8 bakteriologinen tutkimusmenetelmä sen vaiheet. Bakteriologisen tutkimusmenetelmän vaiheet. Naiivien lymfosyyttien reseptorikompleksi

20. Bakteriologisen tutkimusmenetelmän ominaisuudet

Kulttuurinen (bakteriologinen) tutkimusmenetelmä - menetelmäsarja, jonka tarkoituksena on eristää ja tunnistaa puhtaita mikro-organismien (bakteerien) viljelmiä viljelemällä ravinnealustalla.

Puhdas viljelmä on kokoelma saman lajin mikro-organismeja. Useimmiten puhdas viljelmä saadaan valitsemalla ja viljelemällä eristetty pesäke (yksittäisen mikrobisolun jälkeläinen).

Menetelmän vaiheet:

1. Tutkimusaineiston kerääminen.

2. Puhtaan kulttuurin eristäminen ja sen tunnistaminen.

3. Johtopäätös.

Tutkimusaineiston kokoelma. Tutkittavan materiaalin tyyppi riippuu tutkimuksen tarkoituksesta (diagnoosi - potilaalta; epidemiologinen analyysi - ympäristöstä, ruoasta, potilaasta ja (tai) bakteerin kantajasta).

Puhtaan kulttuurin eristäminen. Sisältää 3 tai 4 vaihetta:

1. Materiaalin kylväminen (alustavan mikroskopian jälkeen) kuppiin, jossa on tiheää ravintoalustaa (mieluiten differentiaalidiagnostinen tai selektiivinen) eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi. Se valmistetaan useimmiten mekaanisella erotusmenetelmällä. Joissakin tapauksissa (esimerkiksi veri) materiaali esikylvetään nestemäiseen rikastusalustaan, minkä jälkeen se jatkoviljely maljalla agar-elatusaineella. Joskus materiaalin valikoiva käsittely suoritetaan ennen inokulaatiota (ottaen huomioon eristetyn mikro-organismin ominaisuudet; esimerkiksi käsittely hapolla tai emäksellä resistenttien bakteerien eristämiseksi). Viljellään 37°C:n lämpötilassa 18-24 tuntia. Erityyppisten bakteerien viljelyaika voi vaihdella.

2(3): a) pesäkkeiden tutkimus agarmaljalla (kulttuuriominaisuudet), tyypillisimpien valinta; b) näistä pesäkkeistä värjäysnäytteiden valmistus (Gramin tai muiden menetelmien mukaan); a) seulotaan loput tutkitusta pesäkkeestä keräysalustalla ja kasvatetaan termostaatissa optimilämpötilassa.

3(4). Akkumulaatioalustalla saadun viljelmän puhtauden tutkimus. Tämän kanssa

Tarkoituksena on valmistaa sively, värjäys (yleensä Gramin mukaan), mikroskooppinen tutkimus

morfologinen ja sävyinen homogeenisuus (eri näkökentillä).

4(5). Puhdas kulttuurin tunnistaminen.

Johtopäätös. Materiaalista eristetyn mikro-organismin tyyppi on osoitettu ominaisuuksien kokonaisuuden mukaan verrattuna vertailukantojen (tyypillisten) ominaisuuksiin.

Menetelmän arviointi:

edut: suhteellisen korkea herkkyys ja tarkkuus, kyky määrittää mikrobien lukumäärä testimateriaalissa sekä herkkyys antibiooteille; rajoitukset: suhteellisen keston, menetelmä on kallis.

21. Ravinneväliaineet aerobeille ja anaerobeille. Vaatimukset ravintoalustoille, luokitus.

Vaatimukset:

median on oltava ravitsevaa

täytyy olla tietty ph

on oltava isotoninen, ts. osmoottisen paineen väliaineessa on oltava sama kuin kennossa.

tulee olla kosteaa eikä liian juoksevaa

on oltava tietty redox-potentiaali

tulee olla steriiliä

on oltava yhtenäinen, ts. sisältävät vakiomääriä yksittäisiä ainesosia.

Ravinneväliaineet voidaan jakaa:

A) Alkuperä

1) luonnollinen - luonnollinen ruoka (liha, maito, perunat);

2) keinotekoinen - erityisesti valmistettu mikrobien kasvattamiseen: - luonnollisista tuotteista (lihavesi, liha-peptoniliemi (MBB), liha-peptoniliemi (MBB), liha-peptoni-agar (MPA), - koostumus ei ole vakio; - synteettiset ravintoaineet - tiukasti liuokset tietyt määrät suoloja, aminohappoja, typpipitoisia emäksiä, vitamiineja tislatussa vedessä - niiden koostumus on vakio, niitä käytetään mikro-organismien ja soluviljelmien kasvattamiseen rokotteiden, immuuniseerumien ja antibioottien tuotannossa;

B) Ajanvarauksella:

1) yleiskäyttöinen (MPB, MPA) - useimmat mikrobit kasvavat niissä;

2) elektiivinen - edistävät selektiivisesti yhden tyyppisten mikrobien kasvua seoksesta (esimerkiksi keltuainen-suola-agar stafylokokeille);

3) differentiaalidiagnostiikka - mahdollistaa yhden mikrobityypin erottamisen ympäristön ulkonäön perusteella muista (esimerkiksi Endo-, Levin-mediat suoliston mikrobiryhmälle).

Lisäksi riippuen käyttötarkoituksia Puhtaiden viljelmien eristyskaaviossa seuraavat väliaineet voidaan erottaa tarkoituksen mukaan:

1) rikastaminen - estävät patogeeniin liittyvien mikrobien kasvua;

2) saada eristettyjä pesäkkeitä;

3) puhtaan kulttuurin kertyminen;

B) Johdonmukaisuus:

1) neste;

2) puolineste (lisätty agar-agaria pitoisuutena 0,5-0,7 %);

3) tiheä - yli 1 %.

Bakteerien tutkimuksella on suuri käytännön merkitys ihmisille. Tähän mennessä on löydetty suuri määrä prokaryootteja, jotka eroavat toisistaan ​​patogeenisyyden, levinneisyysalueen, muodon, koon, lippujen lukumäärän ja muiden parametrien suhteen. Tämän kannan yksityiskohtaiseen tutkimiseen käytetään bakteriologista tutkimusmenetelmää.

Mitä solumenetelmiä on olemassa?

Sen määrittämiseksi, ovatko bakteerit patogeenisiä, viljelmää tutkitaan eri tavoin. Heidän keskuudessaan:

1. Bakterioskooppinen menetelmä.

2. Bakteriologinen menetelmä.

3. Biologinen menetelmä.

Bakterioskooppinen ja bakteriologinen perustuvat suoraan työhön prokaryoottisten solujen kanssa, kun tarvitaan biologista analyysiä tällaisten solujen vaikutuksen tutkimiseksi koe-eläinten elävään organismiin. Tiettyjen taudin oireiden ilmenemisasteen mukaan tiedemies voi tehdä johtopäätöksen taudin olemassaolosta tai puuttumisesta patogeeniset bakteerit näytteessä sekä levittää niitä luonnollisesti eläimen kehossa saadakseen niiden viljelmän ja käyttääkseen muissa teoksissa.

Bakteriologinen tutkimusmenetelmä eroaa bakterioskooppisesta. Ensimmäisessä analysoinnissa käytetään erityisesti valmistettua elävien prokaryoottien viljelmää, kun taas toisessa työstetään kuolleiden tai elävien solujen kanssa lasilevyllä.

Bakteriologisen tutkimusmenetelmän vaiheet. Mikrobiologia

Bakteeriviljelmän ominaisuuksien tutkimisen periaate voi olla hyödyllinen sekä mikrobiologeille, jotka asettavat tavoitteeksi prokaryoottisten solujen tutkimuksen, että laboratorioavustajille, joiden tehtävänä on määrittää bakteerien patogeenisyys tai ei-patogeenisyys ja sitten diagnosoida potilas.

Bakteerien tutkimuksen menetelmä on jaettu kolmeen vaiheeseen:

1. Bakteerien eristäminen alkuperäisestä näytteestä.

2. Bakteerien kylvö ja niiden ominaisuuksien kasvatus.

Ensimmäinen taso

Näyte eli näyte otetaan alustan vapaalta pinnalta tai potilaalta. Siten saamme "cocktailin" monenlaisista bakteereista, jotka on kylvettävä ravintoalustaan. Joskus on mahdollista eristää välittömästi tarvittavat bakteerit, kun tiedetään niiden leviämispisteet kehossa.

Kahden tai kolmen päivän kuluttua halutut pesäkkeet valitaan ja kylvetään petrimaljoille kiinteälle alustalle steriilin silmukan avulla. Monet laboratoriot työskentelevät koeputkien kanssa, jotka voivat sisältää kiinteitä tai nestemäisiä ravintoaineita. Näin toteutetaan mikrobiologian bakteriologinen tutkimusmenetelmä.

Toinen vaihe

Kun yksittäiset bakteeripesäkkeet on saatu, suoritetaan suora makro- ja mikroanalyysi. Kaikki pesäkkeiden parametrit mitataan, kunkin väri ja muoto määritetään. Ei ole harvinaista, että pesäkkeet lasketaan petrimaljalle ja sitten lähtöaineeseen. Tämä on tärkeää patogeenisten bakteerien analysoinnissa, joiden lukumäärä riippuu taudin asteesta.

Bakteriologinen tutkimusmenetelmä, jonka 2. vaihe koostuu yksittäisten mikro-organismien pesäkkeiden tutkimisesta, voidaan yhdistää biologiseen bakteerien analysointimenetelmään. Toinen työskentelyn tavoite tässä vaiheessa on lisätä lähdemateriaalin määrää. Tämä voidaan tehdä ravintoalustalla tai voit suorittaa kokeen in vivo elävillä koe-organismeilla. Patogeeniset bakteerit lisääntyvät, ja sen seurauksena veri sisältää miljoonia prokaryoottisoluja. Otetusta verestä on helppo valmistaa tarvittava bakteerien työstömateriaali.

Kolmas vaihe

Tutkimuksen tärkein osa on bakteeriviljelmän morfologisten, biokemiallisten, toksikogeenisten ja antigeenisten ominaisuuksien määrittäminen. Työ suoritetaan esipuhdistetuilla viljelmillä ravintoalustalla sekä valmisteilla (usein värjätyillä) mikroskoopilla.

Bakteriologinen tutkimusmenetelmä sallii patogeenisten tai opportunististen bakteerien kuulumisen yhteen tai toiseen systemaattiseen ryhmään sekä niiden lääkkeiden vastustuskyvyn määrittämiseksi. Vaihe 3 - antibiootit, eli bakteerisolujen käyttäytymisen analyysi ympäristön lääkepitoisuuden olosuhteissa.

Viljelmän antibioottiresistenssin tutkimuksella on suuri käytännön merkitys, kun jollekin potilaalle on määrättävä tarpeelliset ja mikä tärkeintä tehokkaat lääkkeet. Tässä bakteriologinen tutkimusmenetelmä voi auttaa.

Mikä on ravintoalusta?

Kehitystä ja lisääntymistä varten bakteerien on oltava valmiissa ravintoalustassa. Koostumuksen mukaan ne voivat olla nestemäisiä tai kiinteitä, ja alkuperän mukaan - kasvi- tai eläinperäisiä.

Ravinnealustojen perusvaatimukset:

1. Steriiliys.

2. Suurin läpinäkyvyys.

3. Optimaaliset happamuuden, veden aktiivisuuden ja muiden biologisten arvojen indikaattorit.

Erillisten pesäkkeiden hankkiminen

1. Drygalsky-menetelmä. Se koostuu siitä, että bakteerisilmukalle levitetään sively erilaisia ​​tyyppejä mikro-organismeja. Tämä silmukka johdetaan ensimmäistä petrimaljaa pitkin ravintoalustalla. Lisäksi silmukkaa muuttamatta jäännösmateriaalin menetelmä suoritetaan toiselle ja kolmannelle petrimaljalle. Siten pesäkkeen viimeisissä näytteissä bakteereita ei kylvetä liian tiheästi, mikä yksinkertaistaa kykyä löytää työhön tarvittavat bakteerit.

2. Kochin menetelmä. Se käyttää koeputkia, joissa on sulaa ravintoalustaa. Sinne asetetaan silmukka tai pipetti, jossa on bakteereja, minkä jälkeen koeputken sisältö kaadetaan erityiselle levylle. Agar (tai gelatiini) jähmettyy jonkin ajan kuluttua, ja halutut solupesäkkeet on helppo löytää sen paksuudesta. On tärkeää laimentaa bakteeriseos koeputkissa ennen työn aloittamista, jotta mikro-organismien pitoisuus ei ole liian korkea.

Vaiheet, jotka perustuvat halutun bakteeriviljelmän eristämiseen, eivät tule toimeen ilman näitä kahta menetelmää eristettyjen pesäkkeiden löytämiseksi.

Antibioottiogrammi

Visuaalisesti bakteerien reaktio lääkkeisiin voidaan nähdä kahdella käytännön tavalla:

1. Paperilevyjen menetelmä.

2. Bakteerien ja antibiootin laimennus nestemäiseen väliaineeseen.

Paperikiekkomenetelmä vaatii mikro-organismien viljelmän, jotka on kasvatettu kiinteällä ravintoalustalla. Laita tällaiselle alustalle muutama pyöreä paperi, joka on kastettu antibiooteihin. Jos lääke selviää onnistuneesti bakteerisolujen neutraloinnista, tällaisen hoidon jälkeen on alue, jossa ei ole pesäkkeitä. Jos reaktio antibiootille on negatiivinen, bakteerit selviävät.

Jos käytät nestemäistä ravintoalustaa, valmista ensin useita koeputkia bakteeriviljelmällä eri asteet jalostukseen. Näihin koeputkiin lisätään antibiootteja ja aineen ja mikro-organismien välistä vuorovaikutusta tarkkaillaan päivän aikana. Lopulta saadaan korkealaatuinen antibiogrammi, jonka mukaan voidaan arvioida lääkkeen tehokkuutta tietylle viljelmälle.

Analyysin päätehtävät

Tässä on lueteltu bakteriologisen tutkimusmenetelmän tavoitteet ja vaiheet.

1. Hanki lähtöaine, jota käytetään bakteeripesäkkeiden eristämiseen. Se voi olla minkä tahansa esineen, limakalvon tai ihmisen elimen ontelon pinnasta otettu sively, verikoe.

2. kiinteällä ravintoalustalla. 24-48 tunnin kuluttua petrimaljasta löytyy erityyppisten bakteerien pesäkkeitä. Valitsemme haluamasi morfologisten ja/tai biokemiallisten kriteerien mukaan ja teemme sen kanssa jatkotyötä.

3. Tuloksena olevan viljelmän lisääntyminen. Bakteriologinen tutkimusmenetelmä voi perustua mekaaniseen tai biologiseen menetelmään lisätä bakteeriviljelmien määrää. Ensimmäisessä tapauksessa työ suoritetaan kiinteillä tai nestemäisillä ravintoaineilla, joilla bakteerit lisääntyvät termostaatissa ja muodostavat uusia pesäkkeitä. Biologinen menetelmä vaatii luonnollisia olosuhteita bakteerien määrän lisäämiseksi, joten tässä koe-eläin tarttuu mikro-organismeihin. Muutaman päivän kuluttua monia prokaryootteja voidaan löytää verinäytteestä tai näytteestä.

4. Työskentele puhdistetun viljelmän kanssa. Bakteerien systemaattisen sijainnin ja patogeeneihin kuulumisen määrittämiseksi on tarpeen suorittaa perusteellinen soluanalyysi morfologisten ja biokemiallisten ominaisuuksien mukaan. Patogeenisiä mikro-organismiryhmiä tutkittaessa on tärkeää tietää, kuinka tehokas antibioottien vaikutus on.

Se oli yleispiirteet, yleiset piirteet bakteriologinen tutkimusmenetelmä.

Analyysin ominaisuudet

Bakteriologisen tutkimuksen pääsääntö on maksimaalinen steriiliys. Jos työskentelet koeputkien kanssa, bakteeriviljelmät ja alaviljelmät tulisi suorittaa vain kuumennetun alkoholilampun päällä.

Bakteriologisen tutkimusmenetelmän kaikki vaiheet edellyttävät erikoissilmukan tai Pasteur-pipetin käyttöä. Molemmat työkalut on esikäsiteltävä alkoholilampun liekissä. Mitä tulee Pasteur-pipettiin, niin ennen lämpösterilointia on tarpeen katkaista pipetin kärki pinseteillä.

Bakteerien kylvötekniikalla on myös omat ominaisuutensa. Ensinnäkin, kun siirrostetaan kiinteälle alustalle, bakteerisilmukka johdetaan agarin pinnan yli. Silmukan pinnalla pitäisi tietysti olla jo näyte mikro-organismeista. Myös siirrostusta harjoitetaan, jolloin silmukan tai pipetin tulee ulottua petrimaljan pohjalle.

Nestemäisten väliaineiden kanssa työskennellessä käytetään koeputkia. Tässä on tärkeää varmistaa, että nesteet eivät kosketa laboratoriolasien tai korkkien reunoja eivätkä käytetyt instrumentit (pipetti, silmukka) koske vieraisiin esineisiin ja pintoihin.

Biologisen tutkimusmenetelmän arvo

Bakteerinäyteanalyysillä on omat käytännön sovelluksensa. Ensinnäkin bakteriologista tutkimusmenetelmää voidaan käyttää lääketieteessä. On esimerkiksi tarpeen tutkia potilaan mikroflooraa oikean diagnoosin määrittämiseksi sekä oikean hoidon kehittämiseksi. Tässä auttaa antibiogrammi, joka näyttää lääkkeiden aktiivisuuden taudinaiheuttajaa vastaan.

Bakteerianalyysiä käytetään laboratoriossa vaarallisten sairauksien, kuten tuberkuloosin, uusiutuvan kuumeen tai tippuriin, havaitsemiseen. Sitä käytetään myös risojen, elinten onteloiden bakteerikoostumuksen tutkimiseen.

Bakteriologisella tutkimusmenetelmällä voidaan määrittää ympäristön saastuminen. Esineen pinnasta saadun sivelynäytteen määrällistä ja laadullista koostumusta koskevien tietojen mukaan määritetään tämän ympäristön mikro-organismien populaatioaste.

TUNNIN TARKOITUS: tietää mikro-organismien viljelyn periaatteet, ravintoalustat, niiden luokittelu; mikrobiologiassa ja lääketieteessä käytetyt sterilointi- ja desinfiointimenetelmät; bakteriologisen diagnostisen menetelmän vaiheet tarttuvat taudit.

pystyä käyttää laitteita bakteerien (aerobit ja anaerobit) viljelyyn, valita keinot, sterilointi- ja desinfiointitapa tiettyjen tehtävien mukaisesti, suorittaa tartuntatautien diagnosointiin bakteriologisen menetelmän 1. vaihe (testimateriaalin siirrostus tiheään ja nestemäiseen). ravintoalustat aerobisten mikro-organismien puhtaiden viljelmien eristämiseksi).

1. Kysymyksiä itseopiskeluun:

1. Ravinnealustojen koostumus ja vaatimukset

2. Viljelyalustojen luokitus

3. Aseptinen ja antiseptinen

4. Desinfiointi, menetelmät ja desinfioinnin tehokkuuden valvonta

5. Sterilointi, menetelmät, laitteet ja sterilointitavat

6. Menetelmät steriloinnin tehokkuuden määrittämiseksi

7. Laji, kanta, pesäke, mikro-organismien puhdasviljelmä

8. Menetelmät mikro-organismien puhtaiden viljelmien eristämiseksi

9. Bakteriologinen menetelmä tartuntatautien diagnosoimiseksi. Bakteriologisen menetelmän 1. vaiheen tarkoitus ja järjestys aerobien eristämiseksi

10. Tekniikka mikro-organismien siirrostamiseksi nestemäisille ja kiinteille ravintoalustoille

11. Anaerobisten mikro-organismien viljelyn ominaisuudet. Anaerobisten bakteerien viljelyyn käytettävät laitteet ja laitteet

2. Turvakysymykset:

1) Kirjoita vaatimukset ravintoalustoille

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2) Kirjoita ravinnealustojen luokitus

a) sakeuden mukaan (osoita esimerkein agar-agarin pitoisuus): _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) kirjoittaja aiottuun tarkoitukseen(määritä, anna esimerkkejä)

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

3) Kirjoita sterilointimenetelmät

a) käyttämällä korkeita lämpötiloja ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) ilman korkeita lämpötiloja ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4) Luettele sterilointilaitteet ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5) Kirjoita muistikirjaan a) menetelmät sterilointiohjelman hallintaan

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

b) menetelmät ravintoalustojen steriiliyden seurantaan ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

c) menetelmät instrumenttien, sidosten, ommelmateriaalin jne. steriiliyden valvomiseksi. ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6) Luettele kaikki aerobien viljelymenetelmät

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

7) Luettele kaikki anaeroobien viljelymenetelmät

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8) Tutustu bakteriologisen diagnostisen menetelmän kaavioon, nimeä menetelmän vaiheet

Kirjoita bakteriologisen tutkimusmenetelmän tarkoitus ja kaavio

BAKTERIOLOGISEN MENETELMÄN TARKOITUS

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BAKTERIOLOGISEN MENETELMÄN kaavio

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Tutustu ravintoalustoihin ja täytä taulukko "Ravintoalustat".

Täytä taulukko "Steriloinnin perusmenetelmät"

pohjateksti

Ravinnealustojen koostumus ja vaatimukset

Ravintoalustoja tarvitaan puhtaiden mikro-organismiviljelmien saamiseksi, niiden morfologian ja fysiologian piirteiden tutkimiseen sekä mikro-organismien säilyttämiseen puhdasviljelmien muodossa laboratorio- ja tuotanto-olosuhteissa.

Ravintoalustan on täytettävä seuraavat vaatimukset:

1. Ravintoarvo (täyteläisyys) - mikrobien elämään välttämättömien tekijöiden sisältö - hiilen, typen, rikin lähteet, energialähteet, välttämättömät epäorgaaniset ionit muodossa, joka on mikro-organismien käytettävissä.

2. 0,85 % NaCl:n luoma isotonisuus (ravintoalustassa olevien suolojen pitoisuuden tulee vastata niiden pitoisuutta mikrobisolussa).

3. Useiden biokemiallisten parametrien optimiarvot: vetyionien pitoisuus (pH-alue 4,5-8,5, yleensä 7,2-7,4), redox-potentiaali (Eh anaerobeille - alhainen 0,0120-0,060 V, aerobeille - korkea yli 0,080 V), osmoottinen paine.

4. Pidä riittävä kosteus (vähintään 60 % tiheässä väliaineessa), koska mikrobit ruokkivat diffuusio- ja osmoosilakeja.

5. Tietty viskositeetti (optimaalisin aineiden diffuusiolle).

6. Läpinäkyvyys bakteerien kasvun visualisoimiseksi.

7. Steriiliys.

Viljelyalustan komponentit

Proteiinit ovat mikro-organismien typen lähde, mutta useimmat mikrobit eivät pysty ottamaan omaa natiiviproteiinia, joten käytetään happaman ja entsymaattisen proteiinin pilkkomisen tuotteita: peptoni, kaseiini. Keinotekoisen ravintoalustan alkukomponentit ovat lihavesi, hapanta ja entsymaattista kaseiinin hydrolysaattia, peptonia ja emäkseen lisätään myös natriumkloridia. Lihavesi sisältää kivennäisaineita, hiilihydraatteja, vitamiineja. Ruokahappokaseiini on meijeriteollisuuden jätettä, sisältää täydellisen sarjan aminohappoja ja sille on ominaista korkea ravintoarvo. Peptoni on proteiinien epätäydellisen pilkkomisen tuote, joka saadaan liha- tai kalatuotteiden tai maitokeiinin tuotannossa syntyvien jätetuotteiden entsymaattisella tai happamalla hydrolyysillä. Sisältää albumoosia, peptoneja ja aminohappopolypeptidejä pieninä määrinä, niiden koostumus riippuu proteiinien pilkkoutumissyvyydestä. Peptoni on vaaleankeltainen jauhe, liukenee veteen, ei koaguloitu kuumennettaessa. Sitä käytetään typen ja hiilen lähteenä.

Tiheät ravintoaineet valmistetaan nestemäisistä lisäämällä tiivisteainetta. Agar-agaria käytetään yleensä tiivisteenä. Agar-agar - merilevästä saatu tuote, kellertävä jauhe tai levyt, sisältää korkean molekyylipainon polysakkarideja, useimmat mikro-organismit eivät hajoa sitä, ei tuhoudu autoklaavissa, ravintoarvo elatusaine ei muutu, ei estä mikrobien kasvua. Se pystyy muodostamaan geelejä vedessä, sulaen 100 °C:ssa ja tiivistyen 45 °C:ssa ja sen alapuolella, mikro-organismit eivät käytä sitä ravinnealustana. Useat sulatus- ja jähmettymisjaksot eivät vaikuta agarin kykyyn muodostaa geeliä, joten agar-elatusaine voidaan steriloida useita kertoja.

Myös ravintoaineiden koostumus sisältää verta, seerumia, epäorgaanisia suoloja. Kaikki ravintoalustat sisältävät pääsääntöisesti 0,5 % natriumkloridia, mikä vastaa ympäristön isoosmoottisia olosuhteita, jotka ovat optimaaliset mikrobien elämälle. Mineraalielementtien tehtävänä mikrobien aineenvaihdunnassa on pääasiassa eri entsyymien aktivointi. Lisäksi epäorgaaniset ionit (pääasiassa Na + ja K +) osallistuvat aineiden kuljettamiseen solukalvojen läpi, proteiinisynteesin säätelyyn.

Elvyttävät aineet. Pelkistäviä aineita lisätään anaerobisten mikro-organismien viljelyyn tarkoitettuihin väliaineisiin redox-potentiaalin (Eh) alentamiseksi ja sen tasapainottamiseksi optimaaliselle tasolle. Eh on mitta liuoksen kyvystä luovuttaa tai vastaanottaa elektroneja. Anaerobeja viljeltäessä käytetään yleensä pelkistysaineina natriumtioglykolaattia (0,1 %), kysteiiniä (0,1 %), askorbiinihappoa (0,1 %).

Hiilihydraatit, moniarvoiset alkoholit, indikaattorit. Hiilihydraatit ovat paras hiilen lähde useimmille heterotrofisille mikro-organismeille. Ne ovat osa differentiaalidiagnostisia väliaineita, jotka on suunniteltu määrittämään mikrobien biokemialliset ominaisuudet.

Ravintoalustojen koostumus sisältää hiilihydraattien ja moniarvoisten alkoholien lisäksi erilaisia indikaattoreita, enimmäkseen happo-emäs. Väliaineen värin muutos mikro-organismien siirrostuksen aikana osoittaa hapon tai alkalin muodostumista, kun entsymaattinen aktiivisuus mikro-organismeja. Indikaattorina käytetään yleensä neutraalia punaista, bromotymolinsinistä, Kongonpunaista, rosolihapon ja vesisinisen seosta (BP), Andrede-indikaattoria.

Väriaineet. Väriaineiden kykyä muuttua helposti ja palautuvasti värillisestä muotoon pelkistetyksi (värittömäksi) käytetään laajasti bakteriologisessa käytännössä, erityisesti laktoosia hajottavien bakteerien erottamiseksi laktoosinegatiivisista. Tämän prosessin seurauksena laktoosipositiiviset bakteerit muodostavat värillisiä pesäkkeitä alustalle, kun taas laktoosinegatiiviset ovat värittömiä. Yleisimmin käytetyt ravintoaineisiin kuuluvat väriaineet ovat emäksinen fuksiini, metyleenisini ja eosiini.

Inhibiittorit. Patogeenisten bakteerien esiintymistä tutkittaessa on tarpeen tukahduttaa mukana olevan mikroflooran kasvu. Tätä tarkoitusta varten käytetään erilaisia ​​inhibiittoreita. Gram-negatiivisten mikro-organismien estäjinä alustan koostumus sisältää natrium- ja kaliumtetrationaattia, kaliumtelluriittia, talliumasetaattia, talliumsulfaattia, natriumseleniittiä. Gram-positiivisten mikrobien kasvun estämiseksi käytetään aniliinivärejä: briljanttivihreä, kristallivioletti, etyylivioletti, aniliinisininen. Sappi ja sappisuolat ovat osa selektiivistä alustaa patogeenisten enterobakteerien kasvattamiseksi. Sappien alkalisen hydrolyysin tuloksena saatu sappihappojen seos on osa Ploskirevin väliainetta. Ulkomailla osana selektiivisiä väliaineita käytetään yksittäisten sappihappojen suoloja, pääasiassa natriumdeoksikolaattia.

Kuivat ravintoaineet. Ravinnealustojen valmistus on yksi bakteriologisen laboratorion työn kriittisimmistä alueista. Tältä osin bioteollisuus tuottaa vakiomuotoisia, purkitettuja, kuivia ravintoalustoja erilaisiin tarkoituksiin mikro-organismien viljelyyn. Ne ovat hygroskooppisia jauheita, joiden kosteuspitoisuus on jopa 10 %. Valmistele materiaali tarran ohjeiden mukaan. Koostumuksen pysyvyys, alustan standardisointi, työn yksinkertaisuus ja mukavuus, helppo kuljettaa ja varastoida ovat kuivien ravintoalustojen suuria etuja. Kun sopiva pH on määritetty, väliaine keitetään, suodatetaan, kirkastetaan, kaadetaan pulloihin, koeputkiin ja steriloidaan. On otettava huomioon, että steriloinnin jälkeen ympäristö muuttuu happamammaksi.

Laji - joukko mikro-organismeja, joilla on yhteinen evoluutioperä, läheinen genotyyppi (korkea geneettinen homologia, yleensä yli 60%) ja lähimmät mahdolliset fenotyyppiset ominaisuudet. Kanta - tietyn tyyppisen bakteerin eristetty viljelmä ("tietyn lajin tietty näyte") Pesäke - silmällä nähtävissä eristetty rakenne, joka on muodostunut m / o:n lisääntymisen ja kertymisen seurauksena tietyn inkubointiajan ja yhdestä emosolusta tai useista identtisistä soluista.

menetelmät laboratoriodiagnostiikkaØ Mikroskooppinen - m / o:n havaitseminen suoraan kliinisestä materiaalista Ø Bakteriologinen - m / o:n havaitseminen kylvömateriaalilla ravintoalustaan ​​Ø Biologinen - m / o:n eristäminen aiemmin tartunnan saaneesta koe-eläimestä Ø Serologinen - spesifisten immuunivasta-aineiden havaitseminen potilaan veriseerumi Ø Allerginen - ihoallergisten testien asettaminen (spesifiset - tuberkuloosi, tularemia jne.)

Ø Kulttuuri - mikro-organismin kasvun luonne ravintoalustalla. Ø Biokemiallinen - kyky fermentoida erilaisia ​​substraatteja (hiilihydraatteja, proteiineja ja aminohappoja jne.), muodostaa erilaisia ​​biokemiallisia tuotteita elämänprosessissa erilaisten entsyymijärjestelmien ja aineenvaihdunnan ominaisuuksien vuoksi. Ø Antigeeninen - riippuu pääasiassa kemiallinen koostumus ja soluseinän rakenne, flagellan esiintyminen, kapselit, tunnistetaan makro-organismin (isäntä) kyvystä tuottaa vasta-aineita ja muita immuunivasteen muotoja, havaitaan immunologisissa reaktioissa.

Fysiologiset menetelmät hiilihydraatti (autotrofit, heterotrofit), typpi (aminoautotrofit, aminoheterotrofit) ja muut ravitsemustyypit, hengitystyyppi (aerobit, mikroaerofiilit, fakultatiiviset anaerobit, tiukat anaerobit). Ø Liikkuvuus ja liiketyypit. Ø Mahdollisuus itiöintiin, riidan luonne. Ø Herkkyys bakteriofageille, faagityypitys. Ø Soluseinien kemiallinen koostumus - emäksiset sokerit ja aminohapot, lipidi- ja rasvahappokoostumus. Ø Proteiinispektri (polypeptidiprofiili). Ø Ø Herkkyys antibiooteille ja muille lääkkeet. Ø Genotyyppi (genosysteemin menetelmien käyttö).

Bakteriologinen menetelmä sisältää kliinisen materiaalin siirrostuksen keinotekoisille ravintoalustoille, puhtaiden mikrobiviljelmien eristämisen ja niiden myöhemmän tunnistamisen.

Bakteriologisia menetelmiä käytetään: tartuntatautien diagnosoinnissa; Ш Bakteerien kuljetuksen ehkäisevien tarkastusten aikana suoliston ryhmä, kurkkumätäbacillus jne.; III ympäristökohteiden (vesi, ilma, maaperä, ruoka jne.) saniteetti- ja hygieniatilan tutkimuksessa ja niiden tutkimuksessa epidemiologisten indikaatioiden mukaan patogeenisten mikro-organismien aiheuttaman infektion varalta. W

Fysiologiset ominaisuudet Suhde lämpötilaan Hengitys Ravitsemus Entsyymit Proteiini- ja aminohappoaineenvaihdunta (gelatinaasi, kollagenaasi, dekarboksylaasit, ureaasi) Muut entsyymit (hemolysiinit, lipaasit, lesitinaasi, DNaasi) Metaboliset lopputuotteet (kromatografia) AMP-resistenssi/herkkyys

Alkuaineet, jotka ovat ensisijaisesti välttämättömiä mikro-organismien kasvulle ja jotka on sisällytettävä ravintoalustan koostumukseen, määritetään mikrobisolujen kemiallisesta koostumuksesta, joka on periaatteessa sama kaikissa elävissä organismeissa. Suurin osa solujen kokonaismassasta on vesi (80 - 90 %) ja vain 10 - 20 % on kuiva-ainetta. Kuiva-ainepitoisuuden mukaan erotetaan makro- ja mikroelementit. Edelliset sisältävät: hiili, happi, typpi, vety, rikki, fosfori, kalium, natrium, magnesium, kalsium, rauta. Hivenaineita ovat mangaani, molybdeeni, sinkki, kupari, koboltti jne., joista suurinta osaa tarvitaan pieniä määriä. Tästä syystä mikroelementtejä ei lisätä monien väliaineiden koostumukseen, koska niiden tarve voidaan tyydyttää makroelementtien suolojen epäpuhtauksilla. Lisäksi kaikki mikro-organismit eivät tarvitse hivenaineita. neljätoista

Toisin kuin eläin- ja kasviorganismit, mikro-organismeille on ominaista monenlaiset ravitsemustyypit, jotka erotetaan kolmen pääkriteerin mukaan - hiilen lähde, energialähde ja elektronin (vedyn) luovuttaja. Hiilenlähteen luonteesta riippuen kaikki mikro-organismit jaetaan kahteen suureen ryhmään - autotrofeihin, jotka käyttävät hiilidioksidia, ja heterotrofeihin, jotka vaativat valmiita orgaanisia aineita kasvua ja lisääntymistä varten. Energialähteiden ja elektronin luovuttajien monimuotoisuus huomioon ottaen nämä ryhmät on jaettu alaryhmiin, minkä seurauksena mikro-organismeista on tunnistettu 8 ravitsemustyyppiä. Jokainen ravitsemustyyppi on ominaista tietyille mikro-organismeille ja heijastaa niiden fysiologisia ja biokemiallisia ominaisuuksia. Useimmilla mikro-organismeilla, mukaan lukien patogeenit, on sellainen ravinto, jossa orgaaniset aineet ovat hiilen, energian ja elektronien luovuttajia. 16

Mikro-organismien tarpeet orgaanisissa hiilen lähteissä ovat hyvin erilaisia. Jotkut lajit ovat "kaikkisyöjiä" ja voivat kuluttaa erilaisia ​​kemiallisia aineita, toiset ovat valikoivampia ja käyttävät vain osaa niistä. Jokaiselle mikro-organismityypille ominaisen orgaanisten yhdisteiden joukon spesifisyys otetaan huomioon luotaessa elektiivisiä ja differentiaalidiagnostisia väliaineita, joita käytetään laajalti sanitaarisessa ja kliinisessä mikrobiologiassa tiettyjen mikro-organismiryhmien nopeaan tunnistamiseen. Hiiltä sisältävää substraattia valittaessa tulee ottaa huomioon, että orgaanisten aineiden sulavuus riippuu suurelta osin myös niiden ominaisuuksista – liukoisuudesta, hiiliatomien hapettumisasteesta, tilakonfiguraatiosta ja molekyylien polymerisaatiosta. Yleensä mikro-organismit assimiloivat tiettyjä optisia isomeerejä - D-sarjaan kuuluvia sokereita, aminohappoja - L-sarjaan. Hyvin harvoissa mikro-organismeissa on entsyymejä, jotka muuttavat yhden optisen isomeerin toiseksi. Biopolymeerejä, kuten tärkkelystä, polysakkarideja, proteiineja, rasvoja, voivat käyttää vain mikro-organismit, jotka syntetisoivat tiettyjä hydrolyyttisiä entsyymejä - amylaaseja, proteaaseja, lipaaseja eksoentsyymien muodossa eli solun ympäristöön erittämiä entsyymejä. 17

Suurimmalle osalle heterotrofisista mikro-organismeista hiilihydraatit, aminohapot, proteiinit ja orgaaniset hapot ovat tärkeimmät helposti saatavilla olevat hiilen ja energian lähteet. Luonnehdittaessa mikro-organismien tarvetta orgaanisten hiilen lähteiden suhteen on huomattava, että korkein heterotrofiaaste on luonnostaan ​​patogeenisille mikro-organismeille, jotka ovat sopeutuneet elämään ihmis- ja eläinorganismeissa. Niiden viljelyyn tarkoitettujen ravintoaineiden koostumus on erityisen monimutkainen. Ne sisältävät proteiineja tai niiden matalan hydrolyysin tuotteita (peptidejä), vitamiineja, nukleiinihappofragmentteja jne. Tällaisten väliaineiden valmistukseen käytetään erilaisia ​​hydrolysaatteja ja lihauutteita, verta tai seerumia, hiiva- ja kasviuutteita ja paljon muuta. käytetty. Nämä alustat soveltuvat monenlaisten lajien viljelyyn ja ovat erityisen hyödyllisiä tapauksissa, joissa mikrobin kasvutekijöiden tarve on tuntematon tai se tarvitsee useita kasvutekijöitä samanaikaisesti. Tällaisten väliaineiden haittana on niiden standardoinnin saavuttamisen vaikeus tai mahdottomuus johtuen raaka-aineen koostumuksen ja ominaisuuksien epästandardista ja rajoitetusta ohjattavuudesta. kahdeksantoista

Mikro-organismien rakentava aineenvaihdunta on yleensä suunnattu neljän päätyypin biopolymeerien - proteiinien, nukleiinihappojen, polysakkaridien ja lipidien - synteesiin. Proteiinien ja nukleiinihappojen biosynteesissä tärkein alkuaine hiilen lisäksi on typpi. Useimmille mikro-organismeille saavutettavin typen lähde on ammoniumionit, joita ne voivat saada orgaanisten ja epäorgaanisten happojen, aminohappojen, proteiinien ja muiden typpeä sisältävien aineiden suoloista. Suurelle bakteerijoukolle, pääasiassa patogeeneille, typpeä sisältävät orgaaniset aineet ovat välttämättömiä typen lähteinä. Jos aminohapot ovat tällainen typen lähde, mikro-organismit voivat käyttää niitä suoraan proteiinien synteesiin tai tehdä alustavasti niiden deaminaatiota, ja tällöin vapautuvia aminoryhmiä voidaan käyttää omien aminohappojensa, proteiinien, synteesiin. 19

Tietyt mikro-organismit tarvitsevat kuitenkin kasvuakseen tiettyjä aminohappoja, joita ne eivät pysty syntetisoimaan itse. Mikro-organismeja, jotka tarvitsevat tällaisia ​​"välttämättömiä" aminohappoja, ovat Staphylococcus aureus, hemolyyttinen streptokokki, maitohappobakteerit ja jotkut muut. Mikrobien fysiologisista ominaisuuksista riippuen "välttämättömien" aminohappojen lukumäärä on erilainen - Staphylococcus aureukselle vain tryptofaania ja kystiiniä tarvitaan ravintoalustassa ja hemolyyttisessä streptokokissa - 17 aminohappoa. Proteiinit ovat typen lähteinä vain niille mikro-organismeille, jotka muodostavat proteolyyttisiä entsyymejä, jotka vapautuvat ympäristöön (eli eksoformissa). Näiden entsyymien vaikutuksesta proteiinit hajoavat alhaisemman molekyylipainon aineiksi - peptoneiksi ja aminohapoiksi. kaksikymmentä

Mikro-organismien energia-aineenvaihdunnalle, samoin kuin rakentavalle, on ominaista erilaiset biokemialliset mekanismit. Tässä aineenvaihdunnassa erotetaan kolme päätyyppiä - aerobinen hengitys, anaerobinen hengitys ja käyminen, joista yleisin on aerobinen hengitys. Tässä prosessissa orgaaninen aines hapetetaan hiilidioksidiksi ja vedeksi tämän aineen sisältämän energian suurimmalla vapautumisella. Monet mikro-organismit, joilla on aerobinen hengitys, ovat tiukkoja aerobeja, mutta osa niistä on fakultatiivisia aerobeja, koska ne voivat muodostaa ATP:tä myös anaerobisissa olosuhteissa käymisen kautta. Jotkut mikro-organismit, pääasiassa bakteerit, saavat energiaa anaerobisessa hengityksessä eli aineiden hapettumisen seurauksena, jolloin elektronien vastaanottajina ei toimi happi, vaan epäorgaaniset yhdisteet. Joten jotkin Bacillus-suvun E. coli -lajit suorittavat anaerobista hengitystä, jonka aikana nitraatti (NO 3) pelkistyy ammoniakiksi; Clostridium aceticum hapettaa molekyylivetyä käyttämällä hiilidioksidia elektronien vastaanottajana. 21

Yksinkertaisin aineenvaihduntatyyppinen energia-aineenvaihdunta on käyminen. Fermentaatioprosessit tapahtuvat anaerobisissa olosuhteissa ja niihin liittyy energian vapautumista. Käymisen pääsubstraatti on hiilihydraatit, mutta bakteerit voivat fermentoida orgaanisia happoja, mukaan lukien aminohappoja, sekä puriineja ja pyrimidiinejä. Useita fermentaatiotyyppejä tunnetaan, joista jokainen johtuu tietystä mikro-organismiryhmästä ja johon liittyy mekanismin mukaisesti tiettyjen lopputuotteiden muodostuminen. Käymisen lopputuotteita ovat yleensä erilaiset orgaaniset hapot - maito-, etikka-, meripihka-, sitruuna- jne. sekä alkoholit (etyyli, butyyli, propyyli), hiilidioksidi ja vety. Päälopputuotteen tuotoksen mukaan erotetaan myös vastaavat käymistyypit. Koska käymisen aikana ei tapahdu substraatin täydellistä hapettumista ja väliaineeseen vapautuu osittain hapettuneita aineita, jotka sisältävät edelleen energiaa - orgaanisia happoja, alkoholeja jne., ATP:n kokonaissaanto tässä prosessissa per 1 mooli fermentoitua. substraatti on merkittävä (~ 30 kertaa) pienempi kuin saman substraatin aineenvaihdunnan aikana hengitysprosesseissa. 22

Erityinen rooli kuuluu Robert Kochille. Olettaen, että on tarpeen eristää puhdas mikrobiviljelmä, hän päätti siten tarpeen luoda olosuhteet tämän ongelman ratkaisemiseksi. Näistä tärkein oli ravintoalusta, jolla mikro-organismin kasvu saatiin aikaan. Tiheiden ravintoalustojen tuominen mikrobiologiseen käytäntöön vuonna 1881 liittyy Kochin nimeen. Ajatus niiden käytöstä syntyi aiemmin ja kuuluu saksalaiselle tutkijalle Bredfeldille. Lisäksi Schroeter viljeli jo vuonna 1877 bakteereja perunaviipaleilla, mikä voidaan myös tulkita ravintoalustan käytöksi. Kochin ansio on syvällinen tieteellinen lähestymistapa ongelmaan, ravinnealustojen laaja käyttö omassa tutkimuksessaan. Hän ehdotti myös ensimmäistä kovetinta, gelatiinia, tiheän väliaineen komponentiksi. 25

Nykyaikaisille mikrobiologeille tutun agar-agarin Frost otti arkikäytäntöön paljon myöhemmin, vuonna 1919, vaikka olisikin reilua muistaa, että saksalainen tutkija Hesse ehdotti vuonna 1881 agar-agaria. Lisäksi venäläinen mikrobiologi V. L. Omelyansky totesi vuonna 1913 kunnioittaen gelatiinia sisältävää ravintoalustaa, että agar-ravintoalustat ovat parempia tapauksissa, joissa mikrobi nesteyttää gelatiinia. Kochin ajatuksia ja käytännön toimintaa kehitettiin intensiivisesti 1800-luvun lopulla ja 1900-luvun ensimmäisellä neljänneksellä. Tänä aikana useiden maiden tutkijat ehdottivat eri tarkoituksiin ravinnealustoja, joiden rooli käytännön mikrobiologiassa oli ja on edelleen erittäin merkittävä. Nykyaikainen mikrobiologi muistaa heidän nimensä joka päivä työssään. Näiden muutaman vuoden aikana alkuperältään japanilainen, Sh. Endo, ehdotti omaa agaria enterobakteerien erottamiseen, itävaltalaista E. Levenshteiniä, joka on mykobakteerien elatusaine, ja englantilainen A. Mak. Konki - valikoiva ja differentiaalinen diagnostinen alusta suoliston mikro-organismeille, saksalainen T. Kitt ja italialainen D. Tarozzi - elatusaine obligaateille anaerobisille bakteereille, ranskalainen R. Saburo, tšekki F. Chapek ja amerikkalainen A. Doks - elatusaine sienille, brasilialainen R. Hottinger – monikäyttöinen materiaali, joka perustuu ylikypsytettyyn lihaan jne. 26

Yleiset vaatimukset Kaikkien elementtien sisältö mikrobisolun rakentamiseen Riittävä kosteus Antaa isotonisuuden Tietty vetyionipitoisuus Redox-potentiaali Steriiliys

Jaksollisen viljelmän kasvun päävaiheet: alku (lag-) - 1, eksponentiaalinen (abolologaritminen) - 2, stationäärinen - 3 kuolee - 4 (kuva 12) 12. Mikrobipopulaation kasvun päävaiheet nestemäisillä ravintoaineilla.

Mikro-organismien kasvun luonne nestemäisellä ravintoalustalla Ø Ø Ø Bakteerien kasvu alustan tasaisen sameuden kanssa, jonka väri ei muutu tai muuttuu viljelmässä muodostuneen vesiliukoisen pigmentin värin mukaan. mikrobi; Bakteerien kasvu pohjassa - sedimentin muodostuminen (niukka tai runsas, mureneva, homogeeninen, kuitumainen jne.); Parietaalinen kasvu säilyttäen ravintoalustan läpinäkyvyyden; Bakteerien pinnallinen kasvu - kalvo alustan pinnalla (ohut, herkkä, väritön tai kostea, paksu, selvästi näkyvä paljaalla silmällä, tiheä kuiva, ryppyinen ja joskus syyläinen pinta); Kalvon väri, kuten ravintoalustan, riippuu mikrobien kasvavan viljelmän tuottamasta pigmentistä.

Mikro-organismien kasvun luonne puolinestemäisellä ravintoalustalla Tutkittava viljelmä siirrostetaan pylvääseen, jossa on 0,2 - 0,5 % puolinestemäistä agaria. Mikro-organismin kyky liikkua määritetään - levitetään kylvöpaikalta (injektio) alustaan ​​ruiskuttamalla koeputken seinämän välittömään läheisyyteen.

Keskiviikko Endo Differentiaalidiagnostinen Koostumus: Perus - ravinneagar Dif. tekijä - laktoosi Indikaattori - emäksinen fuksiini, joka on poistettu värin natriumsulfiitilla Laktoosin kasvu + punaisia ​​pesäkkeitä metallin kiillolla

Keskiviikko Ploskirev Selektiivinen, differentiaalidiagnostiikka Koostumus: Perus - ravinneagar Elektiivinen tekijä - sappisuolat, briljanttivihreä, jodi Er. tekijä - laktoosi Indikaattori - neutraali punainen Laktoosi + puolukkapesäkkeiden kasvu

Suolaagar Selektiivinen alusta Koostumus: Pohja - ravinneagar Selektiivinen tekijä - suola 10 % Indikaattori - ei yhtään Suolaresistenttien pesäkkeiden kasvu

Keltuais-suola-agar (Chistovich) Elektiivinen, diagnostinen Koostumus: Pohja - ravinneagar Elektiivinen tekijä - suola 10% Dif. tekijä - munankeltuainen Indikaattori - ei Suolaresistenttien pesäkkeiden kasvu + sameus pesäkkeiden ympärillä lesitovitellaasiaktiivisuuden vuoksi

Müller-Kaufmann tetrationaattialusta Elatusaine on tarkoitettu selektiiviseen rikastukseen Salmonella-suvun bakteerien havaitsemisessa Koostumus: Pohja - ravintoliemi Elektiivinen tekijä - seliinihapon suola Indikaattori - ei Natriumseliinille vastustuskykyisten bakteerien kasvu

Suolaliemi Elektiivinen väliaine Ainesosat: Pohja - ravintoliemi Elektiivinen tekijä - 6,5 % Na. Cl-indikaattori - ei ole Suolaa sietävien mikro-organismien kasvu

Mikro-organismien kasvun luonne tiheillä ravintoaineilla. Tärkeimmät merkit: ü Koko - pilkullinen (≤ 1 mm) - suuri (4 - 6 mm ja enemmän); ü Muoto - oikea (pyöreä); epäsäännöllinen (amoeboidi), risoidi; ü Reunan ääriviivat - tasainen tai epätasainen (hiljainen, aaltoileva jne.) ü Pesäkkeiden kohokuvio (kupumainen, litteäkupera, pesäkkeitä, joissa on painautunut keskusta jne. ü Pesäkkeen pinta (matta tai kiiltävä () S-R-muodot); ü Pesäkkeen väri (pigmentaatio); ü Pesäkkeen rakenne (hieno tai karkea rakeinen); ü Sakeus (viskoosi, limamainen, tahnamainen jne.

Bakteerien pigmentin muodostuminen Punaruskea (prodigiosiini) Serratia marcessens Keltaoranssi, (karotenoidit) Staphylococcus, Sarcina, M. tuberculosis suvut Musta, ruskea (melaniini) B. cubtilis, Candida sienet Sininen (pyosyaniini) P. aeruginosa keltainen-vihreä (pyoverdin) Vibrio-suku

Puhdasviljelmien eristäminen: suodatus kalvosuodattimien läpi Mikro-organismit suodattimessa Metallihäkit ydinsuodattimille

4.2. BIOLOGISET JA MIKROBIOLOGiset TEKIJÄT

Lavantautikuumeen ja paratifuusikuumeen A, B ja C bakteriologinen diagnoosi

Käyttöönottopäivä: hyväksymishetkestä alkaen

1. KEHITYS: FGUN St. Petersburg NIIEM niitä. Pasteur Rospotrebnadzorista (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "I.I. Mechnikovin mukaan nimetty Pietarin valtion lääketieteellinen akatemia" liittovaltion terveys- ja sosiaalisen kehityksen virastosta (A.G. Boytsov).

3. Johtaja HYVÄKSYNYT Liittovaltion palvelu kuluttajansuojan ja ihmisten hyvinvoinnin valvonnasta, Venäjän federaation valtion ylilääkäri G.G. Onishchenko 29. joulukuuta 2007 0100/13745-07-34

4. KÄYTTÖÖNOTTO hyväksymishetkestä alkaen.

5. KÄYTETTY ENSIMMÄISTÄ ​​KERTAA.

1 käyttöalue

1 käyttöalue

1.1. Ohjeissa määritellään lavantautien ja paratyfoidin A, B ja C bakteriologisen diagnosoinnin perusperiaatteet ja piirteet; sisältää nykyaikaista tietoa taudinaiheuttajien biologisista ominaisuuksista, antibakteeristen lääkkeiden vastustuskyvystä, ravintoaineista niiden eristämiseen sekä lavantauti- ja paratyfaattien patogeenien erottamisen muista salmonellan serologisista muunnelmista.

2. Luettelo lyhenteistä

ABP - antibakteerinen lääke

BCA - vismuttisulfiittiagar

MPU - lääketieteellinen ja ehkäisevä laitos

MIC - pienin estävä pitoisuus

P - keskitaso

U - vakaa

H - herkkä

RIF - immunofluoresenssireaktio

CNS - keskushermosto

Taulukoissa:

"+" - positiivinen reaktio ensimmäisenä päivänä;

"-" - negatiivinen reaktio 4-20 päivää;

"(+)" - viivästynyt positiivinen reaktio 2-20 päivää;

d - erilaiset entsymaattiset reaktiot.

Erilaistuminen entsymaattisiksi varianteiksi on mahdollista.

3. Yleiset määräykset

3.1. Lavantauti ja sivutauti A, B ja C ovat antroponoottisia suolistoinfektioita, joita aiheuttavat Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B ja Salmonella Paratyphi C. harvoin - paratyphoid C.

3.2. Sairaudille ovat ominaisia ​​ohutsuolen imusolmukkeiden haavaiset vauriot, bakteremia, kuume, syklinen kliininen kulku, johon liittyy vakava myrkytys, ruusuinen ihottuma kehon iholla, hepato- ja splenomegalia. Ummetus on yleisempää kuin ripuli. Peyerin sykkyräsuolen laastareiden haavautuminen noin 1 %:ssa tapauksista johtaa suoliston verenvuoto ja suolen perforaatio, jolla on haitallisimmat seuraukset potilaalle.

3.3. Lavantautien ja paratyfaattien A, B ja C diagnoosi tehdään taudin kliinisten oireiden perusteella ottaen huomioon epidemiologinen historia ja tiedot kattavasta laboratoriotutkimuksesta, joka sisältää klassisia bakteriologisia ja serologisia menetelmiä. Bakteriologinen diagnostiikka on ensisijaisen tärkeää, koska tässä tapauksessa on mahdollista saada täydellisin tieto patogeenin biologisista ominaisuuksista, mukaan lukien sen herkkyys antibakteerisille lääkkeille.

3.4. Antimikrobisten lääkkeiden käyttö lavantautien ja paratyfoidin etiotrooppisessa hoidossa mahdollisti toisaalta kuolleisuuden alentamisen 10-20 %:sta alle 1 %:iin ja toisaalta se vaikeutti laboratoriodiagnoosia, koska Usein laboratoriotutkimuksen materiaalin näytteenotto tehdään antibioottihoidon aloittamisen jälkeen. Tämä tosiasia tekee tarpeelliseksi lähestyä tutkimusmateriaalin valintaa, tutkittavan materiaalin ottamista ja tutkimustekniikoita huolellisemmin.

3.5. Lavantautien epidemiologian nykyaikainen piirre on tartunnan tuonnin (kuljettamisen) jyrkkä lisääntyminen tämän taudin endeemisiltä alueilta, lähi- ja kaukaisista maista sekä Venäjän asukkaiden tartunnat heidän lähtiessään näihin maihin ja maahanmuuttoprosessissa maan sisällä. Toinen piirre on suuren epidemiologisen riskin suuren kontingentin läsnäolo sellaisten henkilöiden muodossa, joilla ei ole kiinteää asuinpaikkaa ja joiden joukossa on todettu korkea lavantautia.

3.6. Nämä ohjeet on laadittu yhtenäistääkseen lavantautien ja paratyfoidin A, B ja C bakteriologisen diagnoosin menetelmiä sekä laboratoriotutkimuksen tulosten oikeaa tulkintaa ottaen huomioon klinikan nykyaikaiset piirteet, hoito ja epidemiologinen tilanne tietyillä alueilla.

4. Bakteriologisen diagnostiikan indikaatiot

Käyttöaihe biologisen materiaalin bakteriologiselle tutkimukselle lavantautien ja paratypofaudin A, B ja C patogeenien esiintymisen varalta on tutkimuksen tarve:

4.1) potilaat, joilla on epäilty lavantautia sekä tuntemattoman etiologian aiheuttamaa kuumetta, joka kestää 5 päivää tai enemmän;

4.2) henkilöt, jotka ovat olleet tekemisissä lavantauti- ja paratylfoidipotilaiden kanssa A, B, C;

4.3) tiettyjen ammattien, toimialojen ja järjestöjen työntekijät työhönoton yhteydessä ja epidemiologisten indikaatioiden mukaan;

4.4) henkilöt ennen kliinisten ja epidemiologisten indikaatioiden mukaan ottamista sairaaloihin ja erikoishoitoon;

4.5) henkilöt, jotka ovat ilmoittautuneet laitoshoitoon psykosomaattisen (psykosomaattisen) profiilin sairaaloihin (osastoihin), hoitokodeihin, kroonista mielisairautta ja keskushermostovaurioita sairastavien henkilöiden sisäoppilaitoksiin sekä muihin ympärivuorokautisiin suljettuihin laitoksiin pysyä;

4.6) potilaat, joilla on lavantauti ja sivutauti taudin kliinisten oireiden häviämisen jälkeen ennen sairaalasta kotiutumista;

4.7) henkilöt, jotka ovat sairastuneet lavantautiin ja sivutautiin lääkärintarkastuksen aikana;

4.8) krooniset bakteerikantaajat, jotka on tunnistettu tiettyjen ammattien, teollisuudenalojen ja organisaatioiden työntekijöiden keskuudessa, kun heidät työllistetään uudelleen näihin yrityksiin ja toimitiloihin;

4.9) poikkileikkausmateriaali, jos epäillään lavantautia ja sivutautikuumetta.

5. Menetelmän logistiikka

5.1. Vakiomittaus- ja apulaitteet, mikrobiologisten laboratorioiden mittalaitteet.

5.2. Ravintoalustat, diagnostiset seerumit ja kemialliset reagenssit lavantautien ja paratypfaattien A, B ja C aiheuttajien viljelyyn, eristämiseen, tunnistamiseen ja antibakteerisille lääkkeille herkkyyden määrittämiseen.

5.3. Lavantautien ja paratyfaattisten sairauksien laboratoriodiagnoosissa ja bakteerikantajien havaitsemisessa tulee käyttää Venäjän federaation alueella käyttöön hyväksyttyjä ravintoalustoja ja reagensseja vahvistetun menettelyn mukaisesti.

6. Lavantautien ja sivutautien laboratoriodiagnoosi

6.1. Bakteriologisen menetelmän periaate perustuu elävien mikro-organismien havaitsemiseen erilaisista biologisista substraateista (veri, virtsa, ulosteet, sappi, luuydin, roseola) sairauden vaiheesta riippuen. Tätä varten tietty määrä biologista materiaalia kylvetään erityisille ravintoalustoille, minkä jälkeen inkuboidaan termostaatissa ja tunnistetaan S. Typhi-, S. Paratyphi A-, S. Paratyphi B- ja S. Paratyphi -lajeille ominaisten mikro-organismien kasvaneet pesäkkeet. C, kulttuuristen ja entsymaattisten ominaisuuksien ja antigeenisten ominaisuuksien mukaan.

6.2. Vain bakteriologinen tutkimus voi tarjota tarkan etiologisen diagnoosin ja kehon vapautumisen hallinnan taudinaiheuttajasta. Suhteessa erotusdiagnoosi lavantauti ja paratyfoidi, ainoa menetelmä on biologisen materiaalin laboratoriotutkimus eristämällä taudinaiheuttaja ja tunnistamalla se serologisen muunnelman tasolle, tk. tartuntaprosessin kliininen kulku ei aina mahdollista näiden nosologisten muotojen erottamista toisistaan.

7. Bakteriologinen tutkimus

7.1. Lavantautien ja sivutautien A, B ja C aiheuttajien eristäminen suoritetaan saman biomateriaalien bakteriologisen tutkimuksen kaavion mukaisesti.

7.2. Menettely materiaalin keräämiseksi lavantauti- ja sivutautisairauksien laboratoriotutkimuksia varten on määritelty SP 3.1.1.2137-06:ssa.

7.3. Tekniikka biomateriaalien keräämiseksi ja kuljettamiseksi mikrobiologisiin laboratorioihin on kuvattu MU:ssa 4.2.2039-05.

7.4 Lavantauti- ja paratyfoidikuumeen diagnosointia varten tarvittavat bakteriologiset tutkimukset ovat:

veri;

ulosteet;

virtsa;


Taudinaiheuttajia voidaan eristää myös:

roseoli;

luuydin;

rintamaito.

Materiaali bakteriologiseen tutkimukseen bakteerikantajien tunnistamiseksi SP 3.1.1.2137-06 mukaisesti on:

ulosteet;

virtsa;

sappi (pohjukaissuolen sisältö).

7.5 Poikkileikkausmateriaalin tutkimus suoritetaan diagnoosin selkeyttämiseksi.

7.6 Biologisen materiaalin kerääminen laboratoriotutkimuksia varten suoritetaan ennen etiotrooppisen hoidon aloittamista: lääkintätyöntekijä, joka epäilee lavantauti- sivulavantautiinfektiota; ryhmä- ja tautitapauksissa - Rospotrebnadzorin laitosten asiantuntijat ja lääketieteellisten laitosten henkilökunta. Sairaalapotilailta otetaan materiaalia bakteriologiseen tutkimukseen hakijatoimisto sairaala.

7.7. Potilaiden tai kantajien kanssa kommunikoineiden henkilöiden (yhteyshenkilöiden) kanssa materiaalin keräämisen suorittavat terveydenhuoltolaitosten ja muiden organisaatioiden ja laitosten lääkintätyöntekijät paikassa, jossa potilaat tunnistetaan.

7.8 Laboratoriotutkimuksen biomateriaaliin liittyy erityinen suunta. Aineiston toimittaminen koehenkilöiden itsensä toimesta ei ole sallittua. Jos materiaalin oikea-aikainen toimitus on mahdotonta, käytetään säilöntäaineita ja kuljetusvälineitä (taulukko 1).

8. Bakteriologinen verikoe

Indikaatio verikokeeseen on 5 päivää tai kauemmin havaittu epäily lavantauti- sivutautisairauksista tai tuntemattomasta alkuperästä johtuva kuumetila (alkuperä tuntematon kuume) (SP 3.1.1.2137-06).

Veren ja ravintoaineen suhteen tulisi olla 1:10-1:60. Itsenäisesti otettujen verinäytteiden lukumäärän ja niiden ottoajan määrää hoitava lääkäri MU 4.2.2039-05 mukaisesti tuntemattoman alkuperän kuumeen tai Neuvostoliiton terveysministeriön MU 04-723/3 mukaisesti ( 1984) epäiltyjen lavantauti- sivulavantautien vuoksi. Potilailla, jotka saavat antibakteeriset lääkkeet, näytteet on kerättävä välittömästi ennen seuraavan lääkeannoksen antamista (vastaanottoa).

Kuumeen esiintyessä on optimaalista ottaa verta kehon lämpötilan nousun taustalla (mutta ei lämpötilan huipulla!). Kylvö ravintoalustalle tapahtuu suoraan potilaan sängyn viereen.

Jos epäillään lavantauti- sivulavantautia, veriviljelyyn voidaan käyttää Rapoport-elatusainetta, 20 % sappilientä, liha-peptonilientä, johon on lisätty 1 % glukoosia (100 ml:n pulloissa). Aikaisemmin käytetyt veriviljelmät steriilissä tislatussa (hana)vedessä. On kuitenkin suositeltavaa käyttää erityisiä veriviljelyalustoja.

Kuumeen korkeudella kylvetyn veren määrä voi olla 10 ml, myöhemmässä vaiheessa - jopa 20 ml (lapsilla - jopa 5 ml).

Yli 5 päivää kestävän tuntemattoman alkuperän kuumeen yhteydessä tulee yleensä tutkia useita verinäytteitä. Verinäytteet suonesta tehdään MU 4.2.2039-05 mukaisesti. Tämä on tarpeen todellisen bakteremian erottamiseksi vahingossa tapahtuneesta veren kontaminaatiosta laskimopunktion aikana (näytekontaminaation todennäköisyys tali- tai hikirauhasen vahingossa puhkaisusta on 3 %). Tässä tapauksessa veriviljelyyn käytetään kahta elatusainetta: 1) elatusainetta aerobille ja fakultatiivisille anaerobeille ja 2) väliaine obligaateille anaerobeille (esimerkiksi "kaksois"elatusaine + tioglykoliväliaine Neuvostoliiton terveysministeriön määräyksen mukaan päivätty 12.04.85 N 535) tai yleisväline aerobeille ja anaerobeille.

On suositeltavaa käyttää teollisesti valmistettuja materiaaleja, jotka on hyväksytty käytettäväksi Venäjällä.

Viljelykasveja inkuboidaan 37 °C:ssa 10 päivää päivittäisen katselun aikana. Tässä tapauksessa injektiopulloja, joissa on "kaksoisväliaine", kallistetaan ja pestään väliaineen tiheä osa.

Jos kasvun merkkejä ei ole 10. päivänä, annetaan kielteinen vastaus.

Jos on merkkejä kasvusta (sameus, Rapoport-alustan punoitus, näkyvien pesäkkeiden ilmaantuminen "kaksoisalustan" tiheään osaan), kylvö suoritetaan rinnakkain polyhiilihydraattialustalle ja tiheälle alustalle petrimaljoissa ( veriagar tuntemattoman alkuperän kuumeen yhteydessä ja Endo medium, jos epäillään lavantautia.

Suora inokulaatio polyhiilihydraattialustalle suoritetaan tutkimuksen ajan lyhentämiseksi, sillä oletuksella, että kun verta siirrostetaan suurella todennäköisyydellä, havaitaan taudinaiheuttajan monoviljelmän kasvua. Rinnakkainen maljaus Endo-elatusaineelle tai veri-agarille on tarpeen tämän oletuksen hallitsemiseksi ja puhtaan viljelmän eristämiseksi jakamalla yksittäisiä pesäkkeitä.

Jos näissä elatusaineissa havaitaan monokulttuurin kasvua, voidaan ottaa huomioon polyhiilihydraattialustan biokemialliset ominaisuudet. Viljelmän puhtauden säätelemiseksi on tarpeen suorittaa mikroskooppinäytteestä Gramin värjätty polyhiilihydraattiväliaine. Tässä vaiheessa on myös mahdollista asettaa lasille agglutinaatioreaktio vastaavilla agglutinoivalla O- ja H-salmonellaseerumilla ja antaa alustava vastaus.

Potilaiden, joilla epäillään lavantautia ja sivutautikuumetta, veren bakteriologisen tutkimuksen kaavio on esitetty kuvassa 1.

Kuva 1. Kaavio veren bakteriologisesta tutkimuksesta potilailla, joilla on epäilty lavantauti ja paratyfaatti

Kuva 1. Kaavio veren bakteriologisesta tutkimuksesta potilailla, joilla on epäilty lavantauti ja paratyfaatti

Kuvassa 2 on esitetty kaavio sellaisten potilaiden veren bakteriologisesta tutkimuksesta, joilla on tuntematonta kuumetta.

Kuva 2. Kaavio veren bakteriologisesta tutkimuksesta potilailla, joilla on tuntematonta kuumetta

Kuva 2. Kaavio veren bakteriologisesta tutkimuksesta potilailla, joilla on tuntematonta kuumetta

Viljelmän lisätunnistuksen kulkua kulttuuris-morfologisten, entsymaattisten ominaisuuksien ja serologisten ominaisuuksien perusteella kuvataan tarkemmin asiaa koskevissa kohdissa.

9. Ulosteiden bakteriologinen tutkimus

Ulostenäytteet otetaan välittömästi ulostamisen jälkeen desinfioidusta ja perusteellisesti pestystä astiasta, jonka pohjalle on asetettu paksu puhdas paperiarkki. Materiaali kerätään steriilin astian kanteen kiinnitetyllä lusikalla. Jos lastalla varustettua astiaa ei ole, materiaalin ottamiseen käytetään mitä tahansa steriiliä instrumenttia (steriili puinen lasta, lankasilmukka, lusikka jne.). Patologisten epäpuhtauksien läsnä ollessa on tarpeen valita alueet, jotka sisältävät limaa, mätä, hiutaleita, mutta jotka eivät sisällä verta. Näytteet nestemäisistä ulosteista otetaan steriilillä muovisella Pasteur-pipetillä, jossa on suljettu säiliö.

Otettavan materiaalin tilavuuden on oltava vähintään 2 g. pähkinä; löysässä ulosteessa sen kerroksen säiliössä tulee olla vähintään 1,5-2,0 cm Steriiliin astiaan sijoitettu materiaali toimitetaan laboratorioon 2 tunnin sisällä.

Jos materiaalia ei voida toimittaa laboratorioon 2 tunnin sisällä, se kerätään säilöntäaineeseen (kuljetusjärjestelmä väliaineen kanssa). Materiaalin tilavuus ei saa ylittää väliaineen tilavuutta.

Uloste on homogenisoitava huolellisesti väliaineessa. Näytteitä voidaan säilyttää ennen tutkimuksen alkua päivän aikana jääkaapissa (4-6 °C).

Kuljetusaineet ja säilöntäaineet, joilla eristetään lavantautia ja paratypfaattia A, B ja C sekä muita akuuttien suolistoinfektioiden taudinaiheuttajia, on esitetty taulukossa 1.

pöytä 1

Ulosteiden kuljettamiseen yleisimmin käytetyt kuljetusaineet ja säilöntäaineet

Suoraan peräsuolesta peräsuolen vanupuikolla otettuja ulostenäytteitä käytetään ensisijaisesti diagnoosin objektivisointiin (MU 4.2.2039-05). Materiaalin ottaa ensihoitaja. Pääsääntöisesti erityinen koetin kokeen ottamista varten on osa kuljetusjärjestelmää. On tärkeää huomata, että kuljetusväliaineen pääsy peräsuolen limakalvolle ei ole hyväksyttävää! Siksi peräsuolen vanupuikko tulee upottaa kuljetusaineeseen vasta materiaalin ottamisen jälkeen. Potilasta pyydetään makaamaan kyljellään lantio vedettynä vatsaan ja pakarat erilleen kämmenillä. Vanupuikkokoetin työnnetään peräaukkoon 4-5 cm syvyyteen ja sitä varovasti akselin ympäri kiertämällä kerätään materiaalia peräaukon kryptoista. Poista vanupuikko varovasti ja upota se kuljetusaineeseen. Tamponin kuljettaminen ilman väliainetta ei ole sallittua.

Laboratoriossa ulostenäytteiden siirrostus suoritetaan suoraan tiheään differentiaalidiagnostiseen ravintoalustaan ​​ja rinnakkain rikastusalustaan.

Ulosteiden bakteriologisen tutkimuksen kaavio on esitetty kuvassa 3.

Kuva 3. Ulosteiden bakteriologisen tutkimuksen kaavio

Kuva 3. Ulosteiden bakteriologisen tutkimuksen kaavio

Luonnollisista ulosteista valmistetaan suspensio 0,9-prosenttiseen natriumkloridiliuokseen suhteessa 1:5-1:10 ja jätetään 30 minuutiksi, jotta suuret hiukkaset laskeutuvat. Sen jälkeen yksi tippa supernatanttia siirrostetaan maljoihin, joissa on tiheä ravintoaine ja 1 ml suspensiota siirrostetaan rikastusalustaan ​​(materiaali-elatusaine-suhteen tulee olla 1:5).

Säilöntäaineessa (kuljetusalustassa) laboratorioon toimitetut ulosteet on homogenisoitava huolellisesti alustassa ennen inokulaatiota, minkä jälkeen materiaali siirrostetaan suoraan kiinteälle alustalle ja rikastusalustalle samoissa suhteissa kuin alkuperäiset ulosteet.

Peräsuolen vanupuikolla kerätyt ulostenäytteet tutkitaan samalla tavalla kuin säilöntäaineessa annettu uloste. On muistettava, että peräsuolen vanupuikko sisältää vähemmän mikro-organismeja verrattuna alkuperäisiin ulosteisiin, joten siirrosteen annosta tulee suurentaa.

S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B ja S. Paratyphi C maksimaalinen havaitseminen ulosteissa saavutetaan käyttämällä rikastuselatusaineita, vaikka taudin akuuttivaiheessa olevilla potilailla taudinaiheuttaja eristetään usein suoralla rokotuksella. Inokulaatio rikastusalustalle rinnakkain suoran rokotuksen kanssa on pakollista!

Kaikkia inokulaatioita inkuboidaan 37 °C:ssa differentiaalidiagnostisella alustalla 18-24 tuntia, vismuttisulfiittiagarilla 24-48 tuntia. keskikokoinen). Näille patogeeneille ominaiset pesäkkeet, jotka on kasvatettu tiheällä alustalla, seulotaan polyhiilihydraattialustalla.

On huomattava, että tekniikan, jolla materiaali levitetään levyn pinnalle tiheällä väliaineella, tulisi varmistaa tyypillisen tyyppisten eristettyjen pesäkkeiden kasvu, jota voidaan käyttää mikro-organismin viljelyominaisuuksien visuaaliseen arvioimiseen.

Vismuttisulfiittiagar (BCA) on edullinen menetelmä S. Typhi -bakteerin eristämiseen. Tyypilliset S. Typhin pesäkkeet ovat mustia ja niitä ympäröi musta tai ruskea metallikiiltoinen reuna. S. Typhi ei kuitenkaan usein tuota ICA:lle ominaista mustutumista, kun tapahtuu runsasta kasvua, joten levyt tulisi ympätä yksittäisen pesäkkeen kasvun mahdollistamiseksi.

Ulostenäytteet voidaan inokuloida tavanomaisille selektiivisille enterobakteerien alustalle, joka on hyväksytty käytettäväksi Venäjän federaatiossa. Vismuttisulfiittiagar on kuitenkin edullinen menetelmä S. tymhin eristämiseksi. Viljelmien lisätunnistuksen kulku entsymaattisten ominaisuuksien ja serologisten ominaisuuksien perusteella kuvataan tarkemmin asiaa koskevissa osissa.

10. Virtsan bakteriologinen tutkimus

Virtsaviljelyä tehdään diagnoosia varten taudin ensimmäisistä päivistä potilaan kotiuttamiseen asti sekä bakteerikantaajan tunnistamiseksi. Koska taudinaiheuttajaa erittyy virtsaan lavantauti- ja paratyyfistä ajoittain ja lyhytaikaisesti, virtsatestit on toistettava 5-7 päivän välein.

On noudatettava tiukasti yleiset säännöt virtsankeruu, joka on esitetty MU:ssa 4.2.2039-05. Virtsanottotavasta riippumatta se on toimitettava laboratorioon 2 tunnin sisällä. Äärimmäisissä tapauksissa virtsaa voidaan säilyttää yön yli jääkaapissa.

On muistettava, että virtsan kemiallisesta koostumuksesta riippuen virtsan bakteerit voivat sekä kuolla varastoinnin aikana että lisääntyä.

Materiaalin säilyvyyden pidentyminen voi tehdä tuloksen tulkinnan erittäin vaikeaksi.

Virtsan (tai sedimentin sentrifugoinnin jälkeen) suora inokulaatio suoritetaan ilman ennakkorikastamista Neuvostoliiton terveysministeriön määräyksen N 535 mukaisesti tiheillä differentiaalidiagnostisilla alustoilla, joita suositellaan salmonellalle, mukaan lukien lavantauti- ja sivutautipatogeenit. Samanaikaisesti natiivi virtsa inokuloidaan kaksinkertaisen pitoisuuden rikastusalustaan ​​suhteessa 1:1, tai virtsan sedimentti siirrostetaan normaalipitoisuuteen. Inokulaatiot asetetaan termostaattiin 37 °C:seen 18-24 tunniksi, minkä jälkeen rikastuselatusaine siirrostetaan tiiviille differentiaalidiagnostiselle alustalle. Kiinteillä väliaineilla kasvatetut pesäkkeet tunnistetaan kulttuuris-entsymaattisten ja serologisten ominaisuuksien perusteella.

11. Sappien bakteriologinen tutkimus (pohjukaissuolen sisältö)

Sappi kerätään kolmeen steriiliin koeputkeen tai steriiliin kertakäyttöiseen astiaan erikseen osissa A, B, C MU 4.2.2039-05 mukaisesti ja toimitetaan laboratorioon.

Suorita tutkimus jokaisesta osasta (A, B, C) erikseen tai valmista kolmen annoksen seos. Näytteet rokotetaan:

tiheillä differentiaalidiagnostisilla alustoilla (ICA, Endo, EMS jne.) 0,5 ml;

koeputkessa (pullossa) ravintoliemellä suhteessa 1:10. Ei ole tarvetta inokuloida sappia rikastusalustaan, kuten sappi itsessään on hyvä kasvualusta lavantautien ja paratyfoodin taudinaiheuttajille.

Inokuloituja väliaineita inkuboidaan sappijäämien kanssa 37 °C:ssa.

18-24 tunnin kuluttua inokulaatiot tutkitaan tiheällä ravintoalustalla (ICA:lla tapahtuvan kasvun tulokset otetaan huomioon 24 ja 48 tunnin jälkeen) ja epäilyttävien pesäkkeiden uudelleenkylvö tehdään polyhiilihydraattialustalle.

Ravintoliemestä tehdään siemenet tiheälle differentiaalidiagnostiselle alustalle.

Jäljelle jääneestä sapesta, jos suorakylvöstä on negatiivinen tulos, toistetaan kylvöt tiheälle differentiaalidiagnostiselle alustalle 18-24 tunnin kuluttua ja päivinä 3, 5, 7 ja 10.

Kasvatetut mikro-organismit tunnistetaan kulttuuris-morfologisten, entsymaattisten ja serologisten ominaisuuksien perusteella.

12. Roseola-materiaalin bakteriologinen tutkimus

Bakteriologinen tutkimus ("kaapiminen" roseolalla) suoritetaan tarkasti määritellyn roseolan läsnä ollessa. Materiaali kerätään aseptisesti. Tätä varten roseolan yläpuolella oleva ihoalue käsitellään 70 %. etyylialkoholi, pyyhi sitten steriilillä 0,9-prosenttisella natriumkloridiliuoksella kostutetulla pumpulipuikolla ja kuivaa steriilillä vanupuikolla.

Tutkimusmateriaalia (kudosnestettä) saadaan karifioimalla roseolan iho skalpellilla. 1-2 tippaa sappilientä tai isotonista natriumkloridiliuosta levitetään vaurioituneelle iholle, sekoitetaan ulkonevan kudosnesteen kanssa ja kerätään Pasteur-pipetillä tai vastaavalla kertakäyttöisellä steriilillä välineellä koeputkeen, jossa on jokin nestemäisistä rikastusaineista (sappi). liemi, Rapoport medium jne.). Laboratoriossa inokulaatio pidetään 37 °C:ssa 18-24 tuntia, minkä jälkeen siirrostus tiheään differentiaalidiagnostiseen alustaan ​​(Endo, EMS, ICA).

13. Luuytimen bakteriologinen tutkimus

Tiedetään hyvin, että lavantautidiagnoosin laboratoriovahvistuksessa tehokkain on luuytimen bakteriologinen tutkimus (patogeenin rokotus on 90-95%). Jopa potilailla, joilla on lieviä ja poistuneita lavantautimuotoja, joiden kliininen tunnistaminen on vaikeaa, samoin kuin antimikrobisten lääkkeiden käytön taustalla, myeloviljelmien inokulaatio on huomattavasti korkeampi kuin veriviljelmien.

Käytännössä luuytimen bakteriologinen tutkimus suoritetaan kuitenkin erittäin harvoin, vain erityisissä kliinisissä indikaatioissa, koska muita laboratoriotietoja ei ole, jotka vahvistavat lavantaudin tai paratyfoidin diagnoosin, tk. tämä invasiivinen toimenpide on melko traumaattinen. Tutkimusmateriaalin näytteenotto suoritetaan vain sairaalassa asianmukaisen asiantuntijan läsnä ollessa.

Materiaalia bakteriologiseen tutkimukseen (aspiraatti) 0,50-0,75 ml:n määrä saadaan aseptisesti puhkaisemalla rintalastan (kahva tai runko) ja ympätään koeputkeen jollakin rikastusaineista (sappiliemi, Rapoport-elatusaine jne.).

Jos aspiraattia ei voida inokuloida rikastusalustaan ​​välittömästi puhkaisun jälkeen, se kerätään steriiliin putkeen ja lähetetään välittömästi laboratorioon, jossa suoritetaan siirrostus rikastusalustaan. Laboratoriossa inokulaatioita inkuboidaan 37 °C:ssa 18–24 tuntia, minkä jälkeen siirrostetaan tiheään differentiaalidiagnostiikkaan.

Jatkotutkimusta tehdään, kuten muunkin biologisen materiaalin bakteriologisessa tutkimuksessa.

14. Ravinteet ja reagenssit

Luettelo elatusaineista patogeenien eristämiseen ja tunnistamiseen suoliston infektiot, erityisesti Enterobacteriaceae, on laaja ja laajenee jatkuvasti. Tiettyjen ympäristöjen valinta määräytyy suurelta osin paikallisten taloudellisten olosuhteiden ja perinteiden mukaan. Sitä tulisi kuitenkin ohjata useiden perusperiaatteiden mukaisesti.

14.1. Viljelyalustan kuvauksessa tulee mainita, että sitä voidaan käyttää Salmonellan lisäksi myös Salmonella Typhi- ja S. Paratyphi A, B ja C:n havaitsemiseen.

14.2. Hyvämaineisten valmistajien kuivattuja elatusaineita tulisi suosia suoraan laboratoriossa valmistettuihin väliaineisiin verrattuna.

14.3. Jokainen elatusaine-erä laboratoriossa on valvottava testikannoilla (sisäinen laadunvalvonta).

14.4. Lavantautien ja paratyfaattisten sairauksien laboratoriodiagnoosissa ja bakteerikantajien havaitsemisessa tulee käyttää Venäjän federaation alueella käyttöön hyväksyttyjä ravintoalustoja ja reagensseja vahvistetun menettelyn mukaisesti.

15. Menetelmät entsymaattisten ominaisuuksien tutkimiseksi

Tällä hetkellä Enterobacteriaceae-perheen mikro-organismien, mukaan lukien lavantauti- ja paratyfaattiset patogeenit, entsymaattisen aktiivisuuden tutkimiseksi on kehitetty, valmistettu ja rekisteröity erilaisia ​​kotimaisen ja ulkomaisen tuotannon diagnostisia testijärjestelmiä (yksinkertaisimmista klassisista Hiss-väliaineista koeputkissa ja levyissä automaattisiin analysaattorit). Jos testijärjestelmät mahdollistavat mikro-organismin tunnistamisen suvun tasolle ja kantojen entsymaattisen aktiivisuuden ominaisuuksien tunnistamisen, niitä voidaan käyttää lavantauti- ja paratyfoidikuumeen patogeenien tunnistamiseen. Testausjärjestelmien kanssa työskentelymenettely on kuvattu yksityiskohtaisesti käyttöohjeissa, ja sitä tulee noudattaa tarkasti.

16. Patogeenien biologiset ominaisuudet

Lavantautien ja paratyfaattien A, B ja C aiheuttajat kuuluvat Enterobacteriaceae-heimoon, Salmonella-sukuun, enterica-lajeihin, alalajiin I (enterica) ja niillä on tälle alalajille, lajille, suvulle ja perheelle tyypillisiä morfologisia, kulttuurisia ja entsymaattisia ominaisuuksia.

Salmonella enterica -suvun edustajat ovat historiallisesti kehittäneet tilanteen, jossa serovarsia ei nimetty antigeenisen kaavan mukaan, kuten muissa bakteereissa, vaan tautien nimillä (ihminen tai eläin), maa, kaupunki tai katu, jossa ne eristettiin, jne. On virhe harkita näitä lajien nimiä, koska niillä ei ole taksonomista asemaa. Yleisimpien Salmonella-serovarsien nimet ovat kuitenkin niin tuttuja, että niitä on lähes mahdotonta korvata antigeenisillä kaavoilla. Siksi nykyaikaisessa Kaufman-White-kaaviossa, kun Salmonella enterica -alalaji I määritellään, käytetään lajimerkinnän sijaan serovarren nimeä, mutta se kirjoitetaan isolla kirjaimella.

Siten lavantauti- ja paratyfoidikuumeen aiheuttajien täydelliset nimet ovat seuraavat:

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi;

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A;

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi B;

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi C

Yleisessä käytännössä on mahdollista käyttää nimien lyhennettyjä versioita:

Salmonella ser. Typhi tai Salmonella Typhi tai S. Typhi;

Salmonella ser. Paratyphi A tai Salmonella Paratyphi A tai S. Paratyphi A;

Salmonella ser. Paratyphi B tai Salmonella Paratyphi B tai S. Paratyphi B;

Salmonella ser. Paratyphi C tai Salmonella Paratyphi C tai S. Paratyphi C

16.1. Kulttuuriset ja morfologiset ominaisuudet

Liikkuvat gramnegatiiviset sauvat eivät muodosta itiöitä ja kapseleita, fakultatiiviset anaerobit kasvavat hyvin tavallisilla ravintoalustoilla.

Yksinkertaisella ravinneagarilla - pesäkkeet hieman kuperia, sileä reuna ja sileä pinta, kosteat ja kiilto yli 1 mm.

Differentiaalidiagnostisilla alustoilla (jotka sisältävät laktoosia erottavana aineena) - läpinäkyvä, väritön tai sinertävä ja joskus vaaleanpunainen tai pesäkeympäristön väri (Endo, Ploskirev, EMS ja muut vastaavat väliaineet).

SS-arapella keskivärisiä pesäkkeitä, joissa on musta keskusta.

Vismuttisulfiittiväliaineella S. Typhi-, S. Paratyphi B:n eristetyt pesäkkeet ovat mustia ja niillä on tyypillinen metallinen kiilto, pesäkkeen alla oleva alusta on värjätty mustaksi. S. Paratyphi A:n pesäkkeet ovat vihertäviä, elatusaineen väriltään vaaleita, pehmeitä.

S. Paratyphi B:n (paratyfoidi B:n aiheuttaja) kannat liha-peptoniagarilla voivat muodostaa kohonneen limakalvon pesäkkeiden reunaa pitkin. Limamainen varsi kehittyy 2-5 päivän ajan, kun viljaa säilytetään huoneenlämmössä. Tämä oire ei ole pysyvä ja diagnostinen.

16.2. Entsymaattiset ominaisuudet

Entsymaattisten ominaisuuksien tutkimus tehdään suhteessa hiilihydraattien, moniarvoisten alkoholien, aminohappojen ja muiden orgaanisten yhdisteiden joukkoon, jota käytetään salmonellan ja muiden enterobakteerien tunnistamisessa ja tutkimuksessa. Käytännön laboratorioissa käytetään yleensä pieniä määriä testejä suolistobakteeriperheeseen kuuluvien pääsukujen tunnistamiseksi. Salmonellan entsymaattisten ominaisuuksien ominaisuudet, mukaan lukien lavantautien ja paratypfaattien A, B ja C aiheuttajat, on esitetty taulukossa 2.

taulukko 2

Lavantautien ja sivutautien A, B, C patogeenien entsymaattiset ominaisuudet

Tapahtui virhe

Maksua ei suoritettu loppuun teknisen virheen vuoksi, varoja tililtäsi
ei kirjattu pois. Yritä odottaa muutama minuutti ja toista maksu uudelleen.