Virusten eristäminen kanan alkioissa. Virusten viljely kehittyvissä kanan alkioissa Kanaalkiot virusinfektioiden diagnosoinnissa

Kanaalkiot ovat erittäin halpa ja kätevä järjestelmä influenssavirusten viljelyyn. Lähes kaikki sekä ihmis- että eläinperäiset viruskannat lisääntyvät alkioissa tavalla tai toisella. Tähän järjestelmään parhaiten sopeutuneet laboratoriokannat tuottavat melko korkeat tiitterit alkioissa tai 10-10 PFU alkiota kohden). Lisäksi alkio on eristetty ulkoisesta ympäristöstä, joten viruksen ei tarvitse lisääntyä siinä. luoda erityisissä steriileissä olosuhteissa.

Virus ruiskutetaan yleensä munan nesteellä täytettyyn allantoisonteloon, josta se voi tunkeutua korioallantoiskalvon läpi ja infektoida sen muodostavat solut. Viruksen jälkeläiset vapautuvat allantoisnesteeseen ja voidaan helposti poistaa munasta imemällä tämä neste pois. Jotkut kannat V erityisesti uudet luonnolliset isolaatit sekä virukset, kuten KANSSA eivät lisääntynyt hyvin suonikalvolla, mutta lisääntyvät, kun ne ruiskutetaan suoraan lapsivesionteloon; tässä tapauksessa virus pääsee käsiksi alkion eri kudoksiin, ja tuloksena olevat jälkeläiset vapautuvat lapsiveteen, joka voidaan uuttaa erikseen.

Virus lisääntyy parhaiten 10–12 päivän ikäisissä alkioissa. Tuoreet hedelmöitetyt munat tulee ostaa ja inkuboida vaaditun ajan laboratoriossa. Tätä varten sinulla ei tarvitse olla erikoislaitteita, mutta inkubaattori on erittäin kätevä. Munaa voidaan kuitenkin inkuboida onnistuneesti tavallisessa termostaatissa kosteassa ilmassa 37 °C:ssa, jos niitä käännetään säännöllisesti. Munien luokka ei ole erityisen tärkeä, mutta joissakin tapauksissa on tärkeää sulkea pois mahdollisuus munan tarttumiseen muilla mikro-organismeilla; Jotkut toimittajat myyvät erityisiä saastumattomia munia.

Ennen tartuntaa sinun tulee varmistaa, että munat ovat todella hedelmöittyneet. Voit tehdä tämän katsomalla munaa lähellä kirkasta valonlähdettä pimeässä huoneessa. 4-5 päivää hedelmöityksen jälkeen alkion tulee olla selvästi näkyvissä.

Laboratoriokantojen standardisiirrossa virussiirroste on yleensä näyte infektoituneesta allantoisnesteestä tai viljelynesteestä. Pääsääntöisesti näytteet laimennetaan Hanksin suolaliuoksella viruspitoisuuteen 10-10 PFU/ml ennen käyttöä, koska suuren virusmäärän vieminen munaan edistää DIV:n muodostumista. Jos laimennettu virus on säilytettävä ennen tartuntaa, laimennusliuokseen on lisättävä gelatiinia. Luonnollisesti on varmistettava infektioon käytetyn viruksen steriiliys; tapauksissa, joissa tämä on vaikeaa, siirrosteeseen lisätään antibiootti gentamysiini.

Näihin menetelmiin kuuluu homogenisoinnin käyttö näytteiden jauhamiseen, hidas sentrifugointi niiden kirkastamiseksi ja laimentamattoman supernatantin ruiskuttaminen lapsivesionteloon.

Alkioiden infektio.

