Микробиологические лаборатории и их оборудование. Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений с

ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №1

ТЕМА: «Виды микробиологических лабораторий. Устройство и оборудование бактериологической лаборатории. Правила работы в лаборатории.

Задачи:

· Изучить виды микробиологических лабораторий

· Изучить устройство и оборудование бактериологической лаборатории

· Изучить правила работы в бактериологической лаборатории

· Изучить виды патологического материала и правила его доставки в лабораторию

· Повторить учебную информацию о микробиологических методах исследования

ЗАДАНИЕ № 1

Изучите виды микробиологических лабораторий.

Бактериологические лаборатории организуются в инфекционных больницах, клиниках, санитарно-эпидемиологических станциях. Задача медицинской бактериологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. В бактериологическую лабораторию медицинский персонал приносит правильно взятый у больного или обследуемого патологический материал /мокроту, мочу, рвотные массы, мазок из зева, кровь, спинномозговую жидкость, желчь, промывные воды бронхов и т.д./, его исследуют и определяют, какой возбудитель находится в патологическом материале, т.е. проводят выделение возбудителя. Кроме этого в серологических лабораториях определяют ответ организма на внедрение микроорганизмов /проводится серологическая диагностика инфекционных заболеваний/. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления микробного загрязнения внешней среды

/ воды, почвы, воздуха/ и различных объектов внешней среды.

По своему назначению различают бактериологические, вирусологические, иммунологические и специально предназначенные для диагностики особо опасных инфекций лаборатории.

Заполните таблицу в тетради

ЗАДАНИЕ № 2

Изучите устройство микробиологической лаборатории.

Микробиологическая лаборатория обязательно размещается в изолированном помещении. В лаборатории должно быть несколько помещений.

Лаборатория оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией и противопожарными устройствами.

Помещения лабораторий должны быть удобными для влажной уборки и дезинфекции, в частности, панели окрашиваются светлой масляной краской, полы покрываются линолеумом, а столы – специальной эмалью.

Основным оборудованием лаборатории являются микроскопы, термостаты, холодильники, аппараты для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, свертыватель), центрифуга и дистиллированный аппарат.

В вирусологических лабораториях создают боксы с предбоксниками. Кроме обычного оборудования их оснащают ультратермостатом, центрифугой с охлаждением для очистки и концентрации вирусов, холодильником для их хранения при температуре - 20º -70ºС, аппаратом для вакуумного высушивания материалов.

Иммунологические лаборатории оснащают посудой, приборами, реактивами, диагностикумами и аллергенами для серологических реакций.

Персонал микробиологических лабораторий обеспечивают халатами, косынками и шапочками, марлевыми масками, клеенчатыми передниками, нарукавниками, резиновыми перчатками, противочумными костюмами для индивидуальной защиты. В процессе микробиологических исследований необходимо соблюдать строгий санитарно-противоэпидемический режим, исключающий внутрилабораторное заражение. При случайном попадании исследуемого материала или культуры микроорганизмов на руки, стол, халат или обувь следует немедленно провести их дезинфекцию.

После окончания работы питательные среды с посевами ставят в термостат, музейные культуры – в сейфы-холодильники. Столы протирают дезинфицирующим раствором и тщательно моют руки.

После вскрытия инфицированных животных инструменты и шприцы подвергаются стерилизации, отработанные материалы и трупы сжигают или автоклавируют.

Основные помещения лаборатории:

1. Лабораторные комнаты – предназначены для проведения микробиологических исследований. Это светлая комната, окрашенная масляной краской. В ней размещены рабочие столы, холодильник /в нем держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и др./.

2. Термостатная комната. В ней находятся термостаты /аппараты, в которых выращивают микроорганизмы, температура в них должна быть 37 0 С, она ежедневно регистрируется, центрифуги /используются для отделения плотных частиц от жидкости/.

3. Материальная комната в ней находятся шкафы /в них держат штативы, сухие питательные среды, реактивы, приборы/ и др.

Около раковины должен находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

4. Помещение для приготовления питательных сред – в нем приготавливают питательные среды.

5. Моечная – комната для мытья и обработки посуды.

6. Стерилизационная – в ней находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательные среды, автоклавы, сушильный шкаф.

7. Бокс – строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеззараживание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. В бокс подается обеззараженный воздух. В бокс входят через предбоксник, в котором переодеваются: надевают халат, тапочки, шапочку, маску и переходят в бокс через вторую дверь. В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

8. Регистратура – в ней регистрируют поступивший патологический материал и результат исследования.

9. Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных.

