طريقة بحث الشعاب المرجانية. تفاعل التألق المناعي. آلية ، مكونات ، تطبيق. كيفية تفسير نتائج الدراسات المصلية

تستخدم هذه الطريقة ظاهرة التلألؤ.

يكمن جوهر ظاهرة اللمعان في حقيقة أنه عند الامتصاص أنواع مختلفةالطاقة (الضوء ، الكهرباء ، إلخ) بواسطة جزيئات بعض المواد ، تمر ذراتها في حالة مثارة ، ثم تعود إلى حالتها الأصلية ، فإنها تطلق الطاقة الممتصة في شكل إشعاع ضوئي.

في RIF ، يتجلى اللمعان في شكل مضان - وهو توهج يحدث في لحظة التشعيع بضوء مثير ويتوقف فورًا بعد نهايته.

العديد من المواد والكائنات الحية الدقيقة لها الفلورة الخاصة بها (ما يسمى الأولية) ، ولكن شدتها منخفضة للغاية. المواد التي لها تألق أولي مكثف وتستخدم لنقل خصائص الفلورسنت للمواد غير الفلورية تسمى الفلوروكرومات. يسمى هذا التألق المستحث بالثانوية.

لإثارة التألق في الفحص المجهري الفلوري ، غالبًا ما يتم استخدام الجزء فوق البنفسجي أو الأزرق البنفسجي من الطيف (الطول الموجي 300-460 نانومتر). لهذه الأغراض ، تحتوي المختبرات على مجاهر مضيئة من طرز مختلفة - ML-1-ML-4 ، "Lumam".

في الممارسة الفيروسية ، يتم استخدام طريقتين رئيسيتين للفحص المجهري الفلوري: المعالجة بالفلور والأجسام المضادة الفلورية (أو RIF).

فلوروكروميشن- هذا هو علاج المستحضرات بالفلوروكروم من أجل زيادة قوة وتباين تألقها. الأكثر أهمية هو الفلوركروم أكريدين البرتقالي ، الذي يسبب مضان متعدد الألوان للأحماض النووية. لذلك ، عندما يتم معالجة المستحضرات باستخدام هذا الفلوركروم ، يتألق حمض الديوكسي ريبونوكلييك باللون الأخضر الزاهي ، وحمض الريبونوكلييك - أحمر ياقوتي.

تتكون طريقة RIF من حقيقة أن الأجسام المضادة المتصلة بالفلوروكروم تحتفظ بالقدرة على الدخول في علاقة محددة مع مستضد متماثل. يتم الكشف عن معقد المستضد + الأجسام المضادة الناتجة ، بسبب وجود الفلوروكروم فيه ، تحت المجهر الفلوري بواسطة توهج مميز.

للحصول على الأجسام المضادة ، يتم استخدام الأمصال عالية النشاط المناعي ، والتي يتم منها عزل الأجسام المضادة ووضع العلامات عليها باستخدام الفلوروكروم. الفلوركرومات الأكثر استخدامًا هي إيزوثيوسيانات FITC-fluorescein (الضوء الأخضر) و PCX-rhodamine sulfochloride (الضوء الأحمر). يسمى الجسم المضاد المسمى الفلوروكروم مترافق.

طريقة تحضير وتلوين المستحضرات كالتالي:

تحضير مسحات أو بصمات من الأعضاء أو على زلات الغلاف - ثقافة خلية مصابة على شرائح زجاجية ؛ يمكن أيضًا استخدام المقاطع النسيجية ؛
يتم تجفيف المستحضرات في الهواء وتثبيتها في أسيتون مبرد عند درجة حرارة الغرفة أو عند سالب 15 درجة مئوية (من 15 دقيقة إلى 4-16 ساعة) ؛
ملطخة بطريقة مباشرة أو غير مباشرة ؛ احتفظ بالسجلات تحت مجهر الفلورسنت وفقًا لشدة التوهج ، المقدرة بالصلبان.

في موازاة ذلك ، تحضير وصبغ المستحضرات من حيوان سليم - مراقبة.

هناك طريقتان رئيسيتان لتطبيق الأجسام المضادة الفلورية: مباشرة وغير مباشرة.

الطريقة المباشرة (خطوة واحدة). يتم تطبيق متقارن (مصل فلوري للفيروس المشتبه به) على المستحضر الثابت ، المحتضن لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في غرفة رطبة. ثم يتم غسل الدواء من الاتحاد غير المرتبط بالمحلول الملحي (درجة الحموضة 7.2 - 7.5) ، وتجفيفه في الهواء ، ويتم تطبيق الزيت غير الفلوري وفحصه تحت المجهر.

تسمح الطريقة المباشرة باكتشاف وتحديد المستضد. للقيام بذلك ، يجب أن يكون لديك مصل فلورسنت لكل فيروس.

طريقة غير مباشرة (مرحلتين). يتم تطبيق مصل غير محدد يحتوي على أجسام مضادة للفيروس المشتبه به على المستحضر الثابت ، المحتضن لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، ويتم غسل الأجسام المضادة غير المقيدة. يتم وضع مصل مضاد للأنواع الفلورية على المستحضر ، يتوافق مع نوع الحيوان الذي ينتج أجسامًا مضادة للفيروسات متماثلة ، ويتم تحضينه لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. ثم يتم غسل الدواء من الأجسام المضادة غير المقيدة ، وتجفيفها في الهواء ، ويتم وضع الزيت غير الفلوري وفحصه تحت المجهر الفلوري.

يتم الحصول على الأمصال المضادة للأنواع عن طريق تحصين الحيوانات بالجلوبيولين من تلك الأنواع التي تعمل كمنتجين للأجسام المضادة للفيروسات. لذلك ، إذا تم الحصول على الأجسام المضادة للفيروسات على الأرانب ، فسيتم استخدام مصل مضاد للأرانب الفلوريسنت.

لا تسمح الطريقة غير المباشرة باكتشاف وتحديد المستضد فحسب ، بل تسمح أيضًا باكتشاف عيار الجسم المضاد وتحديده. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لهذه الطريقة الكشف عن مستضدات فيروسات مختلفة باستخدام مصل واحد مسمى ، لأنها تعتمد على استخدام الأمصال المضادة للأنواع. يتم استخدام الأمصال المضادة للأرانب ، والأبقار ، والمضادة للحصان ، والأمصال ضد الجلوبيولين لخنازير غينيا بشكل أكثر شيوعًا.

تم تطوير العديد من التعديلات على الطريقة غير المباشرة. طريقة استخدام المكمل تستحق أكبر قدر من الاهتمام. تتمثل الطريقة في تطبيق مصل معطل غير الفلوريسنت وخنزير غينيا على المستحضر الثابت ، وحفظه لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، وغسله ، واكتشاف المستضد + الجسم المضاد + المركب المكمل ، وتطبيق المصل المضاد التكميلي الفلوريسنت ، وحفظها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، وغسلها ، وتجفيفها في الهواء وفحصها تحت مجهر الفلورسنت.

مزايا RIF: خصوصية عالية وحساسية ؛ تقنية سهولة الإعداد يتطلب الحد الأدنى من عدد المكونات. هذه طريقة تشخيص صريحة ، حيث يمكنك الحصول على إجابة في غضون ساعات قليلة. تشمل العيوب الذاتية في تقييم شدة التلألؤ ، ولسوء الحظ ، تكون الأمصال الفلورية في بعض الأحيان ذات نوعية رديئة. حاليًا ، يستخدم RIF على نطاق واسع في تشخيص الأمراض الحيوانية الفيروسية.

إذا وجدت خطأً ، فيرجى تحديد جزء من النص والنقر السيطرة + أدخل.

اختبار التألق المناعي (IF) هو اختبار مصلي يكتشف الأجسام المضادة لمولدات المضادات المعروفة. تتكون الطريقة في الفحص المجهري للمسحات الملطخة.

يستخدم هذا التفاعل في علم المناعة وعلم الفيروسات وعلم الأحياء الدقيقة. يسمح لك بتحديد وجود الفيروسات والبكتيريا والفطريات والأوليات و ICC. يستخدم RIF على نطاق واسع في الممارسة التشخيصية للكشف عن المستضدات الفيروسية والبكتيرية في المواد المعدية. تعتمد الطريقة على قدرة الفلوروكروم على الارتباط بالبروتينات دون انتهاك خصوصياتها المناعية. يستخدم بشكل رئيسي في تشخيص التهابات المسالك البولية.

هناك الطرق التالية لتنفيذ تفاعل التألق المناعي: مباشر ، غير مباشر ، مع مكمل. تتمثل الطريقة المباشرة في تلطيخ المادة بالكروم الفلوري. نظرًا لقدرة مستضدات الميكروبات أو الأنسجة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت ، يتم تعريفها على أنها خلايا ذات حدود خضراء زاهية الألوان.

تتكون الطريقة غير المباشرة في تحديد معقد المستضد + الجسم المضاد. للقيام بذلك ، يتم معالجة المادة التجريبية بأجسام مضادة من مصل الأرانب المضاد للميكروبات المعدة للتشخيص. بعد أن ترتبط الأجسام المضادة بالميكروبات ، يتم فصلها عن تلك غير المقيدة ومعالجتها بمصل مضاد للأرانب المسمى بالفلوروكروم. بعد ذلك ، يتم تحديد الميكروب المعقد + الأجسام المضادة للميكروبات + الأجسام المضادة للأرانب باستخدام مجهر الأشعة فوق البنفسجية بنفس الطريقة كما في الطريقة المباشرة.

لا غنى عن تفاعل التألق المناعي في تشخيص مرض الزهري. تحت تأثير الفلوروكروم ، يتم تحديد العامل المسبب لمرض الزهري كخلية ذات حدود صفراء وخضراء. عدم وجود توهج يعني أن المريض غير مصاب بمرض الزهري. غالبًا ما يوصف هذا التحليل بتفاعل واسرمان الإيجابي. هذه الطريقة فعالة جدًا في التشخيص ، حيث تسمح لك بتحديد العوامل الممرضة المراحل الأولىالأمراض.

بالإضافة إلى حقيقة أن RIF يسمح لك بتشخيص مرض الزهري ، فإنه يستخدم أيضًا لتحديد وجود مسببات الأمراض مثل الكلاميديا والميكوبلازما والتريكوموناس ومسببات مرض السيلان والهربس التناسلي.

للتحليل ، يتم استخدام المسحات أو الدم الوريدي. إجراء أخذ اللطاخة غير مؤلم تمامًا ولا يشكل أي خطر. استعد لهذا التحليل. قبل 12 ساعة من ذلك ، لا ينصح باستخدام منتجات النظافة ، مثل القليل أو المواد الهلامية. أيضًا ، في بعض الأحيان ، وفقًا لشهادة الطبيب ، يتم إجراء استفزاز. للقيام بذلك ، يوصون بتناول الطعام الحار أو الكحول ، أو إجراء حقنة من مادة استفزازية ، مثل لقاح الغونوفاكين أو الحمى. بالإضافة إلى ذلك ، الفاصل الزمني بين الأدوية المضادة للبكتيرياويجب أن يكون تسليم التحليل أربعة عشر يومًا على الأقل.

عند تقييم النتائج ، ينبغي للمرء أن يأخذ في الاعتبار حقيقة أن اللمعان لا يُلاحظ فقط في البكتيريا الحية ، ولكن أيضًا في البكتيريا الميتة ، خاصة بالنسبة للكلاميديا. بعد تناول المضادات الحيوية ، تتوهج أيضًا خلايا الكلاميديا الميتة.

مع الإعداد المناسب للمريض ومراعاة أسلوب أخذ اللطاخة ، يتيح لك هذا التحليل التعرف على الأمراض في المراحل المبكرة ، وهو أمر مهم جدًا بالنسبة العلاج في الوقت المناسب. الجوانب الإيجابية لهذه الطريقة هي قصر الوقت للحصول على النتيجة ، وسهولة التنفيذ وانخفاض تكلفة التحليل.

تشمل العيوب حقيقة أن كمية كبيرة بما فيه الكفاية من المواد قيد الدراسة مطلوبة للتحليل. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن فقط للأخصائي المتمرس تقييم النتائج.

اكتشف كونز في عام 1942 رد فعل التألق المناعي ليس طريقة بحث جديدة. ومع ذلك ، فإن ظهور تقنيات الورم الهجين ، التي جعلت من الممكن الحصول على الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، قد أعطى "حياة ثانية" لهذا التفاعل ، لأن استخدامها جعل من الممكن زيادة حساسية هذا التفاعل وخصوصياته عدة مرات.

واليوم سوف نخبرك بالتفصيل عن رد فعل التألق المناعي المباشر وغير المباشر (RIF) كطريقة تشخيص Koons للرجال والنساء البالغين أثناء الحمل.

ما هو رد فعل المناعي

يمثل فرصة ممتازة للحصول على تشخيص دقيق بسرعة ، يتيح لك تفاعل التألق المناعي تحديد وجود العامل المسبب في المادة المرضية. لهذا الغرض ، يتم استخدام مسحة من مادة تمت معالجتها خصيصًا باستخدام FITC (فلوريسئين أيزوثيوسيانات) ودراستها كتحليل غير متجانس.

للحصول على النتيجة ، يتم استخدام مجهر الفلورسنت ، في نظامه البصري توجد مجموعة من مرشحات الضوء لتزويد التحضير بضوء أزرق بنفسجي أو فوق بنفسجي له طول موجي معين. تسمح هذه الحالة للفلوروكروم بالتألق في نطاق معين. يقوم الباحث بتقييم خصائص التوهج وطبيعته وحجم الأشياء وموضعها النسبي.

لمن تم تعيينه

يمكن وصف إجراء تفاعل التألق المناعي في تشخيص العديد من الأمراض الفيروسية. على وجه الخصوص ، يتم وصفه لإجراء فحص شامل لتحديد العوامل التالية:

وجود فيروس في الجسم.
عدوى السالمونيلا
وجود مستضدات معينة في الجسم ؛
تم الكشف عن احتمال إصابة الجسم بالكلاميديا والميكوبلازما والكائنات الحية الدقيقة الأخرى التي لديها القدرة على بدء الأمراض الفيروسية البشرية ؛
تشخيص الأمراض الفيروسية في الحيوانات.

تسمح المؤشرات المذكورة باستخدام تفاعل التألق المناعي عند اكتشافه في البشر والحيوانات. أمراض فيروسيةطبيعة مختلفة.

أهداف

بما أن هذه الطريقة التشخيصية لها مزايا عديدة من بينها كفاءتها العالية وسرعة إجرائها والحصول على النتائج ، فضلًا عن عدم وجود عدد كبير من موانع الاستعمال ، فهي تستخدم لتحديد التواجد في الجسم اصابات فيروسية. لذلك ، يمكن وصف هذا التحليل لإجراء التشخيص وتوضيحه ، على أساسه يتم وصف نظام العلاج.

الإجراء لا يسبب عدم ارتياحمن الضروري الحصول على مادة للتحليل مأخوذة من أي سوائل بالجسم: اللعاب والبلغم والكشط من سطح الأغشية المخاطية. يمكن أيضًا أخذ الدم للتحليل. يتم تحديد تواتر تفاعل التألق المناعي من قبل الطبيب المعالج ، الذي يحتاج إلى الحصول على بيانات حول ديناميات العمليات التي تحدث في الجسم.

نظرًا لأن هذا التحليل لا يضر بالجسم والرفاهية العامة للشخص ، يمكن وصفه إذا لزم الأمر.

أنواع مثل هذا الإجراء

اليوم ، يتم استخدام عدة أنواع من هذا التحليل ، لكل منها عدد من الميزات المحددة ويسمح لك بالحصول على الصورة الأكثر تفصيلاً للعمليات التي تحدث في الجسم.

تشمل أنواع تفاعلات التألق المناعي ما يلي:

- أحد أسرع أنواع التشخيصات تطورًا ، يتيح هذا التحليل الحصول على بيانات كمية دون استخدام التخفيفات التسلسلية. باستخدام القياسات التي تم الحصول عليها للكثافة الضوئية للسائل ، من الممكن تحديد مستوى تركيز المكون المطلوب بدقة. يتم استخدام الاحتمالات الواسعة لهذا النوع من التحليل عند استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لتنفيذه ، مما يجعل من الممكن تحديد مرحلة العملية المعدية وشدتها ؛
تشخيص الحمض النووي- تعتمد هذه الطريقة على الارتباط التكميلي للنيوكليوتيدات ، حيث يمكن استخدام السوائل مثل اللعاب والدم والسائل النخاعي والبول والبلغم وعينات الخزعة والدم. تكتشف هذه الطريقة بشكل أكثر فاعلية وجود فيروسات الورم الحليمي في الجسم ، ومع ذلك ، يمكن للعديد من أنظمة الاختبار الحديثة أن تعطي أحيانًا نتائج إيجابية كاذبة وسلبية كاذبة. قد يكون السبب وراء ذلك هو تلوث عينات السوائل لتحليل الحمض النووي المحدد ، والذي قد يكون لوجوده طابع متداخل أو كلي ؛
الكروماتوغرافيا المناعية- خصوصية هذه الطريقة لتحديد وجود بيئة مرضية وفيروسات في الجسم هي استخدام الأجسام المضادة الموصوفة أثناء التفاعل. تستخدم طريقة التشخيص هذه لتحديد ودرجة نشاط عملية الإصابة بالمكورات العقدية من المجموعة A ، وكذلك الكلاميديا من الأنواع التالية: Clamikit R Innotech International ، Clearview TM Chlamydia من Oxoid. تمتلك أعلى حساسية وأنظمة اختبار تعتمد على منهجية البحث هذه. تستخدم عادة كاختبار توجيه.

تتميز الأصناف المدرجة بسمات السلوك والخصائص المحددة للنتائج ، ومع ذلك ، تهدف جميعها إلى الحصول على بيانات حول وجود الكائنات الحية الدقيقة والفيروسات المرضية في الجسم ، وكذلك عن درجة تكاثرها ونشاطها.

مؤشرات لتنفيذ

يمكن وصف تفاعل التألق المناعي للكشف عن أي نوع من البيئة المرضية في الجسم.

يتم تحديد الكلاميديا والتريكوموناد والمكورات البنية وكذلك اللمبلية من جميع الأنواع خلال هذا النوع من التشخيص. وأمراض أخرى تتطلب أيضًا RIF. تعيين طبيب لتنفيذه إلزامي.

موانع لعقد

نظرًا لأن هذا التفاعل يتطلب أي نوع من سوائل الجسم كمادة اختبار ، فعادة ما يكون تناولها ليس بالأمر الصعب ولا توجد موانع لإجراء تفاعل التألق المناعي. ومع ذلك ، أثناء الحمل وعند الأطفال الذين تقل أعمارهم عن 6 أشهر ، يتم أخذ عينات للبحث بأقصى احتياطات.

يسمح غياب موانع الاستعمال بإجراء هذا النوع من التشخيص عندما يصفه الطبيب لجميع المرضى. يتم ضمان سلامته من خلال استخدام أداة مطهرة ومحاقن يمكن التخلص منها.

التحضير لهذا الإجراء

لا توجد ميزات لأخذ المواد لهذا التحليل. يؤخذ الدم من أجله على معدة فارغة ، بحيث لا يحتوي على نسبة عالية من المواد التي يمكن أن تغير الشهادة الصحيحة وتعطي صورة كاذبة.

كيف يتم أخذ العينات

نظرًا لعدم الحاجة إلى تحضير خاص للتحليل ، تناول فقط 12 ساعة قبل استبعاده وعدم استخدامه أدوية، يتم أخذ مادة الاختبار كعملية طبيعية لأخذ سوائل الجسم لتحليلها.

قد تختلف الأحاسيس الذاتية أثناء الإجراء تبعًا للحساسية.

فك رموز النتائج

يتيح لك استخدام أنظمة الاختبار الحديثة الحصول على نتائج التحليل الأكثر دقة. يتم استخدام البيانات التالية لفك تشفير النتيجة:

درجة شدة التألق.
الظل مضان
الطبيعة المحيطية لعملية توهج الكائن ؛
خصائص التشكل ، موقع العامل الممرض في اللطاخة المأخوذة من مادة الاختبار وأبعادها.

أثناء دراسة الأشياء الكبيرة (على سبيل المثال ، البستانيريلا ، المشعرة ، الخلايا المتأثرة بالفعل بالفيروسات) ، تتيح المعايير المذكورة أعلاه الحصول على النتائج الأكثر موثوقية. ومع ذلك ، فإن الأجسام الأولية للميكوبلازما والكلاميديا لها أحجام تقع في حدود دقة المجهر الفلوري ، مما يجعل الأمر صعبًا

يجعل من الصعب الحصول على نتيجة دقيقة ، لأن التوهج المحيطي يفقد بعض شدته. لم تعد المعايير المتبقية كافية لتحديد دقيق للكائنات الحية الدقيقة المدروسة. لهذا السبب ، تُفرض متطلبات خاصة على المتخصصين الذين يجرون هذا النوع من البحث: يجب أن يكون مستوى مؤهلاتهم كافياً للعمل مع البيانات المتاحة.

لهذا السبب ، يمكن فقط للطبيب الذي يتمتع بمستوى مؤهل مناسب التعامل مع فك تشفير التحليل الذي تم الحصول عليه. اقرأ عن سعر بحث RIF أدناه.

متوسط السعر

يعتمد سعر اختبار التألق المناعي على موقع الاختبار ومستواه. مؤسسة طبية ، ووكذلك مؤهلات الشخص الذي يجري التحليل. اليوم ، تتراوح التكلفة من 1280 إلى 2160 روبل.

سيخبرك الفيديو أدناه بالمزيد عن التفاعلات المناعية:

طريقة التألق المناعي (RIF ، تفاعل التألق المناعي ، تفاعل Koons) هي طريقة للكشف عن مستضدات معينة باستخدام أجسام مضادة مقترنة بالفلوروكروم. لديها حساسية وخصوصية عالية.

تستخدم للتشخيص السريع أمراض معدية(تحديد العامل الممرض في مادة الاختبار) ، وكذلك لتحديد الأجسام المضادة والمستقبلات السطحية وعلامات الكريات البيض (التنميط المناعي) والخلايا الأخرى.

تم الكشف عن المستضدات البكتيرية والفيروسية في المواد المعدية والأنسجة الحيوانية ومزارع الخلايا باستخدام الأجسام المضادة الفلورية (الأمصال). تطبيق واسعفي ممارسة التشخيص. يعتمد تحضير الأمصال الفلورية على قدرة بعض الفلوروكرومات (على سبيل المثال ، فلورسين أيزوثيوسيانات) على الدخول في رابطة كيميائية مع بروتينات المصل دون انتهاك خصوصياتها المناعية.

هناك ثلاثة أنواع من الطرق: مباشرة ، غير مباشرة ، مع تكملة. تعتمد طريقة RIF المباشرة على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بمصل مناعي بأجسام مضادة تحمل علامات الفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت. تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة ، والتي تُعالج بمصل إنارة ، على طول محيط الخلية في شكل حد أخضر.

تتكون طريقة RIF غير المباشرة في تحديد معقد الأجسام المضادة للمستضد باستخدام مصل مضاد الغلوبولين (الجسم المضاد) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك ، يتم التعامل مع مسحات من الميكروبات المعلقة بأجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات مصل التشخيص. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية ، ويتم الكشف عن الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمضاد الغلوبولين (مضاد للأرانب) المسمى بالفلوروكرومات. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للأرانب تحمل علامة الفلوروكروم. لوحظ هذا المركب في مجهر الفلورسنت ، كما في الطريقة المباشرة.

آلية. على شريحة زجاجية ، يتم تحضير مسحة من مادة الاختبار ، وتثبيتها على اللهب وتعالج بمصل أرنب مناعي يحتوي على أجسام مضادة ضد مستضدات مسببات الأمراض. لتشكيل معقد الأجسام المضادة للمستضد ، يتم وضع المستحضر في غرفة رطبة وحضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، وبعد ذلك يتم غسله جيدًا بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضد. بعد ذلك ، يتم وضع مصل مضاد للجلوبيولين الفلوري ضد جلوبيولين الأرانب على المستحضر ، المحتضن لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، ثم يتم غسل المستحضر جيدًا بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. نتيجة لارتباط مصل مضاد الجلوبيولين الفلوري بأجسام مضادة محددة مثبتة على المستضد ، يتم تكوين مجمعات ضوئية للمستضد والأجسام المضادة ، والتي يتم اكتشافها بواسطة الفحص المجهري الفلوري.

22. إنزيم المقايسة المناعية- معملية بالطريقة المناعية النوعية أو تحديد الكمياتالمركبات المختلفة والجزيئات الكبيرة والفيروسات وما إلى ذلك ، والتي تعتمد على تفاعل محدد للأجسام المضادة للمستضد. يتم الكشف عن المعقد المتشكل باستخدام الإنزيم كعلامة لتسجيل الإشارة.

تصنيف:

تنافسي (المركب الذي تم تحليله ونظيره موجودان في نفس الوقت في النظام)

غير تنافسي (في حالة وجود المركب الذي تم تحليله ومواقع الارتباط المقابلة له (مستضد وأجسام مضادة محددة) في النظام)

مباشر و غير مباشر

1. مصل يحتوي على خليط من am يتم تحضينه بمضاد ، مثبت على ركيزة صلبة.

2. تتم إزالة ag التي لا تلتزم بالغسيل المتكرر.

3. إضافة المصل المضاد المسمى بالإنزيم إلى الأجسام المضادة التي تربط المستضد

4-تحديد كمية إنزيم العلامة المرتبطة بـ

غير مباشر:

مصل إيجابي

1. ترتبط الأجسام المضادة المحددة في المصل قيد الدراسة بمستضد مثبت على ركيزة صلبة

2. لا تتفاعل الأجسام المضادة المحددة المصنفة بالإنزيم مع ag المرتبط - محتوى العلامة في الركيزة منخفض

مصل أب سلبي

1. لا ترتبط الأجسام المضادة غير النوعية في مصل الاختبار بمستضد مثبت على ركيزة صلبة

2. تتفاعل أجسام مضادة محددة تحمل علامات الإنزيم ، مع ag ثابت - محتوى الواسم مرتفع

الأكثر شيوعًا هو الحالة الصلبة ifa ، حيث يتم امتصاص أحد مكونات الاستجابة المناعية (مستضد أو جسم مضاد) على مادة حاملة صلبة. تُستخدم الألواح الدقيقة من البوليسترين كناقل صلب. عند تحديد الأجسام المضادة ، يتم إضافة مصل الدم المسمى بالإنزيم ومزيج من المحاليل للإنزيم والكروموجين بالتتابع إلى الآبار باستخدام المستضد الممتز. في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المربوطة من الآبار عن طريق الغسيل الشامل. مع نتيجة إيجابية ، يتغير لون محلول الكروموجين.

يمكن تحسس حامل المرحلة الصلبة ليس فقط بمولد ضد ، ولكن أيضًا بجسم مضاد. بعد ذلك ، يتم إدخال المستضد المطلوب في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، ويضاف مصل المناعة ضد المستضد المسمى بالإنزيم ، ثم يضاف خليط محاليل الركيزة للإنزيم والكروموجين.

طلب:لتشخيص الأمراض التي تسببها مسببات الأمراض الفيروسية والبكتيرية.

23. التفاعل المصلي- رد فعل يتم من خلاله دراسة تفاعل مستضد (ميكروب ، فيروس ، بروتين غريب) مع الأجسام المضادة في الدم.

الدراسات المصلية- هذه طرق لدراسة بعض الأجسام المضادة أو المستضدات في مصل الدم للمرضى ، بناءً على ردود الفعل المناعية. بمساعدتهم ، يتم أيضًا اكتشاف مستضدات الميكروبات أو الأنسجة من أجل التعرف عليها.

إن اكتشاف الأجسام المضادة في مصل دم المريض للعامل المسبب للعدوى أو المستضد المقابل يجعل من الممكن تحديد سبب المرض.

تستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد مستضدات فصائل الدم ومستضدات الأنسجة ومستوى المناعة الخلطية.

تشمل الدراسات المصلية تفاعلات مصلية مختلفة:

1. تفاعل التراص.

2. رد فعل هطول الأمطار.

3. رد فعل التحييد.

4. رد فعل يشمل مكمل.

5. التفاعل باستخدام الأجسام المضادة أو المستضدات المسمى.

يتم استخدامه للتشخيص السريع للأمراض المعدية (تحديد العامل الممرض في مادة الاختبار) ، وكذلك لتحديد الأجسام المضادة والمستقبلات السطحية وعلامات الكريات البيض (التنميط المناعي) والخلايا الأخرى.

يستخدم اكتشاف المستضدات البكتيرية والفيروسية في المواد المعدية والأنسجة الحيوانية ومزارع الخلايا باستخدام الأجسام المضادة الفلورية (الأمصال) على نطاق واسع في ممارسة التشخيص. يعتمد تحضير الأمصال الفلورية على قدرة بعض الفلوروكرومات (على سبيل المثال ، فلورسين أيزوثيوسيانات) على الدخول في رابطة كيميائية مع بروتينات المصل دون انتهاك خصوصياتها المناعية.

تتكون طريقة RIF غير المباشرة في تحديد معقد الأجسام المضادة للمستضد باستخدام مصل مضاد الغلوبولين (الجسم المضاد) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك ، يتم علاج مسحات من الميكروبات المعلقة بأجسام مضادة من مصل تشخيص الأرانب المضاد للميكروبات. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية ، ويتم الكشف عن الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمضاد الغلوبولين (مضاد للأرانب) المسمى بالفلوروكرومات. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للأرانب تحمل علامة الفلوروكروم. لوحظ هذا المركب في مجهر الفلورسنت ، كما في الطريقة المباشرة.

4. تم العثور على 75 طن / م 3 من المكورات العقدية ، و 12 طن / م 3 من المكورات العنقودية و 1 طن / م 3 من بكتيريا السل في هواء غرفة نوم الأطفال في الحضانة. قم بإجراء تقييم صحي - جرثومي للهواء وحدد خطة لصحته.

تذكرة الفحص رقم _54

الفيروسات القهقرية. الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية (الإيدز) ومسبباته المرضية.

يتسبب فيروس نقص المناعة البشرية في الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ، مما يؤدي إلى تطور متلازمة نقص المناعة المكتسب.

العامل المسبب لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية هو فيروس ليمفوتروبيك ينتمي إلى عائلة Retroviridae من جنس Lentivirus.

الخصائص المورفولوجية: الفيروس المحتوي على الحمض النووي الريبي. جسيم فيروسي كروي الشكل يتكون الغلاف من طبقة مزدوجة من الدهون تخترقها البروتينات السكرية. ينشأ الغلاف الدهني من غشاء البلازما للخلية المضيفة التي يتكاثر فيها الفيروس. يتكون جزيء البروتين السكري من وحدتين فرعيتين تقعان على سطح الفيريون وتخترق غلافها الدهني.

جوهر الفيروس مخروطي الشكل ويتكون من بروتينات قفيصة وعدد من بروتينات المصفوفة وبروتينات البروتياز. يشكل الجينوم شريطين من الحمض النووي الريبي ، لتنفيذ عملية التكاثر ، يمتلك فيروس نقص المناعة البشرية النسخ العكسية ، أو الانزيم العكسي.

يتكون جينوم الفيروس من 3 جينات هيكلية رئيسية و 7 جينات تنظيمية ووظيفية. تؤدي الجينات الوظيفية وظائف تنظيمية وتضمن تنفيذ عمليات التكاثر ومشاركة الفيروس في العملية المعدية.

يؤثر الفيروس بشكل رئيسي على الخلايا الليمفاوية T و B ، وبعض خلايا سلسلة monocytic (الضامة ، الكريات البيض) ، وخلايا الجهاز العصبي.

الخصائص الثقافية: على زراعة الخلايا من الخلايا اللمفاوية التائية والخلايا الوحيدات البشرية (في وجود الإنترلوكين -2).

التركيب المستضدي: نوعان من الفيروسات - HIV-1 و HIV-2 HIV-1 ، يحتوي على أكثر من 10 أنماط وراثية (أنواع فرعية): A ، B ، C ، D ، E ، F ... ، تختلف في تكوين الأحماض الأمينية. البروتينات.

ينقسم HIV-1 إلى 3 مجموعات: M ، N ، O. تنتمي معظم العزلات إلى المجموعة M ، حيث يتم تمييز 10 أنواع فرعية: A ، B ، C ، D ، F-l ، F-2 ، G ، H ، I ، K. المقاومة: حساسة للعوامل الفيزيائية والكيميائية ، وتهلك عند تسخينها. يمكن أن يستمر الفيروس لفترة طويلة في حالة جافة ، في دم جاف.

عوامل الإمراضية ، التسبب في المرض: يرتبط الفيروس بالخلايا الليمفاوية ، ويخترق الخلية ويتكاثر في الخلايا الليمفاوية. نتيجة لتكاثر فيروس نقص المناعة البشرية في الخلايا الليمفاوية ، يتم تدمير هذه الأخيرة أو تفقد خصائصها الوظيفية. نتيجة لتكاثر الفيروس في الخلايا المختلفة ، فإنه يتراكم في الأعضاء والأنسجة ، ويوجد في الدم واللمف واللعاب والبول والعرق والبراز.

في عدوى فيروس العوز المناعي البشري ، ينخفض عدد الخلايا الليمفاوية T-4 ، وتضعف وظيفة الخلايا الليمفاوية B ، ويتم قمع الوظيفة القاتلة الطبيعية ، وتقل الاستجابة لمولدات المضادات ، وينخفض إنتاج المكمّلات اللمفاوية والعوامل الأخرى التي تنظم وظائف المناعة (IL) تعطلت ، مما أدى إلى خلل في الجهاز المناعي.

العيادة: المتضررة الجهاز التنفسي(الالتهاب الرئوي والتهاب الشعب الهوائية) ؛ الجهاز العصبي المركزي (الخراجات والتهاب السحايا) ؛ يحدث الجهاز الهضمي (الإسهال) الأورام الخبيثة(أورام الأعضاء الداخلية).

تحدث الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية على عدة مراحل: 1) فترة الحضانةبمتوسط 2-4 أسابيع ؛ 2) مرحلة المظاهر الأولية ، التي تتميز في البداية بالحمى الحادة والإسهال. تنتهي المرحلة بمرحلة عديمة الأعراض واستمرار الفيروس ، واستعادة الرفاهية ، ومع ذلك ، يتم اكتشاف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في الدم ، 3) مرحلة الأمراض الثانوية ، والتي تتجلى في تلف الجهاز التنفسي والجهاز العصبي. تنتهي الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية بالمرحلة الأخيرة الرابعة - الإيدز.

التشخيص الميكروبيولوجي.

تشمل الدراسات الفيروسية والمصلية طرقًا لتحديد مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية والأجسام المضادة. لهذا ، يتم استخدام ELISA و IB و PCR. تحتوي مصل مرضى HIV-1 و HIV-2 على أجسام مضادة لجميع البروتينات الفيروسية. ومع ذلك ، لتأكيد التشخيص ، يتم تحديد الأجسام المضادة لبروتينات gp41 و gpl20 و gpl60 و p24 في HIV-1 والأجسام المضادة لبروتينات gp36 و gpl05 و gpl40 في HIV-2. تظهر الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية بعد 2-4 أسابيع من الإصابة ويمكن اكتشافها في جميع مراحل فيروس نقص المناعة البشرية.

طريقة الكشف عن الفيروس في الدم والخلايا الليمفاوية. ومع ذلك ، مع أي عينة إيجابية ، يتم وضع تفاعل IB لتأكيد النتائج. يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل أيضًا ، والذي يمكنه اكتشاف عدوى فيروس نقص المناعة البشرية في فترة الحضانة والفترة السريرية المبكرة ، لكن حساسيته أقل قليلاً من حساسية ELISA.

يتم تأكيد التشخيصات السريرية والمصلية من خلال الدراسات المناعية إذا كانت تشير إلى وجود نقص المناعة في المريض الذي تم فحصه.

نظام اختبار ELISA التشخيصي للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية - يشمل مستضد فيروسي كثف على ناقل ، وأجسام مضادة ضد Ig البشري. تستخدم للتشخيص المصلي للإيدز.

العلاج: استخدام مثبطات إنزيم المنتسخة العكسية التي تعمل على الخلايا المنشطة. الأدوية هي مشتقات ثيميدين - أزيدوثيميدين وفوسفازيد.

الوقاية. محدد - لا.

تأثير العوامل الفيزيائية والكيميائية على الميكروبات. الطفرة وأهميتها للطب العملي. أمثلة. قيمة البيئة.

تأثير العوامل الكيميائية والبيولوجية.

عمل المواد الكيميائية

يمكن للمواد الكيميائية أن تمنع أو تمنع نمو الكائنات الحية الدقيقة تمامًا. اذا كان مادة كيميائيةيمنع نمو البكتيريا ، ولكن بعد الإزالة ، يستأنف نموها مرة أخرى.

المواد المضادة للميكروبات مع مراعاة التركيب الكيميائي وآلية عملهم عمل مبيد للجراثيميمكن تقسيم البكتيريا إلى المجموعات التالية: العوامل المؤكسدة ، والهالوجينات ، والمركبات المعدنية ، والأحماض والقلويات ، والمواد الخافضة للتوتر السطحي ، والكحوليات ، والأصباغ ، ومشتقات الفينول والفورمالديهايد.

المؤكسدات. تشمل هذه المجموعة بيروكسيد الهيدروجين وبرمنجنات البوتاسيوم.

الهالوجينات. الكلور واليود ومستحضراتهما: مبيض ، كلورامين ب ، بانتوسيد ، محلول كحول يود 5٪ ، يودنول ، يودوفورم.

مركبات المعادن الثقيلة (أملاح الرصاص والنحاس والزنك والفضة والزئبق ؛ مركبات الفضة العضوية المعدنية: بروتارجول ، طوقجول). هذه المركبات قادرة على ممارسة كل من مضادات الميكروبات والمتنوعة العمل المحليعلى أنسجة الكائن الحي.

الأحماض والقلويات. يعتمد عمل مبيد الجراثيم للأحماض والقلويات على تجفيف الكائنات الحية الدقيقة ، والتغيرات في درجة الحموضة في وسط المغذيات ، والتحلل المائي للأنظمة الغروية ، وتكوين الألبومات الحمضية أو القلوية.

تتمتع الأصباغ بخصائص تمنع نمو البكتيريا. يتصرفون ببطء ولكن بشكل أكثر انتقائية.

الفورمالديهايد غاز عديم اللون. في الممارسة العملية ، يتم استخدام 40٪ المحلول المائيالفورمالديهايد (الفورمالين). غاز الفورمالديهايد والمذاب في الماء له تأثير ضار على الأشكال النباتية والجراثيم للبكتيريا.

عمل العوامل البيولوجية

يتجلى عمل العوامل البيولوجية بشكل أساسي في عداء الميكروبات ، عندما تتسبب نفايات بعض الميكروبات في وفاة البعض الآخر.

المضادات الحيوية (من اليونانية المضادة - ضد ، الحياة - الحياة) - مواد نشطة بيولوجيًا تكونت خلال حياة الفطريات والبكتيريا والحيوانات والنباتات والتي تم إنشاؤها صناعيًا ، وهي قادرة على قمع وقتل الكائنات الحية الدقيقة والفطريات والريكتسيا والفيروسات الكبيرة والأوليات والحيوانات. الديدان المعوية الفردية.

3. رد فعل النشاط البيولوجي للأنزيمات البكتيرية في الروماتيزم ، الأهمية التشخيصية والعملية ، الدور الوقائي للأجسام المضادة ضد الإنزيمات في المناعة المكتسبة (تحديد مضادات الهيالورونيداز ومضاد O- الستربتوليسين).

الروماتيزم - مرض شائعالطبيعة المعدية التحسسية ، التي يتأثر فيها النسيج الضام بشكل أساسي من نظام القلب والأوعية الدموية، وكذلك المفاصل ، اعضاء داخلية، وسط الجهاز العصبي. يعتقد أن سبب تطور الروماتيزم هو التنشيط الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض، بشكل رئيسي مجموعة المكورات العقدية الحالة للدم بيتا أ. وهو الذي يلعب الدور الرئيسي في المسببات والتسبب مرض الروماتيزم. أولاً ، يتطور المرض على الخلفية عدوى المكورات العقدية. ثانياً ، يوجد عدد كبير من الأجسام المضادة للكائنات الدقيقة من هذه المجموعة في دم المرضى. ثالثًا ، يتم الوقاية من المرض بنجاح باستخدام الأدوية المضادة للبكتيريا.

في التهاب المفصل الروماتويديتفرز الأغشية الزليلية ، لأسباب غير معروفة ، كميات كبيرة من إنزيم نازعة هيدروجين الجلوكوز 6 فوسفات ، والذي يقوم أيضًا بتفكيك روابط ثاني كبريتيد في غشاء الخلية. في هذه الحالة ، يوجد "تسرب" للإنزيمات المحللة للبروتين من الجسيمات الخلوية ، مما يتسبب في تلف العظام والغضاريف القريبة. يستجيب الجسم عن طريق إنتاج السيتوكينات ، والتي تشمل أيضًا عامل نخر الورم α TNF-α. تتسبب سلسلة التفاعلات التي تحدث في الخلايا عن طريق السيتوكينات في تفاقم أعراض المرض. غالبًا ما يتسبب الالتهاب الروماتويدي المزمن المرتبط بـ TNF-α في تلف الغضاريف والمفاصل مما يؤدي إلى إعاقة جسدية.