Riuttatutkimusmenetelmä. Immunofluoresenssireaktio. Mekanismi, komponentit, sovellus. Kuinka tulkita serologisten tutkimusten tuloksia

Tämä menetelmä käyttää luminesenssin ilmiötä.

Luminesenssiilmiön ydin piilee siinä, että absorption yhteydessä monenlaisia energia (valo, sähkö jne.) tiettyjen aineiden molekyylien avulla, niiden atomit siirtyvät virittyneeseen tilaan, ja palattuaan sitten alkuperäiseen tilaan ne vapauttavat absorboituneen energian valosäteilyn muodossa.

RIF:ssä luminesenssi ilmenee fluoresenssin muodossa - tämä on hehku, joka tapahtuu säteilytyksen hetkellä jännittävällä valolla ja pysähtyy välittömästi sen päättymisen jälkeen.

Monilla aineilla ja elävillä mikro-organismeilla on oma fluoresenssinsa (ns. primaarinen), mutta sen intensiteetti on hyvin alhainen. Aineita, joilla on voimakas primaarinen fluoresenssi ja joita käytetään antamaan fluoresoivia ominaisuuksia ei-fluoresoiville aineille, kutsutaan fluorokromeiksi. Tällaista indusoitua fluoresenssia kutsutaan toissijaiseksi.

Fluoresenssin virittämiseen fluoresoivassa mikroskopiassa käytetään useimmiten spektrin ultravioletti- tai siniviolettiosaa (aallonpituus 300-460 nm). Näitä tarkoituksia varten laboratorioissa on eri mallien luminoivat mikroskoopit - ML-1-ML-4, "Lumam".

Virologisessa käytännössä käytetään kahta fluoresenssimikroskopian päämenetelmää: fluorokromisaatiota ja fluoresoivia vasta-aineita (tai RIF).

Fluorokromisaatio- tämä on valmisteiden käsittely fluorokromilla niiden luminesenssin voimakkuuden ja kontrastin lisäämiseksi. Suurin kiinnostava on fluorokromiakridiinioranssi, joka aiheuttaa nukleiinihappojen polykromaattista fluoresenssia. Joten kun valmisteita käsitellään tällä fluorokromilla, deoksiribonukleiinihappo fluoresoi kirkkaasti vihreänä ja ribonukleiinihappo - rubiininpunaisena.

RIF-menetelmä koostuu siitä, että fluorokromiin liitetyillä vasta-aineilla säilyy kyky solmia spesifinen suhde homologisen antigeenin kanssa. Tuloksena oleva antigeeni + vasta-ainekompleksi, joka johtuu siinä olevan fluorokromin läsnäolosta, havaitaan fluoresoivalla mikroskoopilla ominaisella hehkulla.

Vasta-aineiden saamiseksi käytetään erittäin aktiivisia hyperimmuuniseerumeja, joista eristetään vasta-aineita ja leimataan fluorokromilla. Yleisimmin käytetyt fluorokromit ovat FITC-fluoreseiini-isotiosyanaatti (vihreä valo) ja PCX-rodamiinisulfokloridi (punainen valo). Fluorokromilla leimattua vasta-ainetta kutsutaan konjugaatiksi.

Valmisteiden valmistus- ja värjäysmenetelmä on seuraava:

valmistaa sivelynäytteitä, tulosteita elimistä tai kansilevyille - infektoitunut soluviljelmä lasilevyille; Histosektioita voidaan myös käyttää;
valmisteet kuivataan ilmassa ja kiinnitetään jäähdytetyssä asetonissa huoneenlämpötilassa tai -15 °C:ssa (15 minuutista 4-16 tuntiin);
värjätty suoralla tai epäsuoralla menetelmällä; pitää kirjaa fluoresoivassa mikroskoopissa hehkun voimakkuuden mukaan, arvioituna ristiin.

Valmistele ja värjää samanaikaisesti valmisteet terveestä eläimestä - kontrolli.

Fluoresoivien vasta-aineiden levittämiseen on kaksi päämenetelmää: suora ja epäsuora.

Suora menetelmä (yksivaiheinen). Kiinteälle valmisteelle levitetään konjugaattia (epäillyn viruksen fluoresoiva seerumi), jota inkuboidaan 30 minuuttia 37 °C:n lämpötilassa kosteassa kammiossa. Sitten lääkeaine pestään sitoutumattomasta konjugaatista suolaliuoksella (pH 7,2 - 7,5), kuivataan ilmassa, levitetään ei-fluoresoivaa öljyä ja tutkitaan mikroskoopilla.

Suora menetelmä mahdollistaa antigeenin havaitsemisen ja tunnistamisen. Tätä varten sinulla on oltava fluoresoiva seerumi jokaiselle virukselle.

Epäsuora menetelmä (kaksivaiheinen). Kiinteälle valmisteelle levitetään leimaamaton seerumi, joka sisältää epäillyn viruksen vasta-aineita, inkuboidaan 30 minuuttia 37 °C:ssa, sitoutumattomat vasta-aineet pestään pois. Valmisteeseen levitetään fluoresoivaa anti-lajien seerumia, joka vastaa homologisia antiviraalisia vasta-aineita tuottavan eläimen tyyppiä, ja inkuboidaan 30 minuuttia 37 °C:ssa. Sitten lääke pestään sitoutumattomista leimatuista vasta-aineista, kuivataan ilmassa, levitetään ei-fluoresoivaa öljyä ja tutkitaan fluoresoivalla mikroskoopilla.

Lajien vastaiset seerumit saadaan immunisoimalla eläimiä niiden lajien globuliineilla, jotka toimivat virusten vastaisten vasta-aineiden tuottajina. Joten jos antiviraalisia vasta-aineita saatiin kaneihin, käytetään fluoresoivaa kanin vastaista seerumia.

Epäsuora menetelmä mahdollistaa antigeenin havaitsemisen ja tunnistamisen lisäksi myös vasta-ainetiitterin havaitsemisen ja määrittämisen. Lisäksi tällä menetelmällä voidaan havaita eri virusten antigeenejä yhdellä leimatulla seerumilla, koska se perustuu anti-lajien seerumien käyttöön. Kani-, nauta-, hevos- ja marsuglobuliinien vastaiset seerumit ovat yleisempiä.

Epäsuoraan menetelmään on kehitetty useita muunnelmia. Komplementtimenetelmä ansaitsee suurimman huomion. Menetelmässä levitetään inaktivoitua ei-fluoresoivaa spesifistä seerumia ja marsun komplementtia kiinteään valmisteeseen, pidetään sitä 30 minuuttia 37 °C:ssa, pestään ja havaitaan antigeeni + vasta-aine + komplementtikompleksi levittämällä fluoresoivaa antikomplementaarista seerumia. , pitäen sitä 30 minuuttia 37 °C:ssa, pestään, kuivataan ilmassa ja tutkitaan fluoresoivalla mikroskoopilla.

RIF-edut: korkea spesifisyys ja herkkyys; asetustekniikan helppous; vaatii vähimmäismäärän komponentteja. Tämä on nopea diagnostinen menetelmä, koska saat vastauksen muutamassa tunnissa. Haittoja ovat subjektiivisuus luminesenssin intensiteetin arvioinnissa ja valitettavasti joskus fluoresoivat seerumit ovat huonolaatuisia. Tällä hetkellä RIF:ää käytetään laajalti virusperäisten eläintautien diagnosoinnissa.

Jos löydät virheen, korosta tekstinpätkä ja napsauta Ctrl+Enter.

Immunofluoresenssitesti (IF) on serologinen testi, joka havaitsee vasta-aineita tunnetuille antigeeneille. Menetelmä koostuu värjäytyneiden sivelynäytteiden mikroskopiasta.

Tätä reaktiota käytetään immunologiassa, virologiassa ja mikrobiologiassa. Sen avulla voit määrittää virusten, bakteerien, sienten, alkueläinten ja ICC:n läsnäolon. RIF:ää käytetään erittäin laajasti diagnostisessa käytännössä virus- ja bakteeriantigeenien havaitsemiseen tartuntamateriaalista. Menetelmä perustuu fluorokromin kykyyn sitoutua proteiineihin rikkomatta niiden immunologista spesifisyyttä. Sitä käytetään pääasiassa virtsatieinfektioiden diagnosointiin.

On olemassa seuraavat menetelmät immunofluoresenssireaktion suorittamiseksi: suora, epäsuora, komplementin kanssa. Suora menetelmä koostuu materiaalin värjäyksestä fluorokromeilla. Mikrobien tai kudosten antigeenien kyvystä hehkua fluoresoivan mikroskoopin UV-säteissä, ne määritellään soluiksi, joissa on kirkkaanvärinen vihreä reuna.

Epäsuora menetelmä koostuu antigeeni+vasta-ainekompleksin määrittämisestä. Tätä varten koemateriaali käsitellään diagnostiikkaan tarkoitetun antimikrobisen kanin seerumin vasta-aineilla. Kun vasta-aineet ovat sitoutuneet mikrobeihin, ne erotetaan sitoutumattomista ja käsitellään fluorokromilla leimatulla anti-kanin seerumilla. Tämän jälkeen kompleksimikrobi+animimikrobivasta-aineet+kanin vasta-aineet määritetään ultraviolettimikroskoopilla samalla tavalla kuin suorassa menetelmässä.

Immunofluoresenssireaktio on välttämätön kupan diagnosoinnissa. Fluorokromin vaikutuksesta kupan aiheuttaja määritetään soluksi, jossa on kelta-vihreä reuna. Hehkun puuttuminen tarkoittaa, että potilaalla ei ole kuppatartuntaa. Tämä analyysi määrätään usein positiivisella Wasserman-reaktiolla. Tämä menetelmä on erittäin tehokas diagnoosissa, koska sen avulla voit tunnistaa patogeenin alkuvaiheessa sairaudet.

Sen lisäksi, että RIF mahdollistaa kupan diagnosoinnin, sitä käytetään myös patogeenien, kuten klamydian, mykoplasman, Trichomonasin, sekä gonorrhean ja genitaaliherpeksen patogeenien määrittämiseen.

Analyyseihin käytetään sivelyä tai laskimoverta. Kokeilunäytteenotto on täysin kivuton eikä aiheuta vaaraa. Valmistaudu tähän analyysiin. Kaksitoista tuntia ennen sitä ei ole suositeltavaa käyttää hygieniatuotteita, kuten vähän tai geelejä. Joskus lääkärin todistuksen mukaan suoritetaan myös provokaatio. Tätä varten he suosittelevat mausteisen ruoan tai alkoholin ottamista tai provosoivan aineen, kuten gonovaccinin tai pyrogenalin, injektiota. Lisäksi väli antibakteeriset lääkkeet ja analyysin toimituksen on oltava vähintään neljätoista päivää.

Tuloksia arvioitaessa tulee ottaa huomioon, että luminesenssia havaitaan paitsi elävissä bakteereissa myös kuolleissa, erityisesti klamydiassa. Antibioottikuurin jälkeen myös kuolleet klamydiasolut hehkuvat.

Kun potilas valmistellaan asianmukaisesti ja näytteenottotekniikkaa noudatetaan, tämän analyysin avulla voit tunnistaa sairaudet varhaisessa vaiheessa, mikä on erittäin tärkeää oikea-aikainen hoito. Tämän menetelmän positiivisia puolia ovat lyhyt aika tuloksen saamiseen, helppokäyttöisyys ja alhaiset analyysikustannukset.

Haittoja ovat se, että analyysiin tarvitaan riittävän suuri määrä tutkittavaa materiaalia. Lisäksi vain kokenut asiantuntija voi arvioida tuloksia.

Koonsin vuonna 1942 löytämä immunofluoresenssireaktio ei ole uusi tutkimusmenetelmä. Kuitenkin hybridoomatekniikoiden tulo, joka mahdollisti monoklonaalisten vasta-aineiden saamisen, antoi tälle reaktiolle "toisen elämän", koska niiden käyttö mahdollisti tämän reaktion herkkyyden ja sen spesifisyyden lisäämisen useita kertoja.

Ja tänään kerromme sinulle yksityiskohtaisesti suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin (RIF) reaktiosta Koonsin diagnostisena menetelmänä aikuisille miehille ja naisille raskauden aikana.

Mikä on immunofluoresenssireaktio

Immunofluoresenssireaktio edustaa erinomaista mahdollisuutta saada nopeasti tarkka diagnoosi, ja sen avulla voit määrittää taudinaiheuttajan läsnäolon patologisessa materiaalissa. Tätä varten käytetään sivelyä materiaalista, joka on erityisesti käsitelty leimatulla FITC:llä (fluoreseiini-isotiosyanaatti) ja tutkittu heterogeenisena analyysinä.

Tuloksen saamiseksi käytetään fluoresoivaa mikroskooppia, jonka optisessa järjestelmässä on sarja valosuodattimia, jotka tarjoavat valmisteen siniviolettia tai ultraviolettivaloa, jolla on tietty aallonpituus. Tämä tila sallii fluorokromin loistaa tietyllä alueella. Tutkija arvioi hehkun ominaisuuksia, sen luonnetta, esineiden kokoa ja niiden suhteellista sijaintia.

Kenelle se on määrätty

Immunofluoresenssireaktion suorittaminen voidaan määrätä monien virussairauksien diagnosoinnissa. Erityisesti on määrätty kattava tutkimus seuraavien tekijöiden tunnistamiseksi:

viruksen esiintyminen kehossa;
salmonella-infektio;
tiettyjen antigeenien esiintyminen kehossa;
paljastetaan todennäköisyys saada kehon infektio klamydialla, mykoplasmoilla ja muilla mikro-organismeilla, joilla on kyky käynnistää ihmisen virussairauksia;
virustautien diagnosointi eläimillä.

Luetteloidut indikaatiot mahdollistavat immunofluoresenssireaktion käytön, kun se havaitaan ihmisillä ja eläimillä. virustaudit erilainen luonne.

Tavoitteet

Koska tällä diagnostisella menetelmällä on monia etuja, joihin kuuluu sen korkea tehokkuus, suorittamisen ja tulosten saamisen nopeus sekä lukuisten vasta-aiheiden puuttuminen, sitä käytetään määrittämään läsnäolo kehossa. virusinfektiot. Siksi tämä analyysi voidaan määrätä sekä diagnoosin tekemiseen että selventämiseen, jonka perusteella määrätään hoito-ohjelma.

Menettely ei aiheuta epämukavuutta, sitä varten on tarpeen hankkia analyysimateriaalia, joka otetaan mistä tahansa kehon nesteestä: syljestä, ysköstä, limakalvojen pinnan raapumisesta. Myös verta voidaan ottaa analyysiä varten. Immunofluoresenssireaktion taajuuden määrää hoitava lääkäri, jonka on hankittava tiedot kehossa tapahtuvien prosessien dynamiikasta.

Koska tämä analyysi ei vahingoita sekä kehoa että ihmisen yleistä hyvinvointia, se voidaan määrätä tarvittaessa.

Tällaisen menettelyn tyypit

Nykyään käytetään useita tämän analyysin lajikkeita, joista jokaisella on useita erityispiirteitä ja joiden avulla voit saada yksityiskohtaisimman kuvan kehossa tapahtuvista prosesseista.

Immunofluoresenssireaktioiden tyyppejä ovat:

- Yksi nopeimmin kehittyvistä diagnostiikan tyypeistä, tämä analyysi mahdollistaa kvantitatiivisten tietojen saamisen ilman sarjalaimennosten käyttöä. Saatuja nesteen optisen tiheyden mittauksia käyttämällä voidaan määrittää tarkasti halutun komponentin pitoisuustaso. Tämän tyyppisen analyysin laajoja mahdollisuuksia käytetään, kun sen toteuttamiseen käytetään monoklonaalisia vasta-aineita, mikä mahdollistaa infektioprosessin vaiheen, sen vakavuuden määrittämisen;
DNA-diagnostiikka- Tämä menetelmä perustuu nukleotidien komplementaariseen sitoutumiseen, johon voidaan käyttää nesteitä, kuten sylkeä, verta, aivo-selkäydinnestettä, virtsaa, ysköstä, biopsianäytteitä ja verta. Tämä menetelmä havaitsee tehokkaimmin papilloomavirusten esiintymisen kehossa, mutta monet nykyaikaiset testijärjestelmät voivat toisinaan antaa vääriä positiivisia ja vääriä negatiivisia tuloksia. Syynä niihin voi olla nestenäytteiden kontaminaatio spesifisen DNA:n analysointia varten, jonka läsnäolo voi olla sisäkkäisiä tai kokonaisia;
immunokromatografia- Tämän menetelmän spesifisyys patologisen ympäristön ja virusten esiintymisen määrittämiseksi kehossa on leimattujen vasta-aineiden käyttö reaktion aikana. Tätä diagnostista menetelmää käytetään A-ryhmän streptokokkien sekä seuraavan tyyppisten klamydioiden infektioprosessin ja sen aktiivisuuden tunnistamiseen: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia from Oxoid. Testausjärjestelmät, joilla on korkein herkkyys, perustuvat tähän tutkimusmetodologiaan. käytetään yleensä orientaatiotestinä.

Luetteloiduilla lajikkeilla on käyttäytymispiirteitä ja tulosten erityispiirteet, mutta niiden kaikkien tarkoituksena on saada tietoja patologisten mikro-organismien ja virusten esiintymisestä kehossa sekä niiden lisääntymis- ja aktiivisuusasteesta.

Suoritusaiheet

Immunofluoresenssireaktio voidaan määrätä minkä tahansa patologisen ympäristön havaitsemiseksi kehossa.

Klamydia, trikomonadit, gonokokit ja kaikenlaiset lamblialajit määritetään tämän tyyppisen diagnoosin aikana. ja muut sairaudet vaativat myös RIF:n. Lääkärin nimittäminen sen toteuttamiseksi on pakollista.

Vasta-aiheet pitämiseen

Koska tämä reaktio vaatii testimateriaalina mitä tahansa kehon nestettä, niiden ottaminen ei yleensä ole vaikeaa, eikä immunofluoresenssireaktion suorittamiselle ole vasta-aiheita. Kuitenkin raskauden aikana ja alle 6 kuukauden ikäisillä lapsilla näytteenotto tutkimusta varten tehdään äärimmäistä varovaisuutta noudattaen.

Vasta-aiheiden puuttuminen mahdollistaa tämäntyyppisen diagnoosin suorittamisen, kun lääkäri määrää kaikille potilaille. Sen turvallisuus taataan käyttämällä desinfioitua instrumenttia ja kertakäyttöisiä ruiskuja.

Valmistautuminen menettelyyn

Tässä analyysissä ei ole materiaalin ottamisen ominaisuuksia. Hänelle veri otetaan tyhjään vatsaan, jotta siinä ei ole korkeaa ainetta, joka voi muuttaa todellisen todistuksen ja antaa väärän kuvan.

Miten näytteenotto sujuu

Koska analyysiin ei vaadita erityistä valmistautumista, vain syöminen 12 tuntia ennen sitä suljetaan pois ja käytön puute lääkkeet, testimateriaali otetaan normaalina prosessina kehon nesteen ottamiseksi analysoitavaksi.

Subjektiiviset tuntemukset toimenpiteen aikana voivat vaihdella herkkyyden mukaan.

Tulosten purkaminen

Nykyaikaisten testijärjestelmien avulla voit saada tarkimmat analyysitulokset. Seuraavia tietoja käytetään tuloksen tulkitsemiseen:

fluoresenssin intensiteetin aste;
fluoresenssi sävy;
kohteen hehkuvan prosessin perifeerinen luonne;
morfologian ominaisuudet, patogeenin sijainti testimateriaalista otetussa näytteessä ja sen mitat.

Kun tutkitaan suuria esineitä (esimerkiksi gardenerella, Trichomonas, solut, joihin virukset ovat jo vaikuttaneet), yllä luetellut kriteerit mahdollistavat luotettavimpien tulosten saamisen. Mykoplasman ja klamydian peruskappaleiden koko on kuitenkin fluoresoivan mikroskoopin resoluution rajalla, mikä vaikeuttaa

vaikeuttaa tarkan tuloksen saamista, koska reunahehku menettää osan voimakkuudestaan. Loput kriteerit eivät enää riitä tutkittujen mikro-organismien tarkkaan tunnistamiseen. Tästä syystä tämäntyyppistä tutkimusta tekeville asiantuntijoille asetetaan erityisiä vaatimuksia: heidän pätevyytensä on oltava riittävä toimimaan käytettävissä olevien tietojen kanssa.

Tästä syystä vain asianmukaisen pätevyyden omaava lääkäri voi käsitellä saadun analyysin dekoodauksen. Lue RIF-tutkimuksen hinnasta alta.

keskihinta

Immunofluoresenssitestin hinta riippuu testin sijainnista ja tasosta. sairaanhoitolaitos ja sekä analyysin suorittavan henkilön pätevyys. Nykyään kustannukset vaihtelevat 1280 - 2160 ruplaa.

Alla oleva video kertoo lisää immunologisista reaktioista:

Immunofluoresenssimenetelmä (RIF, immunofluoresenssireaktio, Koons-reaktio) on menetelmä spesifisten antigeenien havaitsemiseksi käyttämällä fluorokromiin konjugoituja vasta-aineita. Sillä on korkea herkkyys ja spesifisyys.

Käytetään pikadiagnostiikkaan tarttuvat taudit(patogeenin tunnistaminen testimateriaalista), sekä leukosyyttien ja muiden solujen vasta-aineiden ja pintareseptorien ja markkerien määrittämiseen (immunofenotyypitys).

Bakteeri- ja virusantigeenien havaitseminen tartunta-aineista, eläinkudoksista ja soluviljelmistä fluoresoivia vasta-aineita (seerumia) käyttäen on saanut laaja sovellus diagnostisessa käytännössä. Fluoresoivien seerumien valmistus perustuu joidenkin fluorokromien (esimerkiksi fluoreseiini-isotiosyanaatin) kykyyn muodostaa kemiallinen sidos seerumiproteiinien kanssa rikkomatta niiden immunologista spesifisyyttä.

Menetelmiä on kolmenlaisia: suora, epäsuora, komplementti. Suora RIF-menetelmä perustuu siihen, että immuuniseerumilla käsitellyt kudosantigeenit tai mikrobit, jotka on käsitelty fluorokromeilla leimatuilla vasta-aineilla, pystyvät hehkumaan fluoresoivan mikroskoopin UV-säteissä. Tällaisella luminoivalla seerumilla käsitellyt bakteerit hohtavat solun reunaa pitkin vihreän reunan muodossa.

Epäsuora RIF-menetelmä koostuu antigeeni-vasta-ainekompleksin tunnistamisesta käyttämällä fluorokromilla leimattua antiglobuliini- (anti-vasta-aine) -seerumia. Tätä varten mikrobisuspensiosta otetut sivelynäytteet käsitellään antimikrobisen kanin vasta-aineilla diagnostinen seerumi. Sitten mikrobiantigeenien sitomattomat vasta-aineet pestään pois ja mikrobien pinnalle jääneet vasta-aineet havaitaan käsittelemällä näytteestä fluorokromeilla leimatulla antiglobuliiniseerumilla (anti-kani). Tuloksena muodostuu monimutkainen mikrobi + antimikrobiset kanin vasta-aineet + anti-kanin vasta-aineet, jotka on leimattu fluorokromilla. Tämä kompleksi havaitaan fluoresoivassa mikroskoopissa, kuten suorassa menetelmässä.

Mekanismi. Lasilevylle valmistetaan testimateriaalista sively, kiinnitetään liekkiin ja käsitellään kanin immuuniseerumilla, joka sisältää vasta-aineita patogeeniantigeeneja vastaan. Antigeeni-vasta-ainekompleksin muodostamiseksi valmiste sijoitetaan kosteaan kammioon ja inkuboidaan 37 °C:ssa 15 minuuttia, minkä jälkeen se pestään perusteellisesti isotonisella natriumkloridiliuoksella antigeeniin sitoutumattomien vasta-aineiden poistamiseksi. Sitten valmisteelle levitetään fluoresoivaa antiglobuliiniseerumia kanin globuliineja vastaan, inkuboidaan 15 minuuttia 37 °C:ssa ja sitten valmiste pestään perusteellisesti isotonisella natriumkloridiliuoksella. Fluoresoivan antiglobuliiniseerumin sitoutumisen seurauksena antigeeniin kiinnittyneisiin spesifisiin vasta-aineisiin muodostuu valoisia antigeeni-vasta-ainekomplekseja, jotka havaitaan fluoresoivalla mikroskopialla.

22. Entsyymi-immunomääritys- laboratorioimmunologinen menetelmä kvalitatiivisten tai kvantifiointi erilaisia yhdisteitä, makromolekyylejä, viruksia jne., joka perustuu spesifiseen antigeeni-vasta-ainereaktioon. Muodostuneen kompleksin havaitseminen suoritetaan käyttämällä entsyymiä signaalin rekisteröinnin leimana.

Luokitus:

Kilpaileva (analysoitu yhdiste ja sen analogi ovat samanaikaisesti läsnä järjestelmässä)

Ei-kilpaileva (jos järjestelmässä on vain analysoitu yhdiste ja sitä vastaavat sitoutumiskohdat (antigeeni ja spesifiset vasta-aineet))

Suora ja epäsuora

1. Seerumia, joka sisältää am-seoksen, inkuboidaan anti-aineella, joka on kiinnitetty kiinteälle substraatille.

2.jotka eivät sido ag poistetaan toistuvalla pesulla.

3. lisää entsyymileimattua antiseerumia vasta-aineisiin, jotka sitovat antigeeniä

4.määritä at:iin sitoutuneen markkerientsyymin määrä

Epäsuora:

Positiivinen seerumi

1.spesifiset vasta-aineet tutkittavassa seerumissa sitovat antigeenin kiinnitettynä kiinteälle substraatille

2. spesifiset entsyymillä leimatut vasta-aineet eivät ole vuorovaikutuksessa sitoutuneen ag:n kanssa - substraatin markkerin pitoisuus on alhainen

Ab-negatiivinen seerumi

1. Testiseerumin epäspesifiset vasta-aineet eivät sido kiinteälle substraatille kiinnitettyä antigeeniä

2. Entsyymillä leimatut spesifiset vasta-aineet vuorovaikuttavat kiinteän ag:n kanssa - markkerin pitoisuus on korkea

Yleisin on kiinteäfaasinen ifa, jossa yksi immuunivasteen komponenteista (antigeeni tai vasta-aine) sorboituu kiinteälle kantajalle. Kiinteänä kantajana käytetään polystyreenimikropaneeleja. Vasta-aineita määritettäessä entsyymileimattu veriseerumi ja entsyymin ja kromogeenin liuosseos lisätään peräkkäin kuoppiin adsorboituneen antigeenin kanssa. Joka kerta seuraavan komponentin lisäämisen jälkeen sitoutumattomat reagenssit poistetaan kuopista perusteellisella pesulla. Positiivisella tuloksella kromogeeniliuoksen väri muuttuu.

Kiinteän faasin kantaja voidaan herkistää paitsi antigeenillä myös vasta-aineella. Sitten haluttu antigeeni viedään kuoppiin adsorboitujen vasta-aineiden kanssa, lisätään immuuniseerumi entsyymillä leimattua antigeeniä vastaan ja sitten lisätään entsyymin ja kromogeenin substraattiliuosten seos.

Sovellus: virus- ja bakteeripatogeenien aiheuttamien sairauksien diagnosointiin.

23. Serologinen reaktio- reaktio, jolla tutkitaan antigeenin (mikrobi, virus, vieras proteiini) reaktiota veren seerumin vasta-aineiden kanssa.

Serologiset tutkimukset- Nämä ovat immuunireaktioihin perustuvia menetelmiä potilaiden veren seerumissa olevien tiettyjen vasta-aineiden tai antigeenien tutkimiseksi. Niiden avulla havaitaan myös mikrobien tai kudosten antigeenejä niiden tunnistamiseksi.

Infektion aiheuttajan vasta-aineiden tai vastaavan antigeenin havaitseminen potilaan vereseerumista mahdollistaa taudin syyn selvittämisen.

Serologisia tutkimuksia käytetään myös veriryhmien antigeenien, kudosantigeenien ja humoraalisen immuniteetin tason määrittämiseen.

Serologiset tutkimukset sisältävät erilaisia serologisia reaktioita:

1. Agglutinaatioreaktio.

2. Saostumisreaktio.

3. Neutralointireaktio.

4. Reaktio, johon liittyy komplementti.

5. Reaktio käyttämällä leimattuja vasta-aineita tai antigeenejä.

Sitä käytetään tartuntatautien ekspressiodiagnostiikassa (patogeenin tunnistaminen testimateriaalissa) sekä leukosyyttien ja muiden solujen vasta-aineiden ja pintareseptorien ja markkerien määritykseen (immunofenotyypitys).

Bakteeri- ja virusantigeenien havaitsemista tartunta-aineista, eläinkudoksista ja soluviljelmistä fluoresoivien vasta-aineiden (seerumien) avulla käytetään laajalti diagnostisessa käytännössä. Fluoresoivien seerumien valmistus perustuu joidenkin fluorokromien (esimerkiksi fluoreseiini-isotiosyanaatin) kykyyn muodostaa kemiallinen sidos seerumiproteiinien kanssa rikkomatta niiden immunologista spesifisyyttä.

Epäsuora RIF-menetelmä koostuu antigeeni-vasta-ainekompleksin tunnistamisesta käyttämällä fluorokromilla leimattua antiglobuliini- (anti-vasta-aine) -seerumia. Tätä varten mikrobisuspensiosta otetut sivelynäytteet käsitellään kanin antimikrobisen diagnostisen seerumin vasta-aineilla. Sitten mikrobiantigeenien sitomattomat vasta-aineet pestään pois ja mikrobien pinnalle jääneet vasta-aineet havaitaan käsittelemällä näytteestä fluorokromeilla leimatulla antiglobuliiniseerumilla (anti-kani). Tuloksena muodostuu monimutkainen mikrobi + antimikrobiset kanin vasta-aineet + anti-kanin vasta-aineet, jotka on leimattu fluorokromilla. Tämä kompleksi havaitaan fluoresoivassa mikroskoopissa, kuten suorassa menetelmässä.

4. Päiväkodin lastenhuoneen ilmasta löydettiin 75 mt/m3 streptokokkia, 12 mt/m3 stafylokokkia ja 1 mt/m3 tuberkuloosibakteereja. Anna saniteetti-bakteriologinen arvio ilmasta ja hahmottele sen sanitaatiosuunnitelma.

TUTKILIPPU nro _54

Retrovirukset. HIV-infektio (AIDS) ja sen patogeenit.

Ihmisen immuunikatovirus aiheuttaa HIV-infektion, mikä johtaa hankitun immuunikato-oireyhtymän kehittymiseen.

HIV-infektion aiheuttaja on Lentivirus-suvun Retroviridae-heimoon kuuluva lymfotrooppinen virus.

Morfologiset ominaisuudet: RNA:ta sisältävä virus. Pallomainen viruspartikkeli Kuori koostuu kaksoiskerroksesta lipidejä, jotka läpäisevät glykoproteiinit. Lipidivaippa on peräisin isäntäsolun plasmamembraanista, jossa virus lisääntyy. Glykoproteiinimolekyyli koostuu kahdesta alayksiköstä, jotka sijaitsevat virionin pinnalla ja tunkeutuvat sen lipidivaippaan.

Viruksen ydin on kartiomainen ja koostuu kapsidiproteiineista, useista matriisiproteiineista ja proteaasiproteiineista. Genomi muodostaa kaksi RNA-juostetta, lisääntymisprosessin toteuttamiseksi HIV:llä on käänteiskopioija tai reversetaasia.

Viruksen genomi koostuu 3 päärakennegeenistä ja 7 säätely- ja toiminnallisesta geenistä. Toiminnalliset geenit suorittavat säätelytoimintoja ja varmistavat lisääntymisprosessien toteuttamisen ja viruksen osallistumisen tartuntaprosessiin.

Virus vaikuttaa pääasiassa T- ja B-lymfosyyteihin, joihinkin monosyyttisarjan soluihin (makrofagit, leukosyytit), hermoston soluihin.

Kulttuuriominaisuudet: T-lymfosyyttien ja ihmisen monosyyttien soluviljelmässä (IL-2:n läsnä ollessa).

Antigeeninen rakenne: 2 virustyyppiä - HIV-1 ja HIV-2 HIV-1, on yli 10 genotyyppiä (alatyyppejä): A, B, C, D, E, F ..., eroavat aminohappokoostumuksesta proteiinit.

HIV-1 on jaettu 3 ryhmään: M, N, O. Useimmat isolaatit kuuluvat M-ryhmään, jossa erotetaan 10 alatyyppiä: A, B, C, D, F-l, F-2, G, H, I, K. Kestävyys : Herkkä fysikaalisille ja kemiallisille tekijöille, tuhoutuu kuumennettaessa. Virus voi säilyä pitkään kuivatussa tilassa, kuivatussa veressä.

Patogeenisuustekijät, patogeneesi: Virus kiinnittyy lymfosyyttiin, tunkeutuu soluun ja lisääntyy lymfosyytissä. HIV:n lisääntymisen seurauksena lymfosyyteissä viimeksi mainitut tuhoutuvat tai menettävät toiminnalliset ominaisuutensa. Viruksen lisääntymisen seurauksena eri soluissa se kerääntyy elimiin ja kudoksiin ja sitä löytyy verestä, imusolmukkeista, syljestä, virtsasta, hiestä ja ulosteista.

HIV-infektiossa T-4-lymfosyyttien määrä vähenee, B-lymfosyyttien toiminta heikkenee, luonnollinen tappajatoiminta heikkenee ja vaste antigeeneille vähenee ja komplementin, lymfokiinien ja muiden immuunitoimintoja säätelevien tekijöiden tuotanto vähenee. häiriintynyt, mikä johtaa immuunijärjestelmän toimintahäiriöön.

Klinikka: vaikuttaa hengityselimiä(keuhkokuume, keuhkoputkentulehdus); keskushermosto (absessit, aivokalvontulehdus); Ruoansulatuskanava (ripuli), esiintyy pahanlaatuiset kasvaimet(sisäelinten kasvaimet).

HIV-infektio tapahtuu useissa vaiheissa: 1) itämisaika keskimäärin 2-4 viikkoa; 2) primaaristen ilmenemismuotojen vaihe, jolle on alun perin ominaista akuutti kuume, ripuli; vaihe päättyy oireettomaan vaiheeseen ja viruksen pysymiseen, hyvinvoinnin palautumiseen, mutta verestä havaitaan HIV-vasta-aineita, 3) sekundaaristen sairauksien vaihe, joka ilmenee hengityselinten, hermoston vaurioina. HIV-infektio päättyy viimeiseen, 4. terminaalivaiheeseen - AIDS.

Mikrobiologinen diagnostiikka.

Virologiset ja serologiset tutkimukset sisältävät menetelmiä HIV-antigeenien ja -vasta-aineiden määrittämiseksi. Tätä varten käytetään ELISA:ta, IB:tä ja PCR:ää. HIV-1- ja HIV-2-potilaiden seerumit sisältävät vasta-aineita kaikille virusproteiineille. Diagnoosin vahvistamiseksi määritetään kuitenkin vasta-aineet gp41-, gpl20-, gpl60-, p24-proteiineille HIV-1:ssä ja vasta-aineet gp36-, gpl05-, gpl40-proteiineille HIV-2:ssa. HIV-vasta-aineet ilmaantuvat 2-4 viikkoa tartunnan jälkeen, ja ne ovat havaittavissa kaikissa HIV:n vaiheissa.

Menetelmä viruksen havaitsemiseksi verestä, lymfosyyteistä. Kuitenkin jokaisella positiivisella näytteellä suoritetaan IB-reaktio tulosten vahvistamiseksi. Käytössä on myös PCR, joka pystyy havaitsemaan HIV-tartunnan itämis- ja varhaisessa kliinisessä jaksossa, mutta sen herkkyys on hieman pienempi kuin ELISA:n.

Kliiniset ja serologiset diagnoosit vahvistetaan immunologisilla tutkimuksilla, jos ne osoittavat tutkittavalla potilaalla immuunikatoa.

Diagnostinen ELISA-testijärjestelmä HIV-vasta-aineiden havaitsemiseen - sisältää kantajalle adsorboituneen virusantigeenin, vasta-aineita ihmisen Ig:tä vastaan. Käytetään AIDS-serodiagnostiikkaan.

Hoito: aktivoituihin soluihin vaikuttavien käänteiskopioijaentsyymin estäjien käyttö. Lääkkeet ovat tymidiinijohdannaisia - atsidotymidiini ja fosfatsidi.

Ennaltaehkäisy. Tarkka - ei.

Fysikaalisten ja kemiallisten tekijöiden vaikutus mikrobeihin. Mutaatio ja sen merkitys käytännön lääketieteessä. Esimerkkejä. Ekologian arvo.

Kemiallisten ja biologisten tekijöiden toiminta.

Kemikaalien toiminta

Kemikaalit voivat estää tai kokonaan estää mikro-organismien kasvun. Jos Kemiallinen aine estää bakteerien kasvua, mutta poistamisen jälkeen niiden kasvu jatkuu uudelleen.

Antimikrobiset aineet, ottaen huomioon niiden kemiallinen rakenne ja mekanismi bakterisidinen vaikutus Bakteerit voidaan jakaa seuraaviin ryhmiin: hapettimet, halogeenit, metalliyhdisteet, hapot ja emäkset, pinta-aktiiviset aineet, alkoholit, väriaineet, fenoli- ja formaldehydijohdannaiset.

Hapettavat aineet. Tähän ryhmään kuuluvat vetyperoksidi ja kaliumpermanganaatti.

Halogeenit. Kloori, jodi ja niiden valmisteet: valkaisuaine, kloramiini B, pantosidi, alkoholi jodiliuos 5%, jodinoli, jodoformi.

Raskasmetalliyhdisteet (lyijyn, kuparin, sinkin, hopean, elohopean suolat; organometalliset hopeayhdisteet: protargol, kollargoli). Nämä yhdisteet pystyvät vaikuttamaan sekä antimikrobisesti että monipuolisesti paikallista toimintaa makro-organismikudoksessa.

Hapot ja emäkset. Happojen ja emästen bakterisidinen vaikutus perustuu mikro-organismien kuivumiseen, ravinneväliaineen pH:n muutoksiin, kolloidisten järjestelmien hydrolyysiin ja happamien tai emäksisten albuminaattien muodostumiseen.

Väriaineilla on ominaisuuksia, jotka estävät bakteerien kasvua. He toimivat hitaasti mutta valikoivammin.

Formaldehydi on väritön kaasu. Käytännössä käytetään 40 % vesiliuosta formaldehydi (formaliini). Kaasumainen ja veteen liuennut formaldehydi vaikuttaa haitallisesti bakteerien vegetatiivisiin ja itiömuotoihin.

Biologisten tekijöiden toiminta

Biologisten tekijöiden vaikutus ilmenee ensisijaisesti mikrobien antagonismina, kun joidenkin mikrobien jätetuotteet aiheuttavat toisten kuoleman.

Antibiootit (kreikan sanasta anti - vastaan, bios - life) - biologisesti aktiiviset aineet, jotka muodostuvat sienten, bakteerien, eläinten, kasvien elinaikana ja synteettisesti ja jotka kykenevät selektiivisesti tukahduttamaan ja tappamaan mikro-organismeja, sieniä, riketsiaa, suuria viruksia, alkueläimiä ja yksittäiset helmintit.

3. Bakteerientsyymien biologisen aktiivisuuden reaktio reumatismissa, diagnostinen ja käytännön merkitys, entsyymejä vastaan olevien vasta-aineiden suojaava rooli hankitussa immuniteetissa (anti-hyaluronidaasin ja anti-O-streptolysiinin määritys).

Reuma - yleinen sairaus infektio-allerginen luonne, jossa sidekudos vaikuttaa pääasiassa sydän- ja verisuonijärjestelmästä sekä nivelet, sisäelimet, keskus hermosto. Uskotaan, että reuman kehittymisen syynä on aktivoituminen patogeeniset mikro-organismit, pääasiassa beetahemolyyttinen streptokokkiryhmä A. Hänellä on päärooli etiologiassa ja patogeneesissä reumaattinen sairaus. Ensinnäkin tauti kehittyy taustaa vasten streptokokki-infektio. Toiseksi potilaiden verestä löytyy suuri määrä vasta-aineita tämän ryhmän mikro-organismeille. Kolmanneksi taudin ehkäisy suoritetaan menestyksekkäästi antibakteerisilla lääkkeillä.

klo nivelreuma nivelkalvot erittävät tuntemattomista syistä suuria määriä glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasientsyymiä, joka myös hajottaa solukalvon disulfidisidoksia. Tässä tapauksessa solujen lysosomeista "vuoto" tapahtuu proteolyyttisiä entsyymejä, jotka vahingoittavat läheisiä luita ja rustoa. Keho reagoi tuottamalla sytokiinejä, joihin kuuluu myös tuumorinekroositekijä α TNF-α. Sytokiinien laukaisemat reaktioiden sarjat soluissa pahentavat entisestään taudin oireita. TNF-α:han liittyvä krooninen reumatulehdus aiheuttaa hyvin usein rusto- ja nivelvaurioita, jotka johtavat fyysiseen vammaisuuteen.