I. Viruksen vieminen allantoisonteloon

• 1. Aseta munat kyljelleen ja pyyhi pinta alkoholilla sterilointi tartuntakohdan ympärillä olevalle alueelle.
• 2. Kuoriin tehdään pieni reikä leikkuulautasella varustetulla hammasporalla. Reiän on oltava riittävän syvä, jotta neula voidaan pistää sisään. varten injektiot, mutta on suositeltavaa olla vahingoittamatta kuoren sisäkalvoa.
• 3. Käyttämällä ruiskua, jossa on neula nro 25, 0,1 ml virusta inokuloidaan allantoisonteloon työntämällä neula suoraan kuoren alle.
• 4. Kuoren reikä tiivistetään pienellä määrällä sulatettua vahaa.
• 5. Tartunnan saaneita munia inkuboidaan termostaatissa kosteassa ympäristössä terävä pää alaspäin. Munaa ei tarvitse kääntää inkuboinnin aikana.

II. Viruksen injektio lapsivesionteloon

• 1. Munan tylppä pää steriloidaan pyyhkimällä alkoholilla ja tehdään pieni reikä kuvan osoittamalla tavalla.
• 2. Muna asetetaan lähelle kirkasta valonlähdettä pimeään huoneeseen niin, että alkio on näkyvissä.
• 3. Neula nro 23, 4 cm pitkä, työnnetään tehtyyn reikään ja sitten terävällä liikkeellä alkion suuntaan lapsivesionteloon. Tässä tapauksessa lisätään 0,1 ml virusta ja neula poistetaan varovasti.
• 4. Kuoren reikä suljetaan sulatetulla vahalla ja munia inkuboidaan kuten edellä.

Inkubointiaika.

Optimaalinen inkubaatioaika, joka vaaditaan maksimaalisen virussaannon saamiseksi, riippuu tietystä kannasta, ja se on määritettävä kokeellisesti. Joidenkin influenssa A -viruskantojen, esimerkiksi lintupentikkoviruksen, enimmäissaanto saavutetaan 24-26 tunnin kuluttua, kun taas useimmat ihmisen influenssa A -viruksen kannat sekä tyypin B ja virukset KANSSA vaativat 48-72 tuntia inkubaatiota.

Viruskokoelma.

Ennen kuin yrität poistaa virusta sisältävää nestettä munasta, on suositeltavaa jäähdyttää muna 4-18 tuntia 4°C:ssa tai 30 minuuttia -20°C:ssa. Jäähtyessään alkio kuolee ja ympäröivät verisuonet kapenevat. Näin ollen mahdollisuus saada virusta sisältävä neste punasoluilla, jotka voivat sitoa osan viruksesta ja siten vähentää sen saantoa, vähenee merkittävästi. Jos punasolujen kontaminaatiota ei voida välttää, virushäviö voidaan minimoida inkuboimalla materiaalia 30 minuuttia 37 °C:ssa. Näissä olosuhteissa virionin neuraminidaasi tuhoaa punasolureseptorit, joihin virus sitoutuu, ja se vapautuu.

I. Allantoisnesteen kerääminen

• 1. Aseta munat telineeseen tylppä pää ylöspäin ja steriloi niiden pinta alkoholilla.
• 2. Munan tylppä pää avataan joko steriileillä pinseteillä tai erikoislaitteella. Ilmapussin ympärillä oleva kuori poistetaan, mikä mahdollistaa pääsyn allantoisonteloon.
• 3. Revi korioallantoiskalvo steriileillä tylppäkärkisillä pinseteillä ja siirrä se munan reunaan.
• 4. Alkio ja keltuaispussi siirretään varovasti pois pinseteillä ja allantoisneste imetään ulos leveäpäisellä pipetillä. Keskikokoisesta munasta saadaan 7-10 ml vaaleankeltaista nestettä. Keltuaisen sekoittuminen allantoisnesteeseen häiritsee viruksen lisäpuhdistumista, joten kun valinta Keltuaispussin vaurioitumista tulee välttää. Jos virus on tarkoitettu biokemiallisiin tutkimuksiin, esimerkiksi virionientsyymien aktiivisuuden analysointiin, allantoisneste tulee kerätä 0 °C:ssa.
• 5. Allantoisneste kirkastetaan sentrifugoimalla 10 minuuttia 10 000 asteessa g ja säilytä supernatantti 4 tai -70 °C:ssa.

II. Lapsivesien kerääminen

• 1. Munan pinta steriloidaan ja tylppä pää avataan edellä kuvatulla tavalla. Poista mahdollisimman paljon kuorta, jotta munan sisältö voidaan helposti poistaa.
• 2. Korioallantoinen kalvo rikotaan ja munan sisältö kaadetaan steriiliin petrimaljaan. Tässä tapauksessa lapsivesiontelon tulee pysyä ehjänä.
• 3. KANSSA Käyttämällä ruiskua, jossa on neula nro 25, sisältö poistetaan lapsivesiontelosta mahdollisimman täydellisesti.
• 4. Lapsivesi kirkastetaan ja varastoidaan samalla tavalla kuin allantoisneste.

Odotettu tulos.

Viruksen lisääntymisen intensiteetti alkioissa riippuu tietystä kannasta. Villit kannat antavat aluksi hyvin alhaiset tiitterit, mutta useiden alkioiden siirrosten jälkeen tiitteri nousee merkittävästi. Erilaisten alkioiden lisääntymiseen soveltuvien laboratoriokantojen saanto vaihtelee myös merkittävästi, mutta useimmiten 2000-5000 ja joskus jopa 20 000 HAE/ml virusta kerääntyy allantoisnesteeseen. On selvää, että sopeutuminen lisääntymiseen alkioissa liittyy Kanssa geneettisten varianttien valinta, joten sinun pitäisi olla V Muista, että alkioissa siirrettyjen kantojen yksityiskohtaisten geneettisten ja biokemiallisten tutkimusten tulokset eivät välttämättä kuvaa alkuperäistä isolaattia.

Virusten eristäminen koe-eläimissä.

Koe-eläinten valinta riippuu viruksen tyypistä. Laboratorioeläimet ovat biologinen malli. Joskus on tarpeen suorittaa 3-5 "sokeaa", oireetonta siirtoa, ennen kuin virus on mahdollista mukauttaa laboratorio-olosuhteisiin. Laboratorioeläimet eivät kuitenkaan ole herkkiä joillekin viruksille, jolloin on tarpeen käyttää luonnostaan ​​herkkiä eläimiä. Kuten esimerkiksi sikarutto ja hevosten tarttuva anemia.

Koe-eläinten tartunnan tarkoitus:

1. Tutkia taudin patogeneesiä;

2. Eristetään virus patogeenisestä materiaalista;

3. Immuuni- ja hyperimmuuniseerumien tuotanto;

4. Rokotteiden tuotanto;

5. Virusten ylläpito laboratorio-olosuhteissa;

6. Titraus viruksen määrän määrittämiseksi tilavuusyksikköä kohti;

7. Biologinen malli neutralointireaktion vaiheistamiseksi;

Koe-eläinten infektointimenetelmän valinta riippuu viruksen tropismista. Siten, kun viljellään neurotrooppisia viruksia, eläimet infektoituvat aivoihin; hengitys intranasaalisesti, intratrakeaalisesti; dermatrooppinen - ihonalaisesti ja intradermaalisesti.

Infektio suoritetaan aseptisten ja antiseptisten sääntöjen mukaisesti.

On monia tapoja viedä virusta sisältävää materiaalia eläinten kehoon:

Ihonalainen; - aivojen sisäinen; - Ihonsisäinen;

vatsaontelonsisäinen; - Lihaksensisäinen; - Silmänsisäinen;

Laskimonsisäinen; - Intranasaalinen; - Ravitsemus;

Infektoinnin jälkeen eläimet merkitään, pannaan eristettyyn laatikkoon ja niitä tarkkaillaan 10 päivän ajan. Eläimen kuolemaa ensimmäisenä päivänä tartunnan jälkeen pidetään epäspesifisenä, eikä sitä oteta huomioon myöhemmin.

3 merkkiä viittaavat infektion tehokkuuteen:

Kliinisten oireiden esiintyminen

Eläimen kuolema

Patoanatomiset muutokset (elimen koko, muoto, väri ja koostumus).

Kanan alkio on hedelmöitetty kananmuna, jossa alkio (alkio) kehittyy. Virusten viljely kanan ja viiriäisen alkioissa on viime aikoina yleistynyt yhtenä yksinkertaisimmista ja luotettavimmista menetelmistä monien virusten ja joidenkin bakteerien - Brucella, Rickettsia, Vibrio - viljelyyn ja diagnosointiin.

Monia ihmisten ja eläinten viruksia voidaan viljellä kehittyvissä kanan alkioissa. Alkiokudos, erityisesti alkion kalvot, joissa on runsaasti ituepiteelikudoksia, on suotuisa ympäristö monien virusten lisääntymiselle. Virukset, joilla on epiteliotrooppisia ominaisuuksia (isorokko, ILT jne.), kehittyvät onnistuneesti korioallantoiskalvolla aiheuttaen makroskooppisesti näkyviä muutoksia. Erilaiset myksovirusten edustajat (influenssa, Newcastlen tauti, koiran penikka jne.), tarttuva keuhkoputkentulehdus, ankanpoikien hepatiitti, arbovirukset jne. lisääntyvät hyvin alkiossa, kun materiaali viedään allantoisonteloon. Joitakin viruksia voidaan viljellä menestyksekkäästi keltuaisessa pussissa.

Edut:

1. Taloudellisesti kannattavaa, lisäksi munat ovat helposti saatavilla;

2. Kehittyvistä kanan alkioista puuttuu suojamekanismeja, koska immuunijärjestelmä ei ole vielä kehittynyt;

3. Munankuoret estävät ympäristön bakteereja ja viruksia tunkeutumasta sen läpi;

Virusten viljelyyn ja eristämiseen kanan alkioissa tarvitaan hyvin yksinkertainen laitteisto - tavallinen termostaatti tai inkubaattori.

Ehdot:

1. Munat on saatu tiloilta, joiden tiedetään olevan vapaa tartuntataudeista.

2. Kanojen alkioita on parempi hankkia valkoisista kanarotuista (Leghorn, Russian White), koska ne kestävät paremmin manipulointia eivätkä kuole pieniin vammoihin. Lisäksi niiden kuori on valkoinen ja läpinäkyvämpi kuin muiden rotujen, ja sen läpi on helpompi nähdä, mikä on kätevää katseltavissa ja havainnoissa heidän kanssaan työskennellessään.

3. Haudontaa varten valitaan hedelmöitetyt munat, jotka on munittu enintään 10 päivää sitten;

4. Ota kontaminoitumattomat munat, koska niitä ei voi pestä ennen inkubointia ja likaiset munat ovat vähemmän näkyvissä katsottaessa (ovoskooppi) ja niiden kanssa työskennellessä alkio voi saada tartunnan käsittelyprosessin aikana;

Munat haudotaan inkubaattorissa tai termostaatissa, jossa on vesilämmitys ja ilma, ja termostaatissa inkuboinnin aikana munat on käännettävä 2-3 kertaa päivässä ja kaasunvaihdon parantamiseksi otettava pois 5-10 minuuttia ilmaan. Tietyn kosteuden ylläpitämiseksi termostaattiin asetetaan astia, jossa on vettä haihdutusta varten; termostaatin lämpötilan tulee olla 38°.

Alkion kehitys tapahtuu jo ensimmäisenä inkubaatiopäivänä, aivot ja luuranko muniutuvat. Kanaalkion rakenne 7-9 päivän iässä(katso muistikirja).

Infektioon käytetään useimmiten 7-12 päivän ikäisiä alkioita. Työskentely kanan alkioiden kanssa suoritetaan steriilissä huonelaatikossa, jossa noudatetaan tiukimmin aseptista.

Kanaalkioiden tartuttamisen tarkoitus on:

1. Eristä vuori patenttimateriaalista;

2. Rokotteiden tuotanto;

3. Viruksen ylläpito laboratoriossa;

4. Virusten titraus;

5. Biologinen malli neutralointireaktion vaiheistamiseksi;

6. Virushäiriöiden ja interferonin tuotannon tutkimus; Kanan alkioiden infektio:

Infektiota varten on valittava eläviä alkioita, joilla on hyvin määritelty liikkuvuus. Ennen tartuntaa kaikki alkiot tutkitaan huolellisesti pimennetyssä huoneessa ovoskoopilla.

Alkioiden sytytyksen aikana ennen tartuntaa kuoreen hahmotellaan yksinkertaisella lyijykynällä puga (ilmaontelo), suurten verisuonten kulku ja alkion esityspaikka, eli kuoren alue, jossa alkio on lähimpänä alkiota. se. Mopsin merkintä, alkion esittelypaikka ja suurten verisuonten kulku ovat sitten ohjenuorana valittaessa paikkaa viruspitoisen materiaalin levittämiselle tartuntahetkellä.

Infektoitaviksi valitut kanan alkiot siirretään laatikkoon, jossa niitä käsitellään. Ennen tartuntaa materiaalin syöttökohdassa oleva kuori käsitellään kahdesti joditulla alkoholilla ja poltetaan. Infektion annos on 0,1-0,2 cm.

Viruksen tyypistä ja tartunnan tarkoituksesta riippuen niitä on erilaisia menetelmät virusta sisältävän materiaalin tuomiseksi:

1) Korioallantoiskalvon infektio , 7-12 päivän ikäisiä alkioita käytetään neurotrooppisten, dermatrooppisten ja joidenkin pantrooppisten virusten (isorokko, enkefalomyeliitti, ILT, suu- ja sorkkatauti, raivotauti, rutto jne.) eristämiseen ja viljelyyn. Infektiovaihtoehtoja on kolme:

a) avaa puga ja leikkaa se saksilla, irrota subshell-kalvo ja levitä materiaalia korioallantoiskalvolle (CAO). Munassa oleva reikä suljetaan sitten steriilillä lasikorkilla ja korkin reunat vahataan;

b) leikkaa kuoresta noin 1 cm:n sivun pituinen kolmio neulaviilalla (viilalla) tai sahalaitaisella skalpellilla pujan reunasta alkion esittelypuolelle, poista kuoren osa ja substarlar kalvo pinseteillä ja esittele materiaali. Reikä peitetään steriilillä peitelasilla ja reunat parafinoidaan tai suljetaan steriilillä teipillä.

c) pieni, noin 0,5 cm:n alue kuoresta poistetaan skalpellilla alkion esittelypaikasta, sitten tältä alueelta poistetaan kuoren alakalvo pinseteillä tai neulalla ja materiaali ruiskutetaan. Jos materiaali ei mahdu hyvin munanonteloon, voit pumpata ilmaa munasta kumipallolla munan kuoressa olevan reiän kautta, jolloin munan kohdalle muodostuu keinomuna. paikka, johon materiaali syötetään, ja sitten materiaali on helppo lisätä. Kuoren reikä peitetään liima-laastareilla tai vahataan.

2) Infektio allantoisontelossa. Tämä tartuntamenetelmä on hyvin yksinkertainen ja sitä käytetään monien virusten eristämiseen. Infektiota varten otetaan 10-11 päivän ikäisiä alkioita. Infektiovaihtoehtoja on kaksi:

a) infektio suoritetaan pugan läpi leikkaamatta sitä pois. Mittaa neulalla etäisyys pugan yläosasta pugan reunaan, joka on merkitty lyijykynällä kuoreen, ja työnnä neula merkittyyn syvyyteen ja syvennä vielä 0,5 cm korioallantoisen kalvon lävistämiseksi;

b) materiaali työnnetään neulalla kuoressa olevan puhkaisun kautta alkion esityspaikassa 3-5 mm syvyyteen verisuonistoalueella. Kuoren reikä peitetään liima-laastareilla tai vahataan.

3) Infektio keltuaisessa pussissa. Infektioon käytetään 5-8 päivän ikäisiä alkioita. Infektiovaihtoehtoja on kaksi:

a) neula työnnetään pujan sivulta keltuaispussiin 45°:n kulmassa alkion esityspaikkaan nähden ovoskoopin valvonnassa;

b) muna asetetaan telineeseen alkion esittelykohta alaspäin ja neula työnnetään ylhäältä alas alkiota kohti noin 1 cm:n syvyyteen.

Pistoskohta suljetaan teipillä ja parafinoidaan. 4) Infektio amnionontelossa. Tällä tartuntamenetelmällä virus voi tunkeutua ja lisääntyä erilaisissa soluissa, jotka ovat kosketuksissa lapsivesien kanssa. Infektion helpottamiseksi on suositeltavaa inkuboida alkioita 2-3 päivää ennen tartuntaa mopsi ylöspäin. Sitten alkio ja amnion liikkuvat ylöspäin ja tartuttaminen on helpompaa. Infektiovaihtoehtoja on kaksi:

a) Avaa ja leikkaa puga pois, poista pintakalvo pinseteillä ja tartu amnioniin, vedä vesivesi pinseteillä ylös ja syötä 0,1 ml:n annoksena materiaalia lapsivesionteloon. Kuoren reikä suljetaan sitten steriilillä lasikorkilla ja reunat vahataan;

b) infektio pitkällä neulalla pugan läpi pimeässä huoneessa silmän valvonnassa Neulan kärkeä taivutetaan ensin suorassa kulmassa pienen alueen muodostamiseksi. Neula työnnetään silmän hallinnassa esialkion ulkoneman läpi; tässä tapauksessa tylpän neulan paineen alaisena alkio liikkuu, sitten amnion lävistetään kevyellä painalluksella ja neula on hieman veti takaisin. Tässä tapauksessa alkion tulee liikkua ylöspäin neulan takana. Sitten materiaali esitellään.

5) Infektio alkion kehoon ja infektio aivoihin. Käytetään 7-12 päivän ikäisiä alkioita, infektio suoritetaan viemällä materiaalia kehon eri osiin tai suoraan aivoihin. Infektiota varten puga avataan ja alkio vedetään ylös pinseteillä. Näillä tartuntamenetelmillä jopa 30 % tai enemmän tartunnan saaneista alkioista voi kuolla vammoihin.

6) Infektio korioallantoisen kalvon suurissa verisuonissa. Tätä tartuntamenetelmää, kuten edellistä, käytetään erittäin harvoin. Materiaali ruiskutetaan ohuella neulalla sen jälkeen, kun kuori on poistettu verisuonia pitkin suoraan suoneen verenvirtausta pitkin.

Tartunnan jälkeen kanan alkiot on merkittävä yksinkertaisella kynällä ja asetettava termostaattiin. Niitä seurataan päivittäin katselemalla, havainnointia suoritetaan viruksen tyypistä riippuen jopa 7-8 päivää. Jos alkiot kuolevat, ne poistetaan välittömästi termostaatista ja laitetaan jääkaappiin avaamiseen asti. Jos alkio kuolee ensimmäisten 14-18 tunnin aikana, se voi johtua vauriosta tai patologisen materiaalin myrkyllisyydestä. Siksi, aivan kuten laboratorioeläimiä tartuttaessa, on epäilyttävissä tapauksissa suositeltavaa tehdä useita siirrostuksia ja ottaa useita alkioita jokaisesta materiaalista.

Kuolleiden tartunnan saaneiden tai tarkkailuajan päätyttyä poistettujen kanan alkioiden ruumiinavaus suoritetaan kaikkien aseptisten sääntöjen mukaisesti steriileissä nyrkkeilyolosuhteissa. Avattaessa kuori käsitellään alkoholilla ja poltetaan, sitten puga leikataan pois. Avautuneesta alkiosta imetään ensin varovasti allantoisneste (sen määrä on noin 7 ml), sitten amnionkalvo vedetään takaisin pinseteillä, lävistetään Pasteur-pipetillä ja imetään lapsivesi pois (sen määrä on 1,0- 1,5 ml), sitten keltuainen kerätään, kalvot poistetaan ja alkio. Neste, kalvot ja itse alkio tutkitaan huolellisesti muutosten varalta. Lapsivesi on yleensä täysin kirkasta, mutta tartunnan saaneena se voi olla sameaa ja veristä. Viruksen aiheuttamat tyypilliset muutokset näkyvät selkeimmin korioallantoiskalvolla: tulehduspesäkkeitä ilmaantuu, läpinäkymättömiä, pyöreitä ja verenvuotoa. Alkion kehossa voi esiintyä verenvuotoja. Kaikki materiaali kerätään steriileihin astioihin.

Kanan alkioita käytetään virologiassa laajalti paitsi virusten eristämiseen, myös antigeenien keräämiseen ja hankkimiseen, elävien ja tapettujen rokotteiden valmistukseen, virusten titraamiseen, viruksen neutralointireaktion kohdistamiseen, virusten heikentämiseen (heikennykseen), virusten häiriöiden tutkimiseen. viruksia ja interferonin saamista.

Valmistaja: opettaja Ugysheva Sh.E.

Dia 3

Virusten rakenne

Dia 4

Virusten rakenne A – yksinkertainen virus B – monimutkainen virus

Dia 5

Virukset jaetaan vaara-asteensa perusteella neljään ryhmään: Ryhmä I: Ebola-, Lassa-, Marburg-, Machupo-kuume-, isorokko- ja hepatiitti B -viruksen patogeenit (apinat). Ryhmä II: arbovirukset, jotkut arenavirukset, rabiesvirukset, ihmisen hepatiitti C- ja B-virukset, HIV. Ryhmä III - influenssavirukset, polio, enkefalomyokardiitti, vaccinia. Ryhmä IV - adenovirukset, koronavirukset, herpesvirukset, reovirukset, onkovirukset.

Dia 6

Dia 7

Virusten luokitteluperiaatteet Nukleiinihapon tyyppi, rakenne, replikaatiostrategia Koko, morfologia, virionin symmetria, kapsomeerien lukumäärä, superkapsidin läsnäolo. Spesifisten entsyymien läsnäolo, erityisesti RNA- ja DNA-POLYMERAASIT, neuraminidaasit Herkkyys fysikaalisille ja kemiallisille aineille, erityisesti eetterille Immunologiset ominaisuudet Luonnolliset välittymismekanismit Tropismi isäntään, sen kudoksiin ja soluihin Patologia, inkluusioiden muodostuminen Sairauksien oireet.

Dia 8

Virusten luokitus (RNA:ta sisältävät)

Dia 9

Virusten luokitus (DNA:ta sisältävät)

Dia 10

Virusten kemiallinen koostumus Viruksia ovat nukleiinihapot, proteiinit, lipidit, glykolipidit ja glykoproteiinit. Ne sisältävät aina yhden tyyppistä nukleiinihappoa (DNA tai RNA), joka muodostaa 1-40 % virionin massasta. Viruksen genomit sisältävät informaatiota, joka riittää vain muutaman proteiinin synteesiin. Niiden massa on 10-15 mg, mikä on miljoona kertaa pienempi kuin solujen, ja niiden pituus on jopa 0,093 mm Nukleotidiparien lukumäärä vaihtelee 3150:stä (hepatiitti B -virus) 230 000:een (variolavirus). Virusproteiinit (70-90 %) jaetaan rakenteellisiin ja ei-rakenteellisiin. Rakenteelliset - proteiinit, jotka ovat osa kypsiä solunulkoisia virioneja. Ne suorittavat useita tärkeitä tehtäviä: - suojaavat nukleiinihappoa ulkoisilta vaurioilta; ovat vuorovaikutuksessa herkkien solujen kalvojen kanssa; varmistavat viruksen tunkeutumisen soluun - niillä on RNA- ja DNA-polymeraasiaktiivisuutta jne. Ei-rakenneproteiinit ovat eivät ole osa kypsiä virioneja, vaan ne muodostuvat niiden lisääntymisen aikana. Ne: - säätelevät viruksen genomin ilmentymistä - ovat virusproteiinien esiasteita, jotka voivat tukahduttaa solujen biosynteesiä. Sijainnistaan ​​virionissa proteiinit jaetaan kapsideihin, superkapsideihin, matriisiin, ydinproteiineihin ja nukleiinihappoassosioituneisiin proteiineihin. Lipidit (15-35 %) sisältyvät monimutkaisiin viruksiin ja ovat osa superkapsidikuorta muodostaen sen kaksoislipidikerroksen. Ne: - stabiloivat viruksen vaippaa - suojaavat virionien sisäkerroksia ulkoisen ympäristön hydrofiilisiltä aineilta - osallistuvat virionien proteiininpoistoon.

Dia 11

Virusten lisääntyminen. Sen ominaisuudet ovat, että genomeja edustaa sekä RNA että DNA, ne ovat rakenteeltaan ja muodoltaan erilaisia, lähes kaikki virus-RNA:t kykenevät replikoitumaan solun DNA:sta riippumatta Viruksilla on luontainen disjunktiivinen lisääntymismenetelmä, joka koostuu se, että genomin ja virusproteiinien synteesi erotetaan toisistaan ​​tilassa ja ajassa: nukleiinihapot replikoituvat solun tumassa, proteiinit sytoplasmassa ja kokonaisten virionien kerääntyminen voi tapahtua sytoplasmisen kalvon sisäpinnalla. Viruksen lisääntyminen on ainutlaatuinen järjestelmä vieraan informaation uudelleenluomiseksi eukaryoottisoluissa ja varmistaa solurakenteiden ehdottoman alistumisen virusten tarpeisiin. Virusten lisääntymisessä on useita vaiheita. Varhaisia ​​ovat virusten adsorptio solun pinnalle, niiden tunkeutuminen (tunkeutuminen) soluun ja niiden riisuminen (proteiinin poisto). Myöhäisiin vaiheisiin (viruksen genomistrategia) kuuluvat viruksen nukleiinihapposynteesi, proteiinisynteesi, virionien kokoaminen ja viruspartikkelien vapautuminen solusta.

Dia 12

Virusten kiinnittyminen solun pintaan varmistetaan kahdella mekanismilla: epäspesifisellä ja spesifisellä. Epäspesifisen määrittävät sähköstaattisen vuorovaikutuksen voimat, joita esiintyy virusten pinnalla olevien kemiallisten ryhmien ja eri varauksia kantavien solujen välillä. Spesifisen mekanismin (käänteinen ja ei-reversiibeli adsorptio) määrittävät komplementaariset virus- ja solureseptorit. Ne voivat olla luonteeltaan proteiineja, hiilihydraatteja tai lipidejä. Esimerkiksi influenssavirusten reseptori on siaalihappo. Reseptoreiden määrä adsorptiokohdissa voi nousta 3000:een. Virusten pinnalla reseptorit sijaitsevat yleensä syvennysten ja rakojen pohjalla. Virusten tunkeutuminen soluun tapahtuu reseptorin endosytoosimekanismin (viropeksiksen muunnos) kautta solukalvojen erityisillä alueilla, jotka sisältävät erityisen suuren molekyylipainon omaavan lohkon - klatriinia. Kalvot tunkeutuvat sisään ja muodostuu klatriinilla päällystettyjä solunsisäisiä vakuoleja. niiden määrä voi olla 2000. Vakuolit yhdistyvät muodostaen reseptosomeja, ja jälkimmäiset sulautuvat lysosomeihin. Virusten pintaproteiinit ovat vuorovaikutuksessa lysosomien kalvojen kanssa ja niiden nukleoproteiini vapautuu sytoplasmaan. On kuitenkin olemassa toinen mekanismi virusten tunkeutumiselle soluun - kalvofuusion induktio. Se tapahtuu erityisen viruksen fuusioproteiinin (F- fuusio - fuusio) ansiosta. Tämän prosessin seurauksena viruksen lipoproteiinikuori integroituu solukalvoon ja sen genomi tunkeutuu soluun. Tällainen proteiini on tunnistettu influenssaviruksista, parainfluenssasta, rabdoviruksista jne.

Dia 13

Virionien riisuminen on monivaiheinen prosessi, jonka aikana niiden nukleiinilaitteisto vapautuu, genomin ilmentymistä estävät suojakuoret katