करने के लिए, घरेलू और विदेशी उत्पादन के विभिन्न नैदानिक ​​परीक्षण प्रणालियों को विकसित, उत्पादित और पंजीकृत किया गया है (टेस्ट ट्यूब और प्लेट्स में सबसे सरल शास्त्रीय हिस मीडिया से स्वचालित तक। विश्लेषक)। यदि परीक्षण प्रणाली एक जीनस के स्तर तक एक सूक्ष्मजीव की पहचान करना और उपभेदों की एंजाइमेटिक गतिविधि की विशेषताओं की पहचान करना संभव बनाती है, तो उनका उपयोग टाइफाइड और पैराटाइफाइड बुखार के रोगजनकों की पहचान करने के लिए किया जा सकता है। परीक्षण प्रणालियों के साथ काम करने की प्रक्रिया उपयोग के निर्देशों में विस्तृत है और इसका कड़ाई से पालन किया जाना चाहिए।

16. रोगजनकों के जैविक गुण

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी के प्रेरक एजेंट परिवार एंटरोबैक्टीरियासी, जीनस साल्मोनेला, एंटरिका प्रजाति, उप-प्रजाति I (एंटरिका) से संबंधित हैं और इस उप-प्रजाति, प्रजातियों, जीनस और परिवार के रूपात्मक, सांस्कृतिक और एंजाइमेटिक गुण हैं।

जीनस साल्मोनेला प्रजाति एंटरिका के प्रतिनिधियों ने ऐतिहासिक रूप से एक ऐसी स्थिति विकसित की है जब सेरोवर को अन्य जीवाणुओं की तरह एक एंटीजेनिक सूत्र द्वारा नहीं, बल्कि रोगों (मानव या पशु), देश, शहर या सड़क के नाम से नामित किया गया था, जहां वे अलग-थलग थे। आदि। इन प्रजातियों के नामों पर विचार करना एक गलती है, क्योंकि उनकी कोई टैक्सोनॉमिक स्थिति नहीं है। हालांकि, सबसे आम साल्मोनेला सेरोवर के नाम इतने परिचित हैं कि उन्हें एंटीजेनिक फ़ार्मुलों से बदलना लगभग असंभव है। इसलिए, आधुनिक कॉफ़मैन-व्हाइट योजना में, जब साल्मोनेला को केवल एंटरिका उप-प्रजाति I नामित किया जाता है, तो प्रजातियों के पदनाम के बजाय, सेरोवर के नाम का उपयोग किया जाता है, लेकिन यह एक बड़े अक्षर के साथ लिखा जाता है।

इस प्रकार, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के प्रेरक एजेंटों के पूरे नाम इस प्रकार हैं:

साल्मोनेला एंटरिका सबस्प। एंटरिका सेरोवर टाइफी;

साल्मोनेला एंटरिका सबस्प। एंटरिका सेरोवर पैराटाइफी ए;

साल्मोनेला एंटरिका सबस्प। एंटरिका सेरोवर पैराटाइफी बी;

साल्मोनेला एंटरिका सबस्प। एंटरिका सेरोवर पैराटाइफी सी

सामान्य व्यवहार में, नामों के संक्षिप्त संस्करणों का उपयोग करना संभव है:

साल्मोनेला सेर। टाइफी या साल्मोनेला टाइफी या एस टाइफी;

साल्मोनेला सेर। पैराटाइफी ए या साल्मोनेला पैराटाइफी ए या एस। पैराटाइफी ए;

साल्मोनेला सेर। Paratyphi B या साल्मोनेला Paratyphi B या S. Paratyphi B;

साल्मोनेला सेर। Paratyphi C या साल्मोनेला Paratyphi C या S. Paratyphi C

16.1. सांस्कृतिक और रूपात्मक गुण

मोबाइल ग्राम-नकारात्मक छड़ें बीजाणु और कैप्सूल नहीं बनाती हैं, वैकल्पिक अवायवीय सामान्य पोषक माध्यम पर अच्छी तरह से विकसित होते हैं।

एक साधारण पोषक तत्व अगर पर - कॉलोनियां एक चिकनी किनारे और एक चिकनी सतह के साथ थोड़ा उत्तल होती हैं, 1 मिमी से अधिक की चमक के साथ नम।

विभेदक निदान मीडिया पर (एक विभेदक पदार्थ के रूप में लैक्टोज युक्त) - पारदर्शी, रंगहीन या नीला, और कभी-कभी गुलाबी या कॉलोनी वातावरण का रंग (एंडो, प्लॉस्किरेव, ईएमएस और अन्य समान मीडिया)।

SS-arape पर, एक काले केंद्र के साथ मध्यम रंग की कॉलोनियाँ।

बिस्मथ-सल्फाइट माध्यम पर, एस। टाइफी, एस। पैराटाइफी बी की पृथक कॉलोनियां एक विशिष्ट धातु की चमक के साथ काले रंग की होती हैं, कॉलोनी के नीचे का माध्यम काले रंग में रंगा जाता है। S. Paratyphi A की कॉलोनियां हरे रंग की, माध्यम के रंग में हल्की, कोमल होती हैं।

मीट-पेप्टोन एगर पर एस. पैराटाइफी बी (पैराटाइफाइड बी का प्रेरक एजेंट) के उपभेद कॉलोनियों की परिधि के साथ एक ऊंचा म्यूकॉइड दीवार बना सकते हैं। जब फसलों को कमरे के तापमान पर संग्रहित किया जाता है तो श्लेष्मा शाफ्ट 2-5 दिनों के लिए विकसित होता है। यह लक्षण स्थायी और नैदानिक ​​नहीं है।

16.2. एंजाइमी गुण

एंजाइमेटिक गुणों का अध्ययन साल्मोनेला और अन्य एंटरोबैक्टीरिया की पहचान और अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले कार्बोहाइड्रेट, पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल, अमीनो एसिड और अन्य कार्बनिक यौगिकों के एक सेट के संबंध में किया जाता है। एक नियम के रूप में, व्यावहारिक प्रयोगशालाओं में आंतों के बैक्टीरिया के परिवार का हिस्सा मुख्य जेनेरा की पहचान के लिए कम संख्या में परीक्षणों का उपयोग किया जाता है। टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी और सी के प्रेरक एजेंटों सहित साल्मोनेला के एंजाइमेटिक गुणों के लक्षण तालिका 2 में प्रस्तुत किए गए हैं।

तालिका 2

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए, बी, सी के रोगजनकों के एंजाइमेटिक गुण

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