Введение

Подобно общей части любой другой науки, общая бактериология рассматривает не конкретные вопросы (скажем, идентификацию отдельных видов бактерий), а проблемы в це­лом; ее методология охватывает основные процедуры, которые находят широкое применение в самых разнооб­разных лабораторных исследованиях. Данное учебно-методи­че­ское пособие не нацелено на идентификацию какой-либо группы микроорганизмов. Это задача следующих изданий – по частной и санитарной микробиологии. Однако методы, приведенные в нем, могут быть полезными в любой области, где приходится иметь дело с бактериями, и могут применяться для ре­шения практических задач, включающих выделение и типизацию бактерий.

Бактериология стала наукой только после того, как были разработаны уникальные методы, благодаря кото­рым она продолжает оказывать влияние и проникать в такие появившиеся позднее области науки, как вирусо­логия, иммунология и молекулярная биология. Разрабо­танная Р. Кохом техника использования чистых культур и впервые примененные Л. Пастером иммунологические ре­акции и химический анализ и сейчас не утратили своего значения.

Методология общей бактериологии отражена в данном издании с помощью такого построения, которое типично для стандартных учебных пособий по этой дис­циплине. Однако, в отличие от лабораторных практикумов по курсу микробиологии для вузов, она по некоторым разделам изложена более детально и носит справочный характер. Данная структура учитывает особенность подготовки и специализации врачей-бактериологов и ветсанэкспертов. Часто материал излагается произвольно, поэтому некоторые методы упо­минаются несколько раз, что обусловлено стремлением продемонстрировать их взаимосвязь.

Бактериологическая лаборатория

Бактериологические лаборатории как структурные единицы организуются в составе областных, районных, межрайонных ветеринарных лабораториях, а также в структуре зональных ветеринарных лабораторий. Они также организованы при центрах санитарно-эпидемио­логиче­ского надзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных ста­ционарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно-венерологических), и в поликлиниках. Бактериологические лаборатории входят в состав специализированных научно-исследовательских учреждений. Бактериологические лаборатории постоянно используются для подтверждения или установления оценки пригодности мяса на пищевые цели по ВСЭ.

Объектами исследования в бактериологических лабо­раториях являются:

1. Выделения из организма: моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, патологический и трупный материал.

2. Объекты внешней среды: вода, воздух, почва, смывы с предметов инвентаря, корма, технологическое сырьё получаемое от убоя сельскохозяйственных животных.

3. Продукты питания, образцы мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, которым необходимо дать оценку на пригодность для пищевых целей.

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места

Специфика микробиологических работ требует, чтобы по­мещение, отведенное под лабораторию, было изолировано от жилых комнат, пищевых блоков и других непрофильных производственных помещений.

В состав бактериологической лаборатории входят: лабо­раторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и зараженной посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; бактериологическая кухня – для приготовления, разлива, стерилизации и хра­нения питательных сред; виварий для содержания подопыт­ных животных; материальная для хранения запасных реакти­вов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

Перечисленные подсобные помещения как самостоятель­ные структурные единицы входят в состав крупных бактерио­логических лабораторий. В небольших лабораториях бактериологическую кухню и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных живот­ных отсутствует.

Помещения микробиологических лабораторий по степени опасности для персонала разделяются на 2 зоны:

I. "Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, персонал одет в соответствующий тип защитной одежды.

II. "Чистая" зона - помещения, где не проводят работу с биологическим материалом, персонал одет в личную одежду.

Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследования, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской или покрывают кафелем. Пол застилают релином или линолеумом. Такого рода отдел­ка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфи­цирующими растворами.

В каждой комнате должна быть раковина с водопровод­ной подводкой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором.

В одной из комнат оборудуют застекленный бокс - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником) для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для посевов, табурет, над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбокснике помещают шкаф для хранения стерильного материала. Окна и двери помещений "заразной" зоны должны быть герметичными. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха.

Лабораторное помещение оборудуется столами лаборатор­ного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.

Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача-бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим ровный рассеянный свет. Освещенность поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком или обивают железом. За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место размером 150´60 см.

Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной бактериологической работы, перечень которых дан в таблице 1.

Таблица 1.

Необходимые предметы для бактериологической работы

Дезинфекция

Дезинфекцией является уничтожение микроорганизмов в объектах внешней среды.

В микробиологических лабораториях дезинфекционные ме­роприятия используются очень широко. Оканчивая работу с заразным материалом, сотрудники бактериологических лабо­раторий производят профилактическую дезинфекцию рук и рабочего места.

Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (кал, моча, мокрота, различного вида жидкость, кровь) перед выбрасыванием его в канализацию.

Загрязненные патологическим материалом или культурой микробов градуированные и пастеровские пипетки, стеклян­ные шпатели и металлические инструменты тотчас после их употребления опускают в стеклянные банки с дезинфицирую­щим раствором, находящиеся на столе у каждого рабочего места.

Обязательной дезинфекции подлежат также использован­ные в работе предметные и покровные стекла, так как даже в фиксированном и окрашенном мазке иногда сохраняются жизнеспособные микроорганизмы, которые могут явиться источником внутрилабораторного заражения. Не обрабатывает­ся дезинфицирующими средствами только та посуда, в кото­рой выращивались микроорганизмы. Ее складывают в метал­лические бачки или биксы, пломбируют и сдают на автоклавирование.

Выбор дезинфицирующего вещества, концентрация его раствора, соотношение между количеством дезинфицирующего вещества и обеззараживаемого материала, а также про­должительность срока дезинфекции устанавливаются в зави­симости от конкретных условий, учитывающих в первую оче­редь устойчивость обеззараживаемых микробов, степень пред­полагаемого загрязнения, состав и консистенцию материала, в котором они находятся.

Дезинфекция рук после работы с заразным материалом и при попадании его на кожу. По окончании работы с заразным материалом руки профилактически дезинфицируют. Ватный шарик или марлевую салфетку смачивают 1% раствором хлорамина, протирают сначала левую, затем правую кисть руки в такой последовательности: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространст­ва, ногтевые ложа. Таким образом, сначала обрабатывают места наименее загрязненные, затем переходят к участкам кожи, загрязненным наиболее сильно. Протирают руки в течение 2 минут двумя тампонами последовательно. При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологиче­ским материалом в первую очередь дезинфицируют загряз­ненные участки кожи. С этой целью их покрывают на 3-5 минут ватой, увлажненной 1% раствором хлорамина, затем вату сбрасывают в бачок или ведро с отработанным ма­териалом, а руки обрабатывают вторым тампоном так же, как и при профилактической дезинфекции. После обработки хлорамином руки моют теплой водой с мылом. При работе с бактериями, образующими споры, обработка рук производится 1% активированным хлорамином. При попадании на руки заразного материала экспозицию дезинфицирующего ве­щества увеличивают до 5 минут.

Стерилизация

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-10 штук. Пастеровские пипетки по 3-15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2-2,5 см и длиной 50-70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерили­зуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобран­ном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микро­флорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) - 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, пред­варительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металличе­ские инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) сте­рилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лез­вия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомен­дуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные пет­ли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, сте­рилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не про­изошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Про­каливание в целом занимает 5-7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочка­ми, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нуж­ной величины. После этого каждый вид материала в отдель­ности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Из­делия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные ве­гетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в те­чение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофло­рой-в автоклаве при давлении 1,5-2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и сна­ружи пересыпают тальком для предохранения их от склеива­ния. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде по­мещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для даль­нейшей работы, складывают в металлический бак, пломбиру­ют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давле­нии 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производит­ся специально выделенным лицом под расписку. Режим сте­рилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на заражен­ность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с от­работанным материалом переносят на металлических под­носах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением. Стерилизацию кипячением про­изводят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы-в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром. Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилиза­ции материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обо­грев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда тем­пература в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование тре­щин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением. Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутрен­ний - стерилизационной камерой. В водопаровом котле про­исходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые прохо­дит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава гермети­чески привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомер­ное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для опре­деления давления, создающегося в стерилизационной камере. Нор­мальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показания­ми манометра и температурой имеется определенная зависи­мость (табл. 2).

Таблица 2.

Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Красная черта на шкале ма­нометра определяет максималь­ное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Пре­дохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерно­го повышения давления. Его уста­навливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нуж­но производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты - нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой ка­мере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилиза­ции, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, на­рушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом. Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измеритель­ную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: ниж­нюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю-на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на тру­бе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медлен­но ослабляют прижимные приспособления и открывают крыш­ку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации опреде­ляются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуще­ствляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром. Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколь­ко небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего кон­такта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых из­меняются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повтор­но, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод полу­чил название дробной стерилизации: обработку сте­рилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стери­лизациями материал выдерживают при комнатной темпера­туре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация. Тиндализация-дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60-65°С в течение 5 дней или при 70- 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатывае­мый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогрева­ниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров . Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзоток­синов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как сте­рилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), спо­собные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3-5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), за­держивающие взвешенные частицы, но пропускающие бакте­рии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживаю­щие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в ав­токлаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры разли­чаются по величине пор и обозна­чаются порядковыми номерами (табл. 3).

Таблица 3.

Бактериальные фильтры

Непосредственно перед употреб­лением мембранные фильтры сте­рилизуют кипячением. Фильтры по­мещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50- 60°С, чтобы предупредить их скру­чивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2-3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вы­нимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.

Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтро­вальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.

Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней-опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной ре­зиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.

Приготовление мазков

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают.

Исследуемый материал распределя­ют тонким слоем по поверхности хорошо обез­жиренного предметного стекла.

Мазки готовят из культур микробов, патологического ма­териала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной средой и из жид­кого патологического материала (моча, ликвор и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости на­носят бактериальной петлей на предметное стекло и круго­выми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.

Приготовление мазков из крови. На пред­метное стекло, ближе к одному из его концов, наносят кап­лю крови. Второе - шлифованное - стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно рас­пределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и оди­наковую толщину на всем протяжении.

Приготовление толстой капли. На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к выступающей капле крови. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр об­разующегося мазка соответствовал величине копеечной мо­неты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до высыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление мазка из вязкого мате­риала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг другу.

После этого свободные концы стекол захватывают 1 и 2 пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределенным материалом, занимающим большую площадь.

Приготовление мазка из культур с плотных питательных сред. На середину чистого, хорошо обезжиренного предметного стекла наносят каплю воды, в нее вносят бактериальную петлю с небольшим количеством исследуемой микробной культуры, так, чтобы капля жидко­сти стала слегка мутноватой. После этого излишек микроб­ного материала на петле сжигают в пламени и при­ступают к приготовлению мазка по вышеописанному способу.

Приготовление мазков из органов и тканей. Поверхность органа с целью обеззараживания прижигают накаленными браншами пинцета, делают по этому ме­сту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты. Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный при соскабливании материал распределя­ют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Для изучения взаимного расположения элементов ткани и находящихся в ней микроорганизмов делают мазки-отпе­чатки. Для этого вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают по­следовательно несколько раз по­верхностью среза к предметному стеклу, получая, таким образом, ряд мазков-отпе­чатков.

Высушивание и фиксация мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков. Нельзя фиксировать над пламенем мазки, содержащие возбудителей I – II групп патогенности.

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикла­дывают к тыльной поверхности левой кисти. При правиль­ном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.

Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют также химические вещества и соединения, приведенные в таблице 4.

Таблица 4.

Вещества для химической фиксации

Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.

Окраска мазков

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А.И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящей бумаги в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.

Окраска мазков красящей бумагой. На высу­шенный и фиксированный препарат наносят несколько ка­пель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2´2 см. В течение всего времени окрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется мето­дом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно сни­мают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь ма­зок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание произ­водят через фильтровальную бумагу, задерживающую части­цы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор краси­теля.

Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высу­шенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенный промежуток времени. Чаще всего для про­стой окраски применяют спирто-водный (1:10) фуксин Пфейффера, леффлеровскую метиленовую синьку и сафранин. Эозин, как кислая краска, упо­требляется только для окраски цитоплазмы клеток и подкраски фона. Кислый фуксин совершенно непригоден для окраски бактерий.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ - научно-практическое учреждение, выполняющее бактериологические, иммунологические и другие микробиологические исследования. В соответствии с дифференцированием микробиологии вообще и бактериологии как одной из ее отраслей существуют бактериологические лаборатории, имеющие разнообразные задачи и функции. Клинико-диагностические бактериологические лаборатории при больницах проводят исследования, необходимые для постановки или уточнения диагноза инфекционного заболевания, контролирующие эффективность лечения.

Специализация бактериологических лабораторий при больницах определяется профилем больницы (острые инфекционные заболевания, детские инфекционные заболевания, венерические заболевания, туберкулез и пр.). Бактериологические лаборатории при санитарно-эпидемиологических станциях, как и клинические лаборатории, занимаются диагностической работой, обслуживая больницы, не имеющие собственных лабораторий, проводят профилактическое обследование населения и санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов и воды.

Кроме медицинских, существует широкая сеть ветеринарных бактериологических лабораторий, выполняющих диагностические и профилактические исследования инфекционных заболеваний у животных (см. Ветеринарная лаборатория). Узкоспециализированными являются бактериологические лаборатории, выполняющие контрольные функции, как, например, бактериологические лаборатории при водопроводных станциях, контрольные лаборатории на предприятиях, выпускающих вакцины, сыворотки и другие бактерийные препараты. Специальные бактериологические лаборатории организованы при дезинфекционных учреждениях. Их задачей является бактериологический контроль качества проведенной дезинфекции. Наряду с бактериологическими лабораториями медицинского и ветеринарного профиля существуют специализированные бактериологические лаборатории, обслуживающие нужды пищевой промышленности (винодельческие, хлебопекарные, пивоваренные и прочие предприятия), сельского хозяйства и пр. В отличие от перечисленных бактериологических лабораторий, решающих практические задачи, в структуре соответствующих научно-исследовательских институтов предусмотрены бактериологические лаборатории разных профилей, предназначенные для решения различных исследовательских задач. Бактериологические лаборатории могут быть стационарными и передвижными. Последние используются для санитарно-противоэпидемического обслуживания воинских частей, а также в экспедиционных, полевых условиях (см. Лаборатория , в военно-полевых условиях). Кроме передвижных, в войсках имеются и стационарные лаборатории. Специфика исследований, проводимых в бактериологических лабораториях, обусловливает структуру лабораторий и режим работы в них.

Основным требованием, предъявляемым к бактериологическим лабораториям и вытекающим из специфики ее работы, является создание условий, обеспечивающих выполнение исследований в максимально стерильных условиях и гарантирующих персонал и окружающих от возможного заражения. Структура бактериологической лаборатории включает: собственно лабораторию и ряд дополнительных к ней подразделений. К ним относятся: средоварня, моечная, препараторская, стерилизационная и виварий (см.). Перечисленные подразделения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших бактериологических лабораториях виварий и специальная препараторская отсутствуют, а средоварня и стерилизационная могут быть объединены в одном помещении.

Устройство и оборудование

Рис. 5. Стеклянные шпатели. Рис.6. Шпатель из платиновой проволоки.

Помещение бактериологических лабораторий должно быть светлым и достаточно просторным. Стены должны быть выкрашены масляной краской, а пол - не иметь щелей. Окна лаборатории следует ориентировать на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. В бактериологической лаборатории должна быть умывальная раковина или умывальник, над которыми на полке помещается бутыль с раствором для дезинфекции рук. Рабочий стол бактериолога, по возможности, располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку (при отсутствии газовой - спиртовую). Обязательным оборудованием рабочего места является банка для пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой к-ты), закрывающийся фарфоровый или стеклянный сосуд для ваты, колодка - держатель для бактериальной петли, набор бактериальных стандартов, штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также покровные стекла. Обычно используют предметные стекла размером 26 X X 76 мм и толщиной 1 - 1,2 мм, покровные стекла 18 х 18 или 20 х 20 мм. Бактериологическая лаборатория должна быть снабжена металлическими подносами для переноса чашек Петри, оцинкованными ведрами или баками для сброса инфицированной посуды или инвентаря. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. Рабочий стол не должен быть загроможден лишними предметами. Обычно в бактериологической лаборатории оборудуют дополнительный небольшой стол для окраски фиксированных препаратов. На таком столе располагают: набор необходимых красителей и реактивов в колодке с пипетками и резиновыми баллончиками (рис. 1), эмалированный кювет или кристаллизатор с подставкой для препаратов, проволочный пинцет или пинцет Корне (рис. 2) для фиксации предметных стекол, листы фильтровальной бумаги для удаления жидкости с промытых препаратов, промыватель (рис. 3) или бутыль с водой. Бактериологическая лаборатория оснащается разнообразной посудой, необходимой для проведения исследований. Кроме обычной химической посуды (цилиндры, колбы, мензурки, мерные пипетки и пр.), необходима специальная, предназначенная для бактериологических и иммунологических анализов посуда: 1) стеклянные чашки Петри, используемые для выращивания бактерий на плотных средах и получения изолированных бактериальных колоний; 2) бактериальные матрацы (рис. 4) - плоские склянки (размером 22 x 17 x 5 см), которые используются для выращивания большого количества бактерий; 3) пробирки Ру с перетяжкой для выращивания бактерий на косяках картофеля; 4) вассермановские пробирки длиной 90 мм и внутренним диаметром 9-10 мм для постановки реакции связывания комплемента и реакции агглютинации; 5) преципитационные пробирки длиной 90 мм и диаметром 3-5 мм для постановки реакции преципитации; 6) бактериальные пробирки, служащие для выращивания бактерий на твердых и жидких питательных средах; 7) пастеровские пипетки, используемые для посевов жидких материалов, разведения жидкостей капельным способом, нанесения красителей и пр.; 8) пипетки Мора или пипетки с шарообразным расширением в средней части для засева инфицированного жидкого материала, а также автоматические пипетки или пипетки с резиновыми грушами, исключающие насасывание материала ртом. Для выращивания культур в жидких питательных средах, хранения и розлива питательных сред, реактивов и пр. применяется обычная лабораторная посуда. Посуда, используемая в бактериологической лаборатории, должна быть предварительно выщелочена, для чего ее обычно кипятят в 1-2% растворе соляной кислоты. Дезинфекцию бактериологической посуды, в которой культивируют микробы, следует осуществлять только при помощи высокой температуры без применения каких-либо дезинфицирующих средств, так как присутствие последних даже в виде следов может в дальнейшем затормозить развитие микробов. Посевы микроорганизмов в бактериологической лаборатории производят с помощью бактериологических петель, стеклянных или платиновых шпателей (рис. 5 и 6). Выращивание бактерий осуществляется в воздушном термостате (см.), а в крупных бактериологических лабораториях - в специальных термостатных комнатах.

При необходимости точного контроля температуры и относительно кратковременном выращивании бактерий или при постановке иммунологических реакций удобно использовать водяные ультратермостаты. Каждая бактериологическая лаборатория, где занимаются исследованием анаэробов, должна быть снабжена анаэростатом (см.), эксикаторами и вакуумными насосами для удаления воздуха. Последние используются также при проведении фильтрования. Для достижения наилучших асептических условий, необходимых при проведении посевов, выделении или пересеве культур, бактериологические лаборатории оснащают специальными застекленными боксами с предбоксниками. В боксе имеются газовая горелка, сосуд с дезинфицирующим раствором, а там, где возможно, бактерицидная увиолевая лампа. В случае отсутствия стационарного бокса при проведении некоторых работ, требующих высокой степени асептики, можно пользоваться переносным настольным боксом (см. Боксы, микробиологические).

Рис. 7. Автоматический счетчик колоний с телевизионным контрольным приспособлением: 1 - чашка Петри с выросшими колониями; 2 - электронное табло с цифрами, указывающими количество колоний в чашке Петри; 3 - телеэкран для наблюдения за увеличенным изображением колоний, выросших в чашке Петри.

Бактериальные культуры, лечебные и диагностические сыворотки, фаги и другие субстраты биологического характера (сыворотки, растворы пептонов и пр.) хранят в холодильнике. Бактериальные культуры полагается сохранять в запаянных пробирках или ампулах, для чего в бактериологических лабораториях необходимо иметь горелку для запаивания или обычную паяльную лампу. Обязательной принадлежностью любой бактериологической лаборатории является микроскоп (см.). Для большинства исследований используют микроскоп МБИ-3 и осветители. Научно-исследовательские бактериологические лаборатории оснащены также фазово-контрастными, люминесцентными и электронными микроскопами. Для количественного учета колоний бактерий, выросших на чашках Петри, используют счетчики разных систем. Одним из таких счетчиков является автоматический счетчик со сканирующим устройством и телевизионным контрольным приспособлением, позволяющим подсчитывать до 500 чашек в час (рис. 7). Важными элементами оборудования бактериологических лабораторий являются аппараты для встряхивания, используемые в тех случаях, когда необходимо в течение определенного времени обеспечить перемешивание и встряхивание материала (дефибринирование крови, гомогенизация материала и пр.). Для осаждения плотных частиц (микробные клетки, клетки тканей, взвесь исследуемого материала), находящихся в жидкости, используют центрифуги (см.). Для проведения большинства исследований наиболее часто применяют центрифуги, вращающиеся со скоростью 3000 - 3500 об/мин. При отсутствии электрических центрифуг пользуются центрифугами с ручным приводом.

Деятельность бактериологических лабораторий во многом зависит от соблюдения основного требования - работы в асептических условиях со стерильными объектами (инструменты, питательные среды, посуда). Поэтому в оснащении бактериологических лабораторий значительное место занимает аппаратура для стерилизации (см.). В каждой бактериологической лаборатории имеется автоклав (см.), аппарат Коха, печь Пастера (см. Пастера печь), аппарат для свертывания сыворотки. Для стерилизации кипячением применяют обычные стерилизаторы (см.), нагреваемые от электрической сети или другими средствами.

Для стерилизация жидких субстратов, изменяющихся при воздействии температуры, используют бактериальные фильтры (см.). Высушивание увлажняемых объектов (посуда, инструменты) после стерилизации паром или под давлением производят в сушильных шкафах (см.). Оснащение бактериологических лабораторий, необходимое для приготовления наиболее употребительных питательных сред, кроме указанной аппаратуры, включает приспособления для розлива сред, наборы реактивов и посуды для проведения некоторых химических анализов (определение аминного азота, триптофана, хлоридов и пр.), а также приборы и реактивы для определения pH среды; универсальный индикатор, индикаторы и компаратор Михаэлиса или потенциометр.

Работа с животными в бактериологических лабораториях проводится в специальном помещении - виварии. В собственно бактериологических лабораториях опыты с животными не допускаются. Для проведения основных работ с животными (взятие крови, постановка биологических проб, диагностических реакций и пр.) необходимо иметь: весы для взвешивания мышей, свинок и кроликов, станки или приспособления для их фиксации (рис. 8), набор шприцев, номера для метки животных (или красители), депиляторы.

Специфика бактериологической работы определяет особенно высокие требования к чистоте помещений бактериологических лабораторий. Особое значение имеет чистота воздуха, отсутствие в нем пыли. Уборку помещений бактериологических лабораторий лучше производить в конце рабочего дня или за несколько часов до начала работы, так как пыль, поднятая в воздух при уборке, повышает содержание в нем микробов и затрудняет возможность стерильной работы. Целесообразно после уборки помещений перед работой подвергнуть их облучению увиолевыми бактерицидными лампами в течение 0,5-1 часа. В целях профилактики внутрилабораторного заражения и возможности распространения инфекции при работе в бактериологических лабораториях необходимо выполнять следующие основные правила: 1) все лица, находящиеся в лаборатории, должны быть в халатах; 2) не допускаются излишние разговоры и хождения; 3) каждый работник должен пользоваться только закрепленным за ним рабочим местом; 4) в бактериологической лаборатории запрещается прием пищи и курение; 5) при работе с заразным материалом необходимо пользоваться инструментами (пинцетами, иглами, крючками) и ни в коем случае не прикасаться к нему руками; весь инвентарь, находившийся в контакте с заразным материалом, подлежит стерилизации или уничтожению; 6) при отсасывании жидкого материала рекомендуется пользоваться резиновыми грушами; пипетки должны быть закрыты ватными пробками; 7) переливание инфицированных жидкостей из сосуда в сосуд производят над лотком или кристаллизатором, наполненным дезинфицирующей жидкостью; 8) всю работу, связанную с посевами, пересевами, выделением культур и приготовлением препаратов из инфицированного материала, проводят у горелки, обжигая при этом края пробирок, петли, шпатели и пр.; 9) пробирки, колбы, флаконы и пр., куда в процессе работы помещается инфицированный материал, немедленно надписываются с указанием характера материала, названия и номера культуры и даты; 10) если заразный материал попал на окружающие предметы, необходимо немедленно провести тщательную дезинфекцию: залить это место дезинфицирующим раствором, а затем, если это возможно, прожечь тампоном с горящим спиртом; 11) предметы и материалы, инфицированные во время работы, регистрируют, собирают в баки или ведра, закрывают, запечатывают и в тот же день стерилизуют; 12) культуры, если это необходимо, хранят в агаровых столбиках под маслом в запаянных пробирках с этикетками; 13) регистрация и учет всех культур, а также зараженных в ходе работы животных ведется в журнале по специальной форме.

фото с сайта lentachel.ru

Всего сто лет назад заражение во время научных исследований считалось практически неизбежным. Многие учёные подвергали свой организм смертельному риску, изучая микробы и бактерии, о природе которых мало что знали. Сегодня большинство опасных микроорганизмов, окружающих нас, описаны и изучены, более того, предусмотрены специальные медицинские изделия для бактериологических лабораторий, использование которых с 99% вероятностью защищает исследователей от любых профессиональных рисков.

Все объекты, с которыми работают сотрудники бактериологической лаборатории, насыщены патогенной микрофлорой. Чтобы поддерживать в помещении здоровую среду, избежать прямого контакта с заражённым материалом, применяют мебель, одежду и посуду с усиленными барьерными и противомикробными свойствами.

Герметично закрываемые застеклённые и металлические шкафы и боксы, удобные для дезинфекции лабораторные столы, стерилизационная и автоклавная техника, и запирающийся рефрижератор - предметы, обеспечивающие безопасность людей, проводящих исследования инфицированных образцов.

Вся посуда, применяемая для хранения проб: колбы, градуированные стаканы, - герметично закрываются, чтобы избежать распространения микробов в воздухе лаборатории.

Для изготовления ёмкостей задействуют особое небьющееся стекло или пластик повышенной прочности. Двойные стенки, особая устойчивая форма дна, резиновые элементы на крышках, подносы и кюветы создают наилучшие условия для изоляции таких опасных соседей, как менингококки, стрептококки, стафилококки, бациллы и клостридии.

Перед началом исследований персонал надевает специальную одежду: защитный халат, маску, очки. Для работы с очень опасными веществами применяют прорезиненные фартуки или специальные халаты с влагоотталкивающей пропиткой.

Правильная своевременная обработка воздуха ультрафиолетовыми облучателями и бактерицидными лампами, использование проверенных модификаций моечной, снабжение всех сотрудников полным комплектом защитной одежды - общепринятый стандарт, отступление от которого административно, а в случае тяжёлых последствий и уголовно наказуемо.

Комплексное оснащение и реализация всех мер предосторожности помогают сберечь здоровье сотрудников, снизить профессиональную заболеваемость, обеспечить высокую результативность исследований: замечено, что применение надёжных, проверенных средств защиты снижает тревожность, способствует более быстрым и эффективным действиям.

Работа с возбудителями заразных болезней требует, чтобы помещения лаборатории размещались в отдельном здании либо были изолированы от больничных палат, пищевых блоков. Диагностические лаборатории должны иметь два входа: один – для сотрудников, другой – для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно. Помещения лаборатории делят на «заразную» и «чистую» зоны и располагаются по ходу выполнения анализов.

«Чистая» зона лаборатории включает:

1. Комнату для верхней одежды.
2. Помещение для подготовительных работ (препараторская, моечная для приготовления и розлива питательных сред и др.)
3. Стерилизационная.
4. Комната с холодильником для хранения питательных сред и диагностических препаратов.
5. Комната для отдыха и приема пищи.
6. Комната для работы с документацией.
7. Подсобные помещения.
8. Туалет.

В «заразной» зоне размещают:

1.Комнату для приема и регистрации материала, поступающего на исследование.

3.Комнаты для проведения бактериологических исследований.

4.Комнаты для проведения серологических исследований.

5.Помещение для люминисцентной микроскопии.

6.Комната для проведение зооэнтомологиеских работат.

7.Термостатная комната и автоклавная.

Помещения, где проводится работа с живыми организмами, оборудуются бактерицидными лампами.

Задача медицинской микробиологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления степени микробного загрязнения внешней среды и различных объектов.

Лабораторная комната предназначена для проведения микробиологических исследований. Она должна быть просторной и светлой. Стены красят светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы- пластиком или стеклом, что удобно для влажной уборки и дезинфекции. В лабораторной комнате оборудуют рабочие столы для врача и лаборанта, место для окраски препаратов, термостат, холодильник, центрифугу, микроскоп, шкафы, раковину с подводкой горячей и холодной воды, газовые горелки (при отсутствии газа работают со спиртовыми горелками).

Число лабораторных комнат определяется объемом работы лаборатории. В крупных лабораториях выделяют отдельные комнаты для работы с различными видами возбудителей.

Рабочий стол устанавливают у окна, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе размещают горелку, бактериологические петли, банки с дезинфицирующим раствором и ватой.

Перед началом работы на столе размещают все необходимое для проведения исследования. Горелку устанавливают на расстоянии, равном предплечью работающего, т. е. в позиции, исключающей лишние движения во время работы. Размер пламени в горелке и правильное свечение регулируют до начала работы.

В термостате при проведении обычных исследований температура должна быть 37°С. В больших лабораториях может быть оборудована специальная термальная комната. Температуру ежедневно регистрируют.

Рис. 1 Сухожаровой шкаф

В холодильнике держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и пр.

Центрифугу используют для отделения плотных частиц от жидкости (например, эритроцитов от сыворотки).

В шкафах держат штативы, посуду, сухие питательные среды, реактивы и т. п.

Около раковины должны находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

Бокс - строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеспложивание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. Подача в бокс через приточно-вытяжную вентиляцию обеззараженного воздуха определенной температуры и влажности является лучшим способом обеспечения нужных условий для работы. Обычно в боксе работают два человека. Входят в бокс через предбоксник, в котором переодеваются (халат, тапочки, шапочка, маска) и переходят в бокс через вторую дверь.

В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

Помещение для приготовления питательных сред должно быть рядом с моечной и стерилизационной. В этой комнате должна быть раковина с подводкой горячей и холодной воды, дистиллятор, плита (газовая или электрическая), шкафы или стеллажи для хранения сухих питательных сред, химических реактивов, стерильной посуды.

Моечная – комната для мытья и обработки посуды, которая должна иметь раковину (с холодной и горячей водой) и плиту. Моечную оборудуют столами, стеллажами, снабжают приспособлениями для мытья посуды: моющими средствами, ершами, тряпками.

В стерилизационной находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательных сред и обеззараживания отработанного материала: автоклавы, сушильный шкаф и др.

При наличии отдельной препараторской комнаты ее используют для подготовки, упаковки посуды и другой подсобной работы.

В регистратуре или части помещения, ее заменяющей, принимают и регистрируют материал, поступающий для исследования, и выдают заключения микробиологического исследования.

Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных, имеется только в больших лабораториях.