चिकन भ्रूण में वायरस का अलगाव। चिकन भ्रूण के विकास में वायरस की खेती वायरल संक्रमण के निदान में चिकन भ्रूण

चिकन भ्रूण इन्फ्लूएंजा वायरस की खेती के लिए एक बहुत सस्ती और सुविधाजनक प्रणाली है। मानव और पशु दोनों मूल के वायरस के लगभग सभी प्रकार भ्रूण में किसी न किसी हद तक गुणा करते हैं। इस प्रणाली के लिए सर्वोत्तम रूप से अनुकूलित प्रयोगशाला उपभेद भ्रूण में काफी उच्च अनुमापांक, या प्रति भ्रूण 10-10 पीएफयू) उत्पन्न करते हैं। इसके अलावा, भ्रूण को बाहरी वातावरण से अलग किया जाता है, और इसलिए वायरस को इसमें गुणा करने की आवश्यकता नहीं होती है। बनाएंविशेष बाँझ स्थितियाँ।

वायरस को आमतौर पर अंडे की द्रव से भरी एलांटोइक गुहा में इंजेक्ट किया जाता है, जहां से यह कोरियोएलांटोइक झिल्ली में प्रवेश कर सकता है और इसे बनाने वाली कोशिकाओं को संक्रमित कर सकता है। वायरल संतान को एलांटोइक द्रव में छोड़ा जाता है और इस द्रव को चूसकर अंडे से आसानी से निकाला जा सकता है। कुछ उपभेद वीविशेष रूप से नए प्राकृतिक आइसोलेट्स, साथ ही वायरस जैसे साथकोरियो-कैलेंटोइक झिल्ली पर अच्छी तरह से गुणा न करें, लेकिन जब सीधे एमनियोटिक गुहा में इंजेक्ट किया जाता है तो गुणा करें; इस मामले में, वायरस भ्रूण के विभिन्न ऊतकों तक पहुंच प्राप्त कर लेता है, और परिणामी संतानों को एमनियोटिक द्रव में छोड़ दिया जाता है, जिसे अलग से निकाला जा सकता है।

यह वायरस 10 से 12 दिन के भ्रूण में सबसे अच्छा प्रजनन करता है। ताजा निषेचित अंडे खरीदे जाने चाहिए और प्रयोगशाला में आवश्यक समय के लिए इनक्यूबेट किए जाने चाहिए। ऐसा करने के लिए, आपके पास विशेष उपकरण होने की आवश्यकता नहीं है, लेकिन इनक्यूबेटर बहुत सुविधाजनक है। हालाँकि, यदि अंडों को नियमित रूप से घुमाया जाए तो उन्हें 37 डिग्री सेल्सियस के आर्द्र वातावरण में एक नियमित थर्मोस्टेट में सफलतापूर्वक सेया जा सकता है। अंडों का ग्रेड विशेष रूप से महत्वपूर्ण नहीं है, लेकिन कुछ मामलों में अन्य सूक्ष्मजीवों के साथ अंडे के संक्रमण की संभावना को बाहर करना महत्वपूर्ण है; कुछ आपूर्तिकर्ता विशेष अदूषित अंडे बेचते हैं।

संक्रमण से पहले, आपको यह सुनिश्चित करना चाहिए कि अंडे वास्तव में निषेचित हैं। ऐसा करने के लिए, बस एक अंधेरे कमरे में उज्ज्वल प्रकाश स्रोत के पास अंडे को देखें। निषेचन के 4-5 दिन बाद भ्रूण स्पष्ट रूप से दिखाई देना चाहिए।

प्रयोगशाला उपभेदों के मानक पारित होने में, वायरल इनोकुलम आमतौर पर संक्रमित एलांटोइक या कल्चर तरल पदार्थ का एक नमूना होता है। एक नियम के रूप में, उपयोग से पहले नमूनों को हैंक्स के खारे घोल से 10-10 पीएफयू/एमएल की वायरस सांद्रता तक पतला किया जाता है, क्योंकि अंडे में बड़ी मात्रा में वायरस डालने से डीआईवी के गठन को बढ़ावा मिलता है। यदि पतला वायरस को संक्रमण से पहले संग्रहित किया जाना है, तो जिलेटिन को पतला समाधान में जोड़ा जाना चाहिए। स्वाभाविक रूप से, संक्रमण के लिए उपयोग किए जाने वाले वायरस की बाँझपन सुनिश्चित करना आवश्यक है; ऐसे मामलों में जहां यह मुश्किल है, एंटीबायोटिक जेंटामाइसिन को इनोकुलम में जोड़ा जाता है।

इन विधियों में नमूनों को पीसने के लिए समरूपीकरण का उपयोग, उन्हें स्पष्ट करने के लिए कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन और एमनियोटिक गुहा में बिना पतला सतह पर तैरनेवाला का इंजेक्शन शामिल है।

भ्रूण का संक्रमण.

I. एलांटोइक गुहा में वायरस का परिचय

• 1. अंडों को उनके किनारे पर रखें और ऊपर से अल्कोहल से पोंछ लें नसबंदीसंक्रमण बिंदु के आसपास का क्षेत्र.
• 2. कटिंग डिस्क से सुसज्जित डेंटल ड्रिल का उपयोग करके खोल में एक छोटा छेद किया जाता है। छेद इतना गहरा होना चाहिए कि उसमें सुई डाली जा सके। के लिएइंजेक्शन, लेकिन यह सलाह दी जाती है कि खोल की आंतरिक झिल्ली को नुकसान न पहुंचे।
• 3. नंबर 25 सुई के साथ एक सिरिंज का उपयोग करके, 0.1 मिलीलीटर वायरस को सीधे खोल के नीचे सुई डालकर, एलेंटोइक गुहा में डाला जाता है।
• 4. खोल के छेद को थोड़ी मात्रा में पिघले हुए मोम से सील कर दिया जाता है।
• 5. संक्रमित अंडों को थर्मोस्टेट में नम वातावरण में नुकीले सिरे से सेते हैं। ऊष्मायन के दौरान अंडों को पलटने की कोई आवश्यकता नहीं है।

द्वितीय. एमनियोटिक गुहा में वायरस का इंजेक्शन

• 1. अंडे के कुंद सिरे को अल्कोहल से पोंछकर कीटाणुरहित किया जाता है और एक छोटा सा छेद किया जाता है, जैसा कि चित्र में दिखाया गया है।
• 2. अंडे को एक अंधेरे कमरे में उज्ज्वल प्रकाश स्रोत के पास रखा जाता है ताकि भ्रूण दिखाई दे।
• 3. एक सुई संख्या 23, 4 सेमी लंबी, बने छेद में डाली जाती है, और फिर भ्रूण की दिशा में एक तेज गति के साथ - एमनियोटिक गुहा में डाली जाती है। इस मामले में, 0.1 मिलीलीटर वायरस डाला जाता है और सुई को सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है।
• 4. खोल में छेद को पिघले हुए मोम से सील कर दिया जाता है और अंडों को ऊपर बताए अनुसार सेया जाता है।

ऊष्मायन अवधि।

अधिकतम वायरस उपज प्राप्त करने के लिए आवश्यक इष्टतम ऊष्मायन समय विशिष्ट तनाव पर निर्भर करता है और इसे प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित किया जाना चाहिए। इन्फ्लूएंजा ए वायरस के कुछ उपभेदों के लिए, उदाहरण के लिए फाउल डिस्टेंपर वायरस, अधिकतम उपज 24-26 घंटों के बाद प्राप्त होती है, जबकि मानव इन्फ्लूएंजा ए वायरस के अधिकांश उपभेदों के साथ-साथ बी और प्रकार के वायरस साथ 48-72 घंटे के ऊष्मायन की आवश्यकता होती है।

वायरस संग्रह.

अंडे से वायरस युक्त तरल निकालने का प्रयास करने से पहले, अंडे को 4-18 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर या 30 मिनट के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर ठंडा करने की सिफारिश की जाती है। ठंडा होने पर, भ्रूण मर जाता है और आसपास की रक्त वाहिकाएं संकीर्ण हो जाती हैं। इस प्रकार, लाल रक्त कोशिकाओं के साथ वायरस युक्त तरल के दूषित होने की संभावना काफी कम हो जाती है, जो वायरस के हिस्से को बांध सकता है और इस तरह इसकी उपज को कम कर सकता है। यदि लाल रक्त कोशिकाओं के साथ संदूषण से बचा नहीं जा सकता है, तो सामग्री को 37°C पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट करके वायरस के नुकसान को कम किया जा सकता है। इन स्थितियों के तहत, विरिअन न्यूरामिनिडेज़ एरिथ्रोसाइट रिसेप्टर्स को नष्ट कर देता है जिससे वायरस जुड़ता है, और इसे छोड़ दिया जाता है।

I. एलैंटोइक द्रव का संग्रह

• 1. अंडों को कुंद सिरे वाले स्टैंड पर रखें और उनकी सतह को अल्कोहल से जीवाणुरहित करें।
• 2. अंडे का कुंद सिरा बाँझ चिमटी या एक विशेष उपकरण का उपयोग करके खोला जाता है। वायु थैली के चारों ओर का आवरण हटा दिया जाता है, जिससे एलेंटोइक गुहा तक पहुंच संभव हो जाती है।
• 3. स्टेराइल ब्लंट-टिप्ड चिमटी का उपयोग करके, कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को फाड़ें और इसे अंडे के किनारे पर ले जाएं।
• 4. भ्रूण और जर्दी की थैली को चिमटी से सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है और एलेंटोइक द्रव को एक चौड़े सिरे वाले पिपेट से चूस लिया जाता है। एक मध्यम आकार के अंडे से 7-10 मिलीलीटर हल्का पीला तरल पदार्थ प्राप्त होता है। एलेंटोइक तरल पदार्थ में जर्दी का मिश्रण वायरस के आगे शुद्धिकरण में हस्तक्षेप करता है, इसलिए, जब चयनजर्दी थैली को नुकसान से बचना चाहिए। यदि वायरस जैव रासायनिक अध्ययन के लिए अभिप्रेत है, उदाहरण के लिए, वायरियन एंजाइमों की गतिविधि का विश्लेषण करने के लिए, एलेंटोइक द्रव को 0 डिग्री सेल्सियस पर एकत्र किया जाना चाहिए।
• 5. एलेन्टोइक द्रव को 10,000 पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा स्पष्ट किया जाता है जी और सतह पर तैरनेवाला को 4 या -70 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित करें।

द्वितीय. एम्नियोटिक द्रव का संग्रह

• 1. अंडे की सतह को निष्फल कर दिया जाता है और ऊपर बताए अनुसार कुंद सिरे को खोल दिया जाता है। जितना संभव हो उतना छिलका हटा दें ताकि अंडे की सामग्री आसानी से निकाली जा सके।
• 2. कोरियोएलैंटोइक झिल्ली फट जाती है और अंडे की सामग्री को एक बाँझ पेट्री डिश में डाल दिया जाता है। इस मामले में, एमनियोटिक गुहा बरकरार रहना चाहिए।
• 3. साथनंबर 25 सुई के साथ एक सिरिंज का उपयोग करके, सामग्री को एमनियोटिक गुहा से यथासंभव पूरी तरह से हटा दिया जाता है।
• 4. एमनियोटिक द्रव को एलांटोइक द्रव की तरह ही स्पष्ट और संग्रहित किया जाता है।

अपेक्षित उत्पादन।

भ्रूण में वायरस के प्रजनन की तीव्रता विशिष्ट स्ट्रेन पर निर्भर करती है। जंगली उपभेद शुरू में बहुत कम अनुमापांक देते हैं, लेकिन भ्रूण में कई चरणों के बाद अनुमापांक काफी बढ़ जाता है। भ्रूण पर प्रजनन के लिए अनुकूलित विभिन्न प्रयोगशाला उपभेदों के लिए, उपज भी काफी भिन्न होती है, लेकिन ज्यादातर मामलों में 2000-5000, और कभी-कभी 20,000 HAE/ml तक वायरस एलेंटोइक द्रव में जमा हो जाते हैं। यह स्पष्ट है कि भ्रूण में प्रजनन के साथ अनुकूलन जुड़ा हुआ है साथआनुवंशिक वेरिएंट का चयन, इसलिए आपके पास होना चाहिए वीध्यान रखें कि भ्रूण पर पारित उपभेदों के विस्तृत आनुवंशिक और जैव रासायनिक अध्ययन के परिणाम आवश्यक रूप से मूल अलगाव की विशेषता नहीं बताते हैं।

प्रयोगशाला जानवरों में वायरस का अलगाव।

प्रयोगशाला जानवरों का चुनाव वायरस के प्रकार पर निर्भर करता है। प्रयोगशाला के जानवर एक जैविक मॉडल हैं। कभी-कभी वायरस को प्रयोगशाला स्थितियों में अनुकूलित करने से पहले 3-5 "अंधा", स्पर्शोन्मुख मार्गों को पूरा करना आवश्यक होता है। हालाँकि, प्रयोगशाला के जानवर कुछ वायरस के प्रति संवेदनशील नहीं होते हैं, ऐसे में प्राकृतिक रूप से अतिसंवेदनशील जानवरों का उपयोग करना आवश्यक है। उदाहरण के लिए, स्वाइन बुखार और घोड़ों के संक्रामक एनीमिया के साथ।

प्रयोगशाला पशुओं को संक्रमित करने का उद्देश्य:

1. रोग के रोगजनन का अध्ययन करें;

2. वायरस को रोगजनक सामग्री से अलग करें;

3. प्रतिरक्षा और हाइपरइम्यून सीरम का उत्पादन;

4. टीकों का उत्पादन;

5. प्रयोगशाला स्थितियों में वायरस का रखरखाव;

6. अनुमापन, प्रति इकाई आयतन में वायरस की मात्रा निर्धारित करने के लिए;

7. तटस्थीकरण प्रतिक्रिया के मंचन के लिए जैविक मॉडल;

प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करने की विधि का चुनाव वायरस के ट्रॉपिज्म पर निर्भर करता है। इस प्रकार, न्यूरोट्रोपिक वायरस की खेती करते समय, जानवर मस्तिष्क में संक्रमित हो जाते हैं; श्वसन इंट्रानासली, इंट्राट्रैचियली; त्वचीय - चमड़े के नीचे और अंतःचर्मिक रूप से।

संक्रमण सड़न रोकनेवाला और एंटीसेप्टिक्स के नियमों के अनुपालन में किया जाता है।

जानवरों के शरीर में वायरस युक्त सामग्री डालने के कई तरीके हैं:

चमड़े के नीचे; - इंट्रासेरेब्रल; - इंट्राडर्मल;

इंट्रापेरिटोनियल; - इंट्रामस्क्युलर; - अंतःनेत्र;

अंतःशिरा; - इंट्रानैसल; - पौष्टिक;

संक्रमण के बाद, जानवरों को चिह्नित किया जाता है, एक अलग बक्से में रखा जाता है और 10 दिनों तक निगरानी की जाती है। संक्रमण के बाद पहले दिन किसी जानवर की मृत्यु को गैर-विशिष्ट माना जाता है और बाद में इस पर ध्यान नहीं दिया जाता है।

3 संकेत संक्रमण की प्रभावशीलता का संकेत देते हैं:

नैदानिक ​​लक्षणों की उपस्थिति

किसी जानवर की मौत

पैथोएनाटोमिकल परिवर्तन (अंग का आकार, आकार, रंग और स्थिरता)।

मुर्गी भ्रूण एक निषेचित मुर्गी अंडा है जिसमें एक भ्रूण (भ्रूण) विकसित होता है। चिकन और बटेर भ्रूण पर वायरस की खेती हाल ही में कई वायरस और कुछ बैक्टीरिया - ब्रुसेला, रिकेट्सिया, विब्रियो की खेती और निदान के लिए सबसे सरल और सबसे विश्वसनीय तरीकों में से एक के रूप में व्यापक हो गई है।

चिकन भ्रूण विकसित करने में कई मानव और पशु वायरस का संवर्धन किया जा सकता है। भ्रूणीय ऊतक, विशेष रूप से भ्रूण की झिल्लियाँ, रोगाणु उपकला ऊतकों से समृद्ध, कई वायरस के प्रसार के लिए एक अनुकूल वातावरण है। एपिथेलियोट्रोपिक गुणों (चेचक, आईएलटी, आदि) वाले वायरस कोरियोएलैंटोइक झिल्ली पर सफलतापूर्वक विकसित होते हैं, जिससे मैक्रोस्कोपिक रूप से दृश्यमान परिवर्तन होते हैं। मायक्सोवायरस (इन्फ्लूएंजा, न्यूकैसल रोग, कैनाइन डिस्टेंपर, आदि), संक्रामक ब्रोंकाइटिस वायरस, डकलिंग हेपेटाइटिस, आर्बोवायरस आदि के विभिन्न प्रतिनिधि भ्रूण में अच्छी तरह से प्रजनन करते हैं जब सामग्री को एलेंटोइक गुहा में पेश किया जाता है। कुछ विषाणुओं को जर्दी थैली में सफलतापूर्वक संवर्धित किया जा सकता है।

लाभ:

1. आर्थिक रूप से लाभदायक, इसके अलावा अंडे आसानी से उपलब्ध होते हैं;

2. चिकन भ्रूण के विकास में सुरक्षात्मक तंत्र का अभाव होता है, क्योंकि प्रतिरक्षा प्रणाली अभी तक विकसित नहीं हुई है;

3. अंडे के छिलके वातावरण में बैक्टीरिया और वायरस को प्रवेश करने से रोकते हैं;

चिकन भ्रूण पर वायरस विकसित करने और अलग करने के लिए, बहुत सरल उपकरण की आवश्यकता होती है - एक नियमित थर्मोस्टेट या इनक्यूबेटर।

स्थितियाँ:

1. अंडे संक्रामक रोगों से मुक्त माने जाने वाले खेतों से प्राप्त किए जाते हैं;

2. मुर्गियों की सफेद नस्लों (लेगहॉर्न, रूसी व्हाइट) से चिकन भ्रूण प्राप्त करना बेहतर है, क्योंकि वे हेरफेर के प्रति अधिक प्रतिरोधी होते हैं और मामूली चोटों से नहीं मरते हैं। इसके अलावा, उनका खोल सफेद और अन्य नस्लों की तुलना में अधिक पारदर्शी है, और देखने में आसान है, जो उनके साथ काम करते समय देखने और अवलोकन के लिए सुविधाजनक है;

3. ऊष्मायन के लिए, 10 दिन से अधिक पहले दिए गए निषेचित अंडे का चयन नहीं किया जाता है;

4. असंदूषित अंडे लें, क्योंकि उन्हें ऊष्मायन से पहले धोया नहीं जा सकता है, और गंदे अंडे देखने पर कम दिखाई देते हैं (ओवोस्कोपी) और उनके साथ काम करते समय, हेरफेर प्रक्रिया के दौरान भ्रूण संक्रमित हो सकता है;

अंडों को एक इनक्यूबेटर में या थर्मोस्टेट में पानी गर्म करने और हवा की पहुंच के साथ सेते हैं, और थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के दौरान, अंडों को दिन में 2-3 बार घुमाने की जरूरत होती है और, बेहतर गैस विनिमय के लिए, 5-10 बार बाहर निकाला जाता है। हवा में मिनट. एक निश्चित आर्द्रता बनाए रखने के लिए, पानी के साथ एक बर्तन को वाष्पीकरण के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है; थर्मोस्टेट में तापमान 38° होना चाहिए।

भ्रूण का विकास ऊष्मायन के पहले दिन से ही होता है, मस्तिष्क और कंकाल का बिछाने होता है। 7-9 दिन की उम्र में मुर्गी के भ्रूण की संरचना(नोटबुक देखें).

संक्रमण के लिए अक्सर 7-12 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है। चिकन भ्रूण के साथ काम एक बाँझ कमरे-बॉक्स में सड़न रोकनेवाला के सख्त पालन के साथ किया जाता है।

मुर्गी के भ्रूण को संक्रमित करने का उद्देश्य है:

1. अस्तर को पेटेंट सामग्री से अलग करें;

2. टीकों का उत्पादन;

3. प्रयोगशाला में वायरस को बनाए रखना;

4. वायरस का अनुमापन;

5. तटस्थीकरण प्रतिक्रिया के मंचन के लिए जैविक मॉडल;

6. वायरस हस्तक्षेप और इंटरफेरॉन उत्पादन का अध्ययन; मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण:

संक्रमण के लिए, अच्छी तरह से परिभाषित गतिशीलता वाले व्यवहार्य भ्रूण का चयन किया जाना चाहिए। संक्रमण से पहले, सभी भ्रूणों की एक अंधेरे कमरे में ओवोस्कोप का उपयोग करके सावधानीपूर्वक जांच की जाती है।

संक्रमण से पहले भ्रूण की कैंडलिंग के दौरान, एक पुगा (वायु गुहा), बड़ी रक्त वाहिकाओं का मार्ग और भ्रूण की प्रस्तुति की जगह को एक साधारण पेंसिल के साथ खोल पर रेखांकित किया जाता है, यानी खोल पर वह क्षेत्र जहां भ्रूण निकटतम होता है यह। पग का अंकन, भ्रूण की प्रस्तुति का स्थान और बड़ी रक्त वाहिकाओं का मार्ग संक्रमण के समय वायरस युक्त सामग्री को पेश करने के लिए साइट चुनते समय एक मार्गदर्शक के रूप में कार्य करता है।

संक्रमण के लिए चुने गए चिकन भ्रूणों को एक बॉक्स में स्थानांतरित किया जाता है, जहां उन पर काम किया जाता है। संक्रमण से पहले, सामग्री के परिचय स्थल पर खोल को दो बार आयोडीन युक्त अल्कोहल से उपचारित किया जाता है और जला दिया जाता है। संक्रमण की खुराक 0.1-0.2 सेमी है।

वायरस के प्रकार और संक्रमण के उद्देश्य के आधार पर ये अलग-अलग होते हैं वायरस युक्त सामग्री पेश करने की विधियाँ:

1) कोरियोएलैंटोइक झिल्ली का संक्रमण , 7-12 दिन की आयु के भ्रूणों का उपयोग न्यूरोट्रोपिक, डर्मेट्रोपिक और कुछ पैंट्रोपिक वायरस (चेचक, एन्सेफेलोमाइलाइटिस, आईएलटी, पैर और मुंह की बीमारी, रेबीज, प्लेग, आदि) के अलगाव और खेती के लिए किया जाता है। संक्रमण के 3 विकल्प हैं:

ए) पुगा खोलें और इसे कैंची से काट लें, सबशेल झिल्ली को अलग करें और सामग्री को कोरियोएलैंटोइक झिल्ली (सीएओ) पर लगाएं। फिर अंडे के छेद को एक बाँझ कांच की टोपी से सील कर दिया जाता है और टोपी के किनारों पर मोम लगा दिया जाता है;

बी) भ्रूण की प्रस्तुति के पक्ष में पूजा की सीमा पर एक सुई फ़ाइल (फ़ाइल) या एक दाँतेदार स्केलपेल के साथ खोल में लगभग 1 सेमी की लंबाई के साथ एक त्रिकोण काट लें, खोल के अनुभाग को हटा दें और चिमटी के साथ सबस्टेलर झिल्ली और सामग्री का परिचय। छेद को एक स्टेराइल कवर ग्लास से ढक दिया जाता है और किनारों को एक स्टेराइल चिपकने वाली टेप से पैराफिनाइज या सील कर दिया जाता है।

ग) जिस स्थान पर भ्रूण प्रस्तुत किया गया है उस स्थान पर एक स्केलपेल के साथ लगभग 0.5 सेमी के क्षेत्र के साथ खोल का एक छोटा सा क्षेत्र हटा दिया जाता है, फिर इस क्षेत्र में चिमटी या सुई और सामग्री के साथ उपकोश झिल्ली को हटा दिया जाता है इंजेक्ट किया जाता है. यदि सामग्री अंडे की गुहा में अच्छी तरह से फिट नहीं होती है, तो आप अंडे के खोल में छेद के माध्यम से अंडे से हवा को बाहर निकालने के लिए एक रबर बल्ब का उपयोग कर सकते हैं, और परिणामस्वरूप, एक कृत्रिम अंडा बनता है। वह स्थान जहाँ सामग्री डाली जाती है, और फिर सामग्री आसानी से डाली जाती है। खोल में छेद को चिपकने वाले प्लास्टर से ढक दिया जाता है या मोम लगा दिया जाता है।

2) एलैंटोइक गुहा में संक्रमण। यह संक्रमण विधि बहुत सरल है और इसका उपयोग कई वायरस को अलग करने के लिए किया जाता है। संक्रमण के लिए 10-11 दिन का भ्रूण लिया जाता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) संक्रमण पुगा के माध्यम से बिना काटे किया जाता है। एक सुई का उपयोग करके, पुगा के शीर्ष से पुगा की सीमा तक की दूरी को मापें, जिसे खोल पर एक पेंसिल से चिह्नित किया गया है, और सुई को चिह्नित गहराई तक डालें और कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को छेदने के लिए 0.5 सेमी और गहरा करें;

बी) सामग्री को भ्रूण की प्रस्तुति के स्थान पर एक संवहनी क्षेत्र में 3-5 मिमी की गहराई तक खोल में एक पंचर के माध्यम से सुई के साथ डाला जाता है। खोल में छेद को चिपकने वाले प्लास्टर से ढक दिया जाता है या मोम लगा दिया जाता है।

3) जर्दी थैली में संक्रमण. संक्रमण के लिए 5-8 दिन के भ्रूण का उपयोग किया जाता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) सुई को ओवोस्कोप के नियंत्रण में भ्रूण की प्रस्तुति के स्थान पर 45 डिग्री के कोण पर पूजा के किनारे से जर्दी थैली में डाला जाता है;

बी) अंडे को भ्रूण के प्रस्तुति बिंदु को नीचे की ओर रखते हुए स्टैंड पर रखा जाता है और सुई को भ्रूण की ओर ऊपर से नीचे तक लगभग 1 सेमी की गहराई तक डाला जाता है।

इंजेक्शन वाली जगह को चिपकने वाली टेप से सील कर दिया जाता है और पैराफिनाइज़ किया जाता है। 4) एम्नियोटिक गुहा में संक्रमण.संक्रमण की इस पद्धति से, वायरस एमनियोटिक द्रव के संपर्क में आने वाली विभिन्न कोशिकाओं में प्रवेश और गुणा कर सकता है। संक्रमण में आसानी के लिए, संक्रमण से 2-3 दिन पहले पग को ऊपर की ओर करके भ्रूण को सेने की सलाह दी जाती है। फिर भ्रूण और एमनियन ऊपर की ओर बढ़ते हैं और संक्रमित करना अधिक सुविधाजनक होता है। संक्रमण के दो विकल्प हैं:

ए) पुगा को खोलें और काट लें, चिमटी से सबशेल झिल्ली को हटा दें और एमनियन को पकड़ लें, चिमटी से एमनियन को ऊपर खींचें और 0.1 मिलीलीटर की खुराक में सामग्री को एमनियोटिक गुहा में डालें। फिर खोल में छेद को एक बाँझ कांच की टोपी से सील कर दिया जाता है और किनारों पर मोम लगा दिया जाता है;

बी) आंखों के नियंत्रण में एक अंधेरे कमरे में एक पुगा के माध्यम से एक लंबी सुई का उपयोग करके संक्रमण। एक छोटा सा क्षेत्र बनाने के लिए सुई की नोक को पहले एक समकोण पर मोड़ा जाता है। सुई को पूर्व-भ्रूण के उभार के माध्यम से आंख के नियंत्रण में डाला जाता है; इस मामले में, एक कुंद सुई के दबाव में, भ्रूण हिल जाएगा, फिर हल्के से धक्का के साथ एमनियन को छेद दिया जाता है और सुई को थोड़ा सा दबाया जाता है वापस खींच लिया। इस मामले में, भ्रूण को सुई के पीछे ऊपर की ओर बढ़ना चाहिए। फिर सामग्री पेश की जाती है.

5) भ्रूण के शरीर में संक्रमण और मस्तिष्क में संक्रमण। 7-12 दिन पुराने भ्रूण का उपयोग किया जाता है, शरीर के विभिन्न हिस्सों में या सीधे मस्तिष्क में सामग्री डालकर संक्रमण किया जाता है। संक्रमण के लिए, पुगा को खोला जाता है और भ्रूण को चिमटी से खींच लिया जाता है। संक्रमण के इन तरीकों से, संक्रमित भ्रूणों की संख्या में से 30% या उससे अधिक की चोट से मृत्यु हो सकती है।

6) कोरियोएलैंटोइक झिल्ली की बड़ी रक्त वाहिकाओं में संक्रमण। संक्रमण की यह विधि, पिछली विधि की तरह, बहुत ही कम उपयोग की जाती है। रक्त वाहिका के साथ खोल को हटाकर सीधे रक्त प्रवाह के साथ वाहिका में सामग्री को एक पतली सुई से इंजेक्ट किया जाता है।

संक्रमण के बाद, चिकन भ्रूण को एक साधारण पेंसिल से चिह्नित किया जाना चाहिए और थर्मोस्टेट में रखा जाना चाहिए। इन्हें प्रतिदिन देखकर निगरानी की जाती है, वायरस के प्रकार के आधार पर 7-8 दिनों तक अवलोकन किया जाता है। यदि भ्रूण मर जाते हैं, तो उन्हें तुरंत थर्मोस्टेट से हटा दिया जाता है और खुलने तक रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। यदि भ्रूण पहले 14-18 घंटों के भीतर मर जाता है, तो यह चोट या रोग संबंधी सामग्री की विषाक्तता के कारण हो सकता है। इसलिए, जैसे प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करते समय, संदिग्ध मामलों में कई मार्ग बनाने और प्रत्येक सामग्री के लिए कई भ्रूण लेने की सिफारिश की जाती है।

मृत संक्रमित चिकन भ्रूणों की शव परीक्षा, या अवलोकन अवधि समाप्त होने के बाद हटा दी गई, बाँझ बॉक्सिंग स्थितियों में एसेप्टिस के सभी नियमों के साथ की जाती है। खोलने पर, खोल को अल्कोहल से उपचारित किया जाता है और जला दिया जाता है, फिर पुगा को काट दिया जाता है। खुले भ्रूण से, एलेंटोइक द्रव को पहले सावधानीपूर्वक चूसा जाता है (इसकी मात्रा लगभग 7 मिली है), फिर एमनियोटिक झिल्ली को चिमटी से वापस खींचा जाता है, पाश्चर पिपेट से छेद किया जाता है और एमनियोटिक द्रव को चूसा जाता है (इसकी मात्रा 1.0- होती है) 1.5 मिली), फिर जर्दी एकत्र की जाती है, झिल्ली हटा दी जाती है और भ्रूण। परिवर्तनों के लिए द्रव, झिल्लियों और भ्रूण की सावधानीपूर्वक जांच की जाती है। एमनियोटिक द्रव आमतौर पर पूरी तरह से साफ होता है, लेकिन संक्रमित होने पर यह धुंधला और खूनी हो सकता है। वायरस के कारण होने वाले विशिष्ट परिवर्तन कोरियोएलैंटोइक झिल्ली पर सबसे अधिक स्पष्ट होते हैं: सूजन वाले फॉसी दिखाई देते हैं, अपारदर्शी, आकार में गोल और रक्तस्राव। भ्रूण के शरीर पर रक्तस्राव हो सकता है। सभी सामग्री रोगाणुरहित कंटेनरों में एकत्र की जाती है।

वायरोलॉजी में चिकन भ्रूण का उपयोग व्यापक रूप से न केवल वायरस को अलग करने के लिए किया जाता है, बल्कि एंटीजन को जमा करने और प्राप्त करने के लिए, जीवित और मारे गए टीके तैयार करने के लिए, वायरस को टाइट्रेट करने के लिए, वायरस न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया को स्टेज करने के लिए, वायरस को कमजोर करने (कमजोर करने) के लिए, हस्तक्षेप का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है। वायरस और इंटरफेरॉन प्राप्त करना।

द्वारा तैयार: शिक्षक उग्यशेवा श्री.ई.

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वायरस की संरचना

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वायरस की संरचना ए - सरल वायरस बी - जटिल वायरस

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खतरे की डिग्री के आधार पर, वायरस को चार समूहों में विभाजित किया जाता है: समूह I: इबोला, लासा, मारबर्ग, माचुपो बुखार, चेचक और हेपेटाइटिस बी वायरस (बंदर) के रोगजनक। समूह II: आर्बोवायरस, कुछ एरेनावायरस, रेबीज वायरस, मानव हेपेटाइटिस सी और बी वायरस, एचआईवी। समूह III - इन्फ्लूएंजा वायरस, पोलियो, एन्सेफेलोमोकार्डिटिस, वैक्सीनिया। समूह IV - एडेनोवायरस, कोरोनावायरस, हर्पीसवायरस, रीओवायरस, ओंकोवायरस।

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वायरस के वर्गीकरण के सिद्धांत न्यूक्लिक एसिड का प्रकार, इसकी संरचना, प्रतिकृति रणनीति आकार, आकारिकी, विषाणु की समरूपता, कैप्सोमेरेस की संख्या, सुपरकैप्सिड की उपस्थिति। विशिष्ट एंजाइमों की उपस्थिति, विशेष रूप से आरएनए और डीएनए पॉलिमरेज़, न्यूरोमिनिडेस भौतिक और रासायनिक एजेंटों के प्रति संवेदनशीलता, विशेष रूप से ईथर इम्यूनोलॉजिकल गुण प्राकृतिक संचरण तंत्र मेजबान, उसके ऊतकों और कोशिकाओं के लिए ट्रोपिज्म पैथोलॉजी, समावेशन का गठन रोगों का लक्षण विज्ञान।

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वायरस का वर्गीकरण (आरएनए युक्त)

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वायरस का वर्गीकरण (डीएनए युक्त)

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वायरस की रासायनिक संरचना वायरस में न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन, लिपिड, ग्लाइकोलिपिड और ग्लाइकोप्रोटीन शामिल हैं। उनमें हमेशा एक प्रकार का न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या आरएनए) होता है, जो विषाणु के द्रव्यमान का 1% से 40% तक होता है। वायरल जीनोम में केवल कुछ प्रोटीनों के संश्लेषण के लिए पर्याप्त जानकारी होती है। उनका द्रव्यमान 10-15 मिलीग्राम तक पहुंचता है, जो कोशिकाओं की तुलना में 1 मिलियन गुना कम है, और उनकी लंबाई 0.093 मिमी तक है। न्यूक्लियोटाइड जोड़े की संख्या 3150 (हेपेटाइटिस बी वायरस) से 230,000 (वेरियोला वायरस) तक होती है। वायरल प्रोटीन (70-90%) को संरचनात्मक और गैर-संरचनात्मक में विभाजित किया गया है। संरचनात्मक - प्रोटीन जो परिपक्व बाह्यकोशिकीय विषाणुओं का हिस्सा होते हैं। वे कई महत्वपूर्ण कार्य करते हैं: - न्यूक्लिक एसिड को बाहरी क्षति से बचाते हैं; संवेदनशील कोशिकाओं की झिल्लियों के साथ बातचीत करते हैं; कोशिका में वायरस के प्रवेश को सुनिश्चित करते हैं; - आरएनए और डीएनए पोलीमरेज़ गतिविधि रखते हैं, आदि। गैर-संरचनात्मक प्रोटीन हैं परिपक्व विषाणुओं का हिस्सा नहीं, बल्कि उनके प्रजनन के दौरान बनते हैं। वे: - वायरल जीनोम की अभिव्यक्ति का विनियमन प्रदान करते हैं - वायरल प्रोटीन के अग्रदूत हैं जो सेलुलर जैवसंश्लेषण को दबा सकते हैं। विषाणु में उनके स्थान के आधार पर, प्रोटीन को कैप्सिड, सुपरकैप्सिड, मैट्रिक्स, कोर प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड से जुड़े प्रोटीन में विभाजित किया जाता है। लिपिड (15-35%) जटिल वायरस में निहित होते हैं और सुपरकैप्सिड शेल का हिस्सा होते हैं, जो इसकी दोहरी लिपिड परत बनाते हैं। वे: - वायरल आवरण को स्थिर करते हैं - बाहरी वातावरण में हाइड्रोफिलिक पदार्थों से विषाणुओं की आंतरिक परतों को सुरक्षा प्रदान करते हैं - विषाणुओं के डीप्रोटीनीकरण में भाग लेते हैं।

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वायरस का प्रजनन. इसकी विशेषताएं यह हैं कि जीनोम आरएनए और डीएनए दोनों द्वारा दर्शाए जाते हैं, वे संरचना और रूप में विविध हैं, लगभग सभी वायरल आरएनए कोशिका के डीएनए से स्वतंत्र रूप से प्रतिलिपि बनाने में सक्षम हैं। वायरस में प्रजनन की एक अंतर्निहित विघटनकारी विधि होती है, जिसमें शामिल हैं तथ्य यह है कि जीनोम और वायरस प्रोटीन के संश्लेषण को स्थान और समय में अलग किया जाता है: न्यूक्लिक एसिड कोशिका नाभिक में दोहराया जाता है, साइटोप्लाज्म में प्रोटीन, और संपूर्ण विषाणुओं का संग्रह साइटोप्लाज्मिक झिल्ली की आंतरिक सतह पर हो सकता है। वायरल प्रजनन यूकेरियोटिक कोशिकाओं में विदेशी जानकारी को फिर से बनाने की एक अनूठी प्रणाली है और वायरस की जरूरतों के लिए सेलुलर संरचनाओं की पूर्ण अधीनता सुनिश्चित करती है। वायरस के प्रजनन में कई चरण होते हैं। शुरुआती लोगों में कोशिका की सतह पर वायरस का सोखना, कोशिका में उनका प्रवेश (प्रवेश) और उनका निर्वस्त्रीकरण (डीप्रोटीनाइजेशन) शामिल हैं। देर के चरणों (वायरल जीनोम रणनीति) में वायरल न्यूक्लिक एसिड संश्लेषण, प्रोटीन संश्लेषण, वायरियन असेंबली और कोशिका से वायरल कणों की रिहाई शामिल है।

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कोशिका की सतह पर वायरस का जुड़ाव दो तंत्रों द्वारा सुनिश्चित किया जाता है: गैर-विशिष्ट और विशिष्ट। निरर्थक को इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन की ताकतों द्वारा निर्धारित किया जाता है जो वायरस और कोशिकाओं की सतह पर रासायनिक समूहों के बीच होता है जो विभिन्न चार्ज ले जाते हैं। विशिष्ट तंत्र (रिवर्स और गैर-प्रतिवर्ती सोखना) पूरक वायरल और सेलुलर रिसेप्टर्स द्वारा निर्धारित किया जाता है। वे प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट या लिपिड प्रकृति के हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस का रिसेप्टर सियालिक एसिड है। सोखने वाली जगहों पर रिसेप्टर्स की संख्या 3000 तक पहुंच सकती है। वायरस की सतह पर, रिसेप्टर्स आमतौर पर गड्ढों और दरारों के नीचे स्थित होते हैं। कोशिका में वायरस का प्रवेश कोशिका झिल्ली के विशेष क्षेत्रों में रिसेप्टर एंडोसाइटोसिस (वाइरोपेक्सिस का एक प्रकार) के तंत्र के माध्यम से होता है जिसमें उच्च आणविक भार - क्लैथ्रिन के साथ एक विशेष ब्लॉक होता है। झिल्लियाँ आक्रमण करती हैं और क्लैथ्रिन-लेपित अंतःकोशिकीय रिक्तिकाएँ बनती हैं। उनकी संख्या 2000 तक पहुंच सकती है। रिक्तिकाएं एकजुट होकर रिसेप्टोसोम बनाती हैं, और बाद वाला लाइसोसोम में विलीन हो जाता है। वायरस के सतही प्रोटीन लाइसोसोम की झिल्लियों के साथ परस्पर क्रिया करते हैं, और उनके न्यूक्लियोप्रोटीन साइटोप्लाज्म में छोड़े जाते हैं। हालाँकि, कोशिका में वायरस के प्रवेश के लिए एक और तंत्र है - झिल्ली संलयन का प्रेरण। यह एक विशेष वायरल फ़्यूज़न प्रोटीन (F- फ़्यूज़न से - फ़्यूज़न) के कारण होता है। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप, वायरल लिपोप्रोटीन आवरण कोशिका झिल्ली के साथ एकीकृत हो जाता है, और इसका जीनोम कोशिका में प्रवेश करता है। इस तरह के प्रोटीन की पहचान इन्फ्लूएंजा वायरस, पैराइन्फ्लुएंजा, रबडोवायरस आदि में की गई है।

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विषाणुओं का निर्वस्त्रीकरण एक बहु-चरणीय प्रक्रिया है, जिसके दौरान उनका न्यूक्लिक तंत्र मुक्त हो जाता है, जीनोम अभिव्यक्ति को रोकने वाले सुरक्षात्मक आवरण गायब हो जाते हैं। यह विशिष्ट क्षेत्रों - लाइसोसोम और गोल्गी तंत्र में होता है। प्रजनन के बाद के चरणों का उद्देश्य वायरल न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन का संश्लेषण करना है। प्रतिकृति का तंत्र (वायरल जीनोम का निर्माण जो पूर्ववर्ती की एक सटीक प्रतिलिपि है) न्यूक्लिक एसिड की विशेषताओं पर निर्भर करता है। यह विभिन्न प्रकार के वायरस के लिए समान नहीं है। जिन वायरस में आरएनए होता है उनमें प्रतिकृति समान पैटर्न के अनुसार होती है। एमआरएनए को मातृ आरएनए पर संश्लेषित किया जाता है, और आरएनए के मध्यवर्ती रूप वायरल जीनोम के संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में काम करते हैं। प्रतिलेखन संदेशवाहक आरएनए के निर्माण की प्रक्रिया है। यह डीएनए- या आरएनए-निर्भर आरएनए पोलीमरेज़ नामक विशेष एंजाइमों की मदद से होता है। डीएनए वायरस में सेलुलर मूल के ये एंजाइम होते हैं, जबकि आरएनए वायरस के पास अपने स्वयं के वायरस-विशिष्ट ट्रांसक्रिपटेस होते हैं। अनुवाद चरण में, आनुवंशिक जानकारी को मैसेंजर आरएनए से पढ़ा जाता है और अमीनो एसिड अनुक्रम में अनुवादित किया जाता है। यह प्रक्रिया राइबोसोम में होती है। आरएनए अणु त्रिक कोड अनुक्रम के अनुसार राइबोसोम में चले जाते हैं जिन्हें स्थानांतरण आरएनए द्वारा पहचाना जाता है। उत्तरार्द्ध विशेष क्षेत्रों में अमीनो एसिड ले जाता है।

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वायरस की खेती चिकन भ्रूण 6-12 दिन की उम्र। संक्रमण के तरीके - खुला, बंद

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वायरस की खेती सेल कल्चर: - मानव भ्रूण, बंदर गुर्दे, चिकन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट, आदि की प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड संस्कृतियां; द्वितीयक संस्कृतियों के रूप में कई मार्गों में विकसित होने में सक्षम; प्रत्यारोपण योग्य कोशिकाएँ; वे कोशिका संस्कृतियाँ हैं जिन्होंने असीमित वृद्धि और प्रजनन की क्षमता हासिल कर ली है; वे ट्यूमर से या सामान्य मानव या पशु ऊतकों से प्राप्त होते हैं जिनमें एक परिवर्तित कैरियोटाइप होता है। हेला (सरवाइकल कार्सिनोमा) हेप-2 (मानव स्वरयंत्र कार्सिनोमा), सीवी (मानव मौखिक कार्सिनोमा), आरडी (मानव रबडोमायोसारकोमा), आरएच (मानव भ्रूण की किडनी), वेरो (हरा बंदर की किडनी), एसपीईवी (सुअर भ्रूण की किडनी), वीएनके- 32 (सीरियाई हम्सटर किडनी)। सेल कल्चर द्विगुणित कोशिकाएं; वे एक ही प्रकार की कोशिकाओं की संस्कृतियाँ हैं, उनमें गुणसूत्रों का द्विगुणित सेट होता है और प्रयोगशाला स्थितियों में 100 उपसंस्कृतियों का सामना करने में सक्षम होते हैं। वे वायरस के टीके की तैयारी प्राप्त करने के लिए एक सुविधाजनक मॉडल हैं, क्योंकि वे विदेशी वायरस द्वारा संदूषण से मुक्त हैं, मार्ग के दौरान मूल कैरियोटाइप को बनाए रखते हैं, और उनमें ऑन्कोजेनिक गतिविधि नहीं होती है। अक्सर, वे संस्कृति रेखाओं का उपयोग करते हैं जो मानव भ्रूण फ़ाइब्रोब्लास्ट (WI-38, MRC-5, MRC-9, IMR-90), गाय, सूअर, भेड़ और इसी तरह से प्राप्त होते हैं। सेल कल्चर को जमे हुए रखा जाता है।

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कोशिका संवर्धन या उनके विकास को समर्थन देने के लिए उपयोग किए जाने वाले पोषक तत्व प्राकृतिक या सिंथेटिक (कृत्रिम) हो सकते हैं। प्राकृतिक मीडिया - मवेशियों का रक्त सीरम, सीरस गुहाओं से तरल पदार्थ, दूध हाइड्रोलिसिस उत्पाद, विभिन्न हाइड्रोलाइज़ेट (5% हेमोहाइड्रोलाइज़ेट, 0.5% लैक्टोएल्ब्यूमिन हाइड्रोलाइज़ेट) या ऊतक अर्क। उनकी रासायनिक संरचना ऐसी स्थितियाँ बनाने में मदद करती है जो मानव शरीर में मौजूद स्थितियों के समान होती हैं। ऐसे मीडिया का एक महत्वपूर्ण नुकसान उनकी गैर-मानक प्रकृति है, क्योंकि उन्हें बनाने वाले घटकों की गुणात्मक और मात्रात्मक संरचना भिन्न हो सकती है। सिंथेटिक पोषक तत्व मीडिया में यह खामी नहीं है, क्योंकि उनकी रासायनिक संरचना मानक है, क्योंकि वे कृत्रिम परिस्थितियों में विभिन्न नमक समाधानों (विटामिन, अमीनो एसिड) के संयोजन से प्राप्त होते हैं। इन सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले समाधानों में मध्यम 199 (प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड और निरंतर सेल संस्कृतियों की खेती), ईगल माध्यम (इसमें अमीनो एसिड और विटामिन का न्यूनतम सेट होता है और इसका उपयोग द्विगुणित सेल लाइनों और निरंतर कोशिकाओं की खेती के लिए किया जाता है), ईगलएमईएम माध्यम (खेती) शामिल हैं विशेष रूप से मांग वाली सेल लाइनों की), सॉल्यूशन हैंक्स, जिसका उपयोग कल्चर मीडिया, वॉशिंग सेल आदि बनाने के लिए किया जाता है।

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प्रयोगशाला पशुओं का संक्रमण. वायरस को अलग करने और पहचानने, विशिष्ट एंटीवायरल सीरा प्राप्त करने, वायरल रोगों के रोगजनन के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने, बीमारियों से निपटने और उनकी रोकथाम के तरीकों को विकसित करने के लिए कई प्रयोगशाला जानवरों का व्यापक रूप से वायरोलॉजी में उपयोग किया जाता है। सबसे अधिक इस्तेमाल विभिन्न उम्र (दो दिन पुराने), सफेद चूहे, गिनी सूअर, खरगोश, गोफर, कॉटॉन्टेल चूहे, बंदर और अन्य के सफेद चूहे हैं।

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जानवरों को संक्रमित करने के विभिन्न तरीके हैं, जो वायरस की प्रकृति और रोग की नैदानिक ​​तस्वीर पर निर्भर करते हैं। परीक्षण सामग्री को प्रशासित किया जा सकता है: - मुंह के माध्यम से - श्वसन पथ में (साँस लेना, नाक के माध्यम से) - त्वचीय - इंट्राडर्मल - चमड़े के नीचे, इंट्रामस्क्युलर - अंतःशिरा - इंट्रापेरिटोनियल - इंट्राकार्डियक - स्कारिफाइड कॉर्निया पर - आंख के पूर्वकाल कक्ष में - मस्तिष्क में.

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बैक्टीरियोफेज (फेज) (प्राचीन ग्रीक φᾰγω से - "मैं खा जाता हूं") वायरस हैं जो बैक्टीरिया कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से संक्रमित करते हैं। अक्सर, बैक्टीरियोफेज बैक्टीरिया के अंदर गुणा करते हैं और उनके लसीका का कारण बनते हैं। आमतौर पर, बैक्टीरियोफेज में एक प्रोटीन कोट और सिंगल- या डबल-स्ट्रैंडेड न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या, कम सामान्यतः, आरएनए) की आनुवंशिक सामग्री होती है। कण का आकार लगभग 20 से 200 एनएम है। फ्रांसीसी-कनाडाई माइक्रोबायोलॉजिस्ट डी'हेरेल, फ्रेडरिक ट्वोर्ट से स्वतंत्र रूप से, फेलिक्स ने 3 सितंबर, 1917 को बैक्टीरियोफेज की खोज की सूचना दी। इसके साथ ही, यह ज्ञात है कि 1898 में रूसी माइक्रोबायोलॉजिस्ट निकोलाई फेडोरोविच गामालेया ने पहली बार एक प्रत्यारोपण योग्य एजेंट के प्रभाव में बैक्टीरिया (एंथ्रेक्स बेसिलस) के लसीका की घटना देखी थी। जीवन चक्र एक जीवाणु कोशिका के साथ अंतःक्रिया के प्रारंभिक चरण में शीतोष्ण और विषाणु बैक्टीरियोफेज का चक्र एक ही होता है। फ़ेज़-विशिष्ट सेल रिसेप्टर्स पर बैक्टीरियोफेज का सोखना। मेजबान कोशिका में फेज न्यूक्लिक एसिड का इंजेक्शन। फ़ेज़ और बैक्टीरियल न्यूक्लिक एसिड की सह-प्रतिकृति। कोशिका विभाजन। इसके अलावा, बैक्टीरियोफेज दो मॉडलों के अनुसार विकसित हो सकता है: लाइसोजेनिक या लिटिक पथ। कोशिका विभाजन के बाद शीतोष्ण बैक्टीरियोफेज प्रोफ़ेज अवस्था (लाइसोजेनिक मार्ग) में होते हैं। विषाणु बैक्टीरियोफेज लिटिक मॉडल के अनुसार विकसित होते हैं: फेज का न्यूक्लिक एसिड फेज एंजाइमों के संश्लेषण को निर्देशित करता है, इसके लिए बैक्टीरिया प्रोटीन-संश्लेषण उपकरण का उपयोग करता है। फ़ेज़ किसी न किसी तरह से मेजबान डीएनए और आरएनए को निष्क्रिय कर देता है, और फ़ेज़ एंजाइम इसे पूरी तरह से तोड़ देते हैं; फ़ेज़ का आरएनए प्रोटीन संश्लेषण के लिए सेलुलर तंत्र को "अधीनस्थ" करता है। फ़ेज़ न्यूक्लिक एसिड नए आवरण प्रोटीनों की प्रतिकृति बनाता है और उनके संश्लेषण को निर्देशित करता है। नए फ़ेज़ कण फ़ेज़ न्यूक्लिक एसिड के चारों ओर प्रोटीन शेल (कैप्सिड) के सहज स्व-संयोजन के परिणामस्वरूप बनते हैं; लाइसोजाइम का संश्लेषण फेज आरएनए के नियंत्रण में होता है। कोशिका लसीका: लाइसोजाइम के प्रभाव में कोशिका फट जाती है; लगभग 200-1000 नए फ़ेज़ जारी किए जाते हैं; फ़ेज़ अन्य जीवाणुओं को संक्रमित करते हैं। 1 - सिर, 2 - पूंछ, 3 - न्यूक्लिक एसिड, 4 - कैप्सिड, 5 - "कॉलर", 6 - पूंछ का प्रोटीन आवरण, 7 - पूंछ तंतु, 8 - रीढ़, 9 - बेसल प्लेट

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मुर्गी भ्रूण का संक्रमण मुर्गी भ्रूण का उपयोग वायरस और माइकोप्लाज़्मा की खेती के लिए किया जाता है। वायरस के प्रकार और संक्रमण की विधि के आधार पर भ्रूण का उपयोग 8-14 दिनों की उम्र में किया जाता है; कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली में, एलांटोइक और एमनियोटिक गुहा में, जर्दी थैली में। संक्रमण से पहले, भ्रूण की व्यवहार्यता एक ओवोस्कोप में निर्धारित की जाती है और वायु थैली की सीमाओं को खोल पर एक पेंसिल से चिह्नित किया जाता है। मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण सख्ती से सड़न रोकने वाली स्थितियों के तहत एक बॉक्स में उबालकर निष्फल उपकरण का उपयोग करके किया जाता है। वायु स्थान के ऊपर के खोल को अल्कोहल से पोंछा जाता है, लौ में जलाया जाता है, 2% आयोडीन घोल से चिकना किया जाता है, फिर से अल्कोहल से पोंछा जाता है और जला दिया जाता है। 0.05 - 0.2 मिली की मात्रा में वायरल सामग्री को ट्यूबरकुलिन सिरिंज या पाश्चर पिपेट के साथ कोरियोन-एलांटोइक झिल्ली पर लगाया जाता है। थर्मोस्टेट में 48-72 घंटों के ऊष्मायन के बाद भ्रूण को विच्छेदित किया जाता है। क्रोलेंटोइक झिल्ली में वायरस की उपस्थिति निर्धारित की जाती है: 1. विभिन्न आकृतियों के सफेद अपारदर्शी धब्बों द्वारा; 2. रक्तगुल्म प्रतिक्रिया में.

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धन्यवाद!!!

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शुभ दोपहर, प्रिय पाठकों! आज हम घर पर और पोल्ट्री फार्मों में ऊष्मायन के दौरान दिन-ब-दिन अंडे में मुर्गी के विकास के बारे में विवरण देंगे, तस्वीरें और वीडियो दिखाएंगे। इसे फ़ैक्टरी पैमाने पर और निजी फार्मस्टेड्स दोनों में आत्मविश्वास से अभ्यास किया जाता है।

लेकिन, इसके व्यापक उपयोग के बावजूद, कुछ लोग आनुवंशिक स्तर पर निहित जटिल तंत्र के बारे में सोचते हैं जो चिकन की वृद्धि और विकास को सुनिश्चित करता है।

अभी भी एक राय है कि चूजा जर्दी से बढ़ता है। इस लेख में आप छुपे हुए सभी रहस्यों के बारे में जानेंगे, और यह भी जानेंगे कि मुर्गे में एलांटोइस और मुर्गे में एमनियन शब्दों के नीचे किस तरह का "भयानक" अर्थ छिपा है, और वे क्या कार्य करते हैं।

दिन के अनुसार अंडे में मुर्गी का विकास

ब्लास्टोडिस्क

चूजे का विकास ब्लास्टोडिस्क से शुरू होता है। ब्लासोडिस्क जर्दी की सतह पर स्थित साइटोप्लाज्म का एक छोटा सा थक्का है। ब्लास्टोडिस्क के स्थान पर, जर्दी का घनत्व बहुत कम होता है, जो ब्लास्टोडिस्क के साथ जर्दी के लगातार ऊपर की ओर तैरने में योगदान देता है।

यह सुविधा ऊष्मायन प्रक्रिया के दौरान बेहतर हीटिंग प्रदान करती है। निषेचित ब्लास्टोडिस्क मुर्गे के शरीर में रहते हुए ही विभाजित होना शुरू हो जाता है और जब इसे बिछाया जाता है, तब तक यह पहले से ही पूरी तरह से ब्लास्टोडर्म से घिरा होता है। ब्लास्टोडिस्क लगभग 2 मिमी आकार के एक छोटे सफेद धब्बे जैसा दिखता है।

एक वलय में जर्मिनल डिस्क के चारों ओर का प्रकाश प्रभामंडल ब्लास्टोडर्म है।

जब अंडा अनुकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों में प्रवेश करता है और अंडे देना बंद कर देता है, तो कोशिका विभाजन जारी रहता है।

आपको पता होना चाहिए:आम धारणा के विपरीत कि ओवोस्कोपिंग केवल ऊष्मायन के 6वें दिन से ही की जा सकती है, ब्लास्टोडर्म का विकास ऊष्मायन शुरू होने के 18-24 घंटों के बाद स्पष्ट रूप से दिखाई देता है। इस बिंदु पर, 5-6 मिमी व्यास वाला एक कालापन स्पष्ट रूप से दिखाई देता है, जो अंडे को पलटने पर आसानी से हिल जाता है।

ऊष्मायन के 2-3 दिनों में, अनंतिम झिल्लियों का विकास शुरू हो जाता है:

1. मुर्गे में एमनियन
2. मुर्गे में एलांटोइस

ये सभी, वास्तव में, अस्थायी अंग हैं जो भ्रूण के अंतिम गठन तक उसकी महत्वपूर्ण गतिविधि को सुनिश्चित करने का कार्य करने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं।

मुर्गे में एमनियन

यह एक खोल है जो तरल पदार्थ से भरे होने के कारण भ्रूण को शारीरिक प्रभाव और सूखने से बचाता है। चूजे का एमनियन भ्रूण की उम्र के आधार पर द्रव की मात्रा को नियंत्रित करता है।

एमनियोटिक थैली की उपकला सतह भ्रूण की गुहा को पानी से भरने में सक्षम है, और जैसे-जैसे यह बढ़ता है तरल पदार्थ का बहिर्वाह भी सुनिश्चित करता है।

मुर्गे में एलांटोइस

अस्थायी अंगों में से एक जो कई कार्य करता है:

• भ्रूण को ऑक्सीजन की आपूर्ति करना;
• भ्रूण से अपशिष्ट उत्पादों को अलग करता है;
• तरल पदार्थ और पोषक तत्वों के परिवहन में भाग लेता है;
• खोल से भ्रूण तक खनिज और कैल्शियम की डिलीवरी करता है।

विकास की प्रक्रिया के दौरान चूजे का अल्लेंटोइस एक शाखित संवहनी नेटवर्क बनाता है जो अंडे की पूरी आंतरिक सतह को रेखाबद्ध करता है और गर्भनाल के माध्यम से चूजे से जुड़ता है।

मुर्गी अंडे में सांस ले रही है

मुर्गी के विकास के चरण के आधार पर अंडे में ऑक्सीजन विनिमय का एक अलग तंत्र होता है। विकास के प्रारंभिक चरण में, ऑक्सीजन जर्दी से सीधे ब्लास्टोडर्म कोशिकाओं तक आती है।

संचार प्रणाली के आगमन के साथ, ऑक्सीजन रक्त में प्रवेश करती है, अभी भी जर्दी से। लेकिन जर्दी तेजी से बढ़ते जीव की श्वसन को पूरी तरह से सुनिश्चित नहीं कर सकती है।

छठे दिन से शुरू होकर, ऑक्सीजन प्रदान करने का कार्य धीरे-धीरे एलांटोइस में स्थानांतरित हो जाता है। इसकी वृद्धि अंडे के वायु कक्ष की ओर शुरू होती है और, उस तक पहुंचकर, खोल के एक बड़े आंतरिक क्षेत्र को कवर करती है। चूजा जितना बड़ा होता है, एलांटोइस उतना ही बड़ा क्षेत्र कवर करता है।

ओवोस्कोपिक होने पर, यह एक गुलाबी नेटवर्क की तरह दिखता है, जो पूरे अंडे को ढकता है और उसके नुकीले हिस्से पर बंद होता है।

अंडे में चिकन का पोषण

विकास के पहले दिनों में, भ्रूण प्रोटीन और जर्दी के पोषक तत्वों का उपयोग करता है। चूँकि जर्दी में खनिज, वसा और कार्बोहाइड्रेट का एक पूरा परिसर होता है, यह बढ़ते शरीर की सभी प्रारंभिक ज़रूरतों को पूरा करने में सक्षम है।

एलांटोइस (विकास के 11वें दिन) के बंद होने के बाद, कार्यों का पुनर्वितरण होता है। भ्रूण बड़ा हो जाता है और अंडे की लंबी धुरी के साथ एक स्थिति ले लेता है, जिसका सिर कुंद सिरे की ओर होता है। इस बिंदु पर प्रोटीन अंडे के नुकीले सिरे में केंद्रित होता है।

चूजे का वजन, एलांटोइस के दबाव के साथ मिलकर, प्रोटीन के विस्थापन और एमनियन के माध्यम से भ्रूण के मुंह में इसके प्रवेश को सुनिश्चित करता है। यह सतत प्रक्रिया ऊष्मायन के दौरान दिन-ब-दिन अंडे में चूजे की तीव्र वृद्धि और विकास सुनिश्चित करती है।

13वें दिन से, मुर्गी अपने आगे के विकास के लिए जिन खनिजों का उपयोग करती है, उन्हें शेल से एलांटोइस द्वारा वितरित किया जाता है।

आपको पता होना चाहिए: सामान्य चिकन पोषण केवल चिकन में समय पर बंद एलांटोइस द्वारा प्रदान किया जा सकता है। यदि, बंद होने पर, अंडे के नुकीले सिरे में अभी भी प्रोटीन होता है जो वाहिकाओं से ढका नहीं होता है, तो चिकन में आगे के विकास के लिए पर्याप्त पोषक तत्व नहीं होंगे।

अंडे की स्थिति और चूज़े का विकास

हाल ही में, मुर्गी के अंडों को ऊर्ध्वाधर स्थिति में सेने का चलन तेजी से बढ़ गया है। लेकिन इस विधि का मुर्गे के विकास पर सबसे अच्छा प्रभाव नहीं पड़ता है।

ऊर्ध्वाधर स्थिति में, मुड़ते समय अधिकतम झुकाव 45° होता है। यह झुकाव एलांटोइस की सामान्य वृद्धि और इसके समय पर बंद होने के लिए पर्याप्त नहीं है। यह बड़े अंडों के लिए विशेष रूप से सच है।

जब क्षैतिज स्थिति में ऊष्मायन किया जाता है, तो रोटेशन 180° प्रदान किया जाता है, जिसका एलांटोइस के विकास पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है और, परिणामस्वरूप, चूजे के पोषण पर।

एक नियम के रूप में, ऊर्ध्वाधर रूप से रखे गए अंडों से निकलने वाली फुलियों का वजन क्षैतिज रूप से रखे गए अंडों से निकलने वाली फुलियों की तुलना में 10% कम होता है।

चूजे के विकास के लिए अंडे पलटने का महत्व

पहले दिन और आखिरी दो को छोड़कर, विकास के सभी चरणों में ऊष्मायन के दौरान अंडों को पलटना आवश्यक है। पहले दिन में, ब्लास्टोडिस्क का गहन ताप आवश्यक होता है, और आखिरी दिन में छोटी चीख़ पहले से ही खोल को तोड़ने की स्थिति ले लेती है।

विकास के शुरुआती चरणों के दौरान, अंडों को मोड़ने से ब्लास्टोडर्म या एमनियन के खोल के अंदर चिपके रहने का खतरा खत्म हो जाता है।

रोटेशन से भी मदद मिलती है:

• एम्नियन की कमी;
• अंडों का एकसमान तापन;
• भ्रूण द्वारा सही स्थिति अपनाना;
• गैस विनिमय में सुधार;
• एलांटोइस का समय पर बंद होना;
• भ्रूण के पोषण में सुधार।

अब, लेख को पढ़ने के बाद, हम एक छोटे मुर्गे या मुर्गी के कई कोशिकाओं से एक छोटे पक्षी तक के विकास के दौरान होने वाली प्रक्रियाओं की जटिलता का अंदाजा लगा सकते हैं। यह प्रक्रिया मानव बच्चे या, उदाहरण के लिए, गर्भ में बिल्ली के बच्चे के विकास से कम जटिल नहीं है, जहां निरंतर स्थितियों की गारंटी होती है।

दिन में एक अंडे में चूज़े का विकास पूरी तरह से बाहरी परिस्थितियों पर निर्भर करता है, जिसका प्रावधान ऊष्मायन है।

हम सभी को पीले, भूरे और अन्य फुलियों के सफल अंडे सेने की कामना करते हैं!

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यहां हमारे नियमित पाठक यूलिया अरेप्टेवा की एक तस्वीर है, जिसके नीचे मुर्गी का बच्चा पैदा हुआ था!

टिप्पणियों में आप मुर्गियों, मुर्गों और चूजों की अंडे देने की अपनी तस्वीरें जोड़ सकते हैं! या अन्य मुर्गे. हम उत्सुक हैं, आपके पास किस प्रकार का चिकन कॉप है?
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मनुष्यों और जानवरों को संक्रमित करने वाले कई वायरस चूजे के भ्रूण में अधिक या कम सीमा तक बढ़ सकते हैं। घने खोल की उपस्थिति भ्रूण को बाहरी वातावरण के सूक्ष्मजीवों से बचाती है।

चिकन भ्रूण में वायरस पैदा करने की विधि का उपयोग वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के साथ-साथ वायरल टीकों और नैदानिक ​​दवाओं के उत्पादन के लिए किया जाता है। लेकिन इस पद्धति के नुकसान हैं: 1) वायरस से संक्रमण के बाद भ्रूण में होने वाले रोग संबंधी परिवर्तनों को गतिशीलता में देखना असंभव है; 2) वायरस से संक्रमित भ्रूण को खोलते समय, अक्सर कोई दृश्यमान परिवर्तन नहीं पाया जाता है और अन्य वायरोलॉजिकल तरीकों (उदाहरण के लिए, हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया) का उपयोग करके भ्रूण के ऊतकों और तरल पदार्थों में वायरस की उपस्थिति का पता लगाना आवश्यक है; 3) मुर्गी के भ्रूण में संवर्धन की विधि सभी विषाणुओं के लिए उपयुक्त नहीं है। मौजूदा नुकसानों के बावजूद, यह विधि अपेक्षाकृत सरल, सुविधाजनक और सस्ती है और वायरोलॉजिकल अध्ययनों में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। ऑर्थोमेक्सोवायरस, हर्पीसवायरस और पॉक्सवायरस के साथ काम करते समय यह सबसे महत्वपूर्ण है।

1.3.1. मुर्गी के भ्रूण की संरचना

मुर्गी का भ्रूण एक कैलकेरियस खोल से ढका होता है - एक खोल, जिससे खोल की झिल्ली अंदर से सटी होती है। अंडे के कुंद सिरे पर यह द्विभाजित होता है और इसमें एक वायु स्थान होता है। शेल झिल्ली के नीचे एक कोरियोएलैंटोइक झिल्ली होती है; अंडे के कुंद सिरे पर यह शेल झिल्ली के अंदरूनी हिस्से के साथ चलती है, वायु स्थान को घेरती है; यह झिल्ली रक्त वाहिकाओं से समृद्ध होती है और भ्रूण के लिए श्वसन अंग के रूप में कार्य करती है। अंदर से इसके निकट एलांटोइक गुहा है, जो एक उत्सर्जन अंग है और भ्रूण को सूखने और चोट लगने से बचाता है। एलेंटोइक गुहा एम्नियन गुहा में स्थित भ्रूण को घेरती है, जो एमनियोटिक द्रव से भरी होती है। जर्दी कॉर्ड के माध्यम से, भ्रूण पोषक तत्वों के मुख्य स्रोत, जर्दी थैली से जुड़ा होता है।

विकासशील चिकन भ्रूण के शरीर में वायरस की सफल खेती के लिए, एक निश्चित तापमान शासन (36 0 -38 0), आर्द्रता (50-70%), साथ ही पर्याप्त वेंटिलेशन की आवश्यकता होती है। एक निश्चित उम्र के चिकन भ्रूण को संक्रमित किया जाता है, वायरस के प्रकार और संक्रमण की विधि के आधार पर, 6 से 13 दिनों तक ऊष्मायन किया जाता है। यह तैयार करना आवश्यक है: एक अंडे का स्टैंड, अल्कोहल और आयोडीन की शीशियाँ, बाँझ पैराफिन के साथ एक टेस्ट ट्यूब, कवर स्लिप, बाँझ कपास ऊन और धुंध के बैग, कागज में लिपटे बाँझ कंटेनर, बाँझ सीरिंज, सुई, चिमटी, विच्छेदन सुई। उपकरणों को शराब के एक गिलास में रखा जाता है, जहां वे पूरे काम के दौरान रहते हैं; प्रत्येक हेरफेर से पहले, उन्हें बर्नर की लौ में जलाकर अतिरिक्त रूप से निष्फल किया जाता है। काम से पहले हाथों को अच्छी तरह से धोया जाता है, धुंध वाला मास्क पहनने की सलाह दी जाती है।

ओवोस्कोप में सेते हुए अंडों की जांच करके व्यवहार्य भ्रूणों को काम के लिए चुना जाता है। एक व्यवहार्य भ्रूण गतिशील होता है, झिल्ली की रक्त वाहिकाएँ रक्त से भरी होती हैं। चयनित अंडों को कुंद सिरे पर (या अंडे के किनारे पर) पूरी तरह से कीटाणुरहित किया जाता है: खोल को अल्कोहल से पोंछा जाता है, आयोडीन से चिकना किया जाता है, अल्कोहल से दोबारा उपचारित किया जाता है और निकाल दिया जाता है।

1.3.2. कोरियोएलैंटोइक झिल्ली पर चूज़े के भ्रूण का संक्रमण

संक्रमण के लिए 10-12 दिन पुराने चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है। संक्रमण के मुख्य चरण:

1. अंडे को एक स्टैंड पर ऊर्ध्वाधर स्थिति में रखा जाता है ताकि एयर बैग शीर्ष पर रहे, और खोल अंडे के कुंद सिरे पर निष्फल हो।

2. एक विच्छेदन सुई का उपयोग करके वायु थैली के केंद्र के ऊपर खोल का एक पंचर बनाया जाता है।

3. कैंची के जबड़े को परिणामी छेद में डाला जाता है और खोल में लगभग 1.5 सेमी व्यास वाली एक खिड़की काट दी जाती है।

4. छेद के माध्यम से, सावधानी से एक सुई के साथ खोल के भीतरी पत्ते को फाड़ें और एक छोटे से क्षेत्र (0.5-1 सेमी 2) में छील लें।

5. कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को पाश्चर पिपेट या सिरिंज का उपयोग करके 0.1-0.2 मिलीलीटर वायरस युक्त सामग्री लगाने से संक्रमित किया जाता है।

6. खोल में खिड़की एक विशेष लोचदार फिल्म या एक बाँझ कवर ग्लास से ढकी हुई है और पिघले हुए पैराफिन से जुड़ी हुई है।

संक्रमित भ्रूण को थर्मोस्टेट में ऊर्ध्वाधर स्थिति में रखा जाता है और 2-3 दिनों के लिए ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद निम्नलिखित नियमों के अनुसार शव परीक्षण किया जाता है:

1. अंडे को एक स्टैंड पर रखा जाता है ताकि हवा का स्थान शीर्ष पर रहे, और उद्घाटन स्थल कीटाणुरहित हो।

2. बाँझ कैंची का उपयोग करके, वायु क्षेत्र की सीमा के साथ खोल को काट दें।

3. चिमटी का उपयोग करके, सीमा के साथ खोल को हटा दें। उजागर कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को खोल के किनारे से काट दिया जाता है। परिणामी छेद के माध्यम से, अंडे की पूरी सामग्री को एक कप या ट्रे में डालें।

4. खोल के अंदर बची हुई कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को चिमटी से सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है और खारा समाधान के साथ एक बाँझ कप में रखा जाता है। यहां वे इसे सीधा करते हैं और कप को गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर रखकर परिवर्तनों का अध्ययन करते हैं।

कोरियोएलैंटोइक झिल्ली से वायरस युक्त सामग्री प्राप्त करने के लिए, इसे कैंची से कुचल दिया जाना चाहिए और फिर क्वार्ट्ज ग्लास के साथ मोर्टार में नमकीन घोल मिलाकर पीसना चाहिए। परिणामी निलंबन को 2000 आरपीएम पर 10-15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और सतह पर तैरनेवाला का उपयोग वायरस युक्त सामग्री के रूप में किया जाता है।

चावल। 3. मुर्गी के भ्रूण का संक्रमण

1.3.3. एलैंटोइक गुहा में संक्रमण

संक्रमण के लिए 10-11 दिन की उम्र के भ्रूण लिए जाते हैं। संक्रमण के मुख्य चरण:

1. अंडे को कुंद सिरे के साथ एक स्टैंड पर रखा जाता है और खोल को हवा के स्थान पर कीटाणुरहित कर दिया जाता है।

2. एक विच्छेदन सुई का उपयोग करके कुंद सिरे के केंद्र में खोल का एक पंचर बनाया जाता है।

3. वायरस को पतला करने वाली सिरिंज की सुई को छेद में डाला जाता है। सुई को वायु थैली के स्तर से 2-3 मिमी नीचे ऊर्ध्वाधर दिशा में आगे बढ़ाया जाता है और फिर 0.1-0.2 मिलीलीटर सामग्री इंजेक्ट की जाती है।

4. खोल में छेद को पिघले हुए बाँझ पैराफिन से सील कर दिया जाता है।

संक्रमित भ्रूण को आमतौर पर 2 दिनों के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। खोलने से पहले, अंडों को रात भर 4 0 C पर रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। खोलना निम्नलिखित क्रम में किया जाता है:

1. अंडे को एक स्टैंड पर रखा जाता है ताकि एयर बैग सबसे ऊपर रहे, उसके ऊपर का खोल निष्फल हो।

2. कैंची का उपयोग करके, खोल को वायु क्षेत्र की सीमा से थोड़ा ऊपर काट दिया जाता है।

3. चिमटी से शेल झिल्ली को सावधानीपूर्वक हटा दें, जिसके बाद कोरियोएलैंटोइक झिल्ली को पाश्चर पिपेट से उस स्थान पर छेद दिया जाता है जहां कोई वाहिकाएं नहीं होती हैं, और एलेंटोइक द्रव को अंदर खींच लिया जाता है।

4. एलांटोइक द्रव को एक बाँझ परीक्षण ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, और इसका एक हिस्सा बैक्टीरियोलॉजिकल बाँझपन के परीक्षण के लिए शोरबा में डाला जाता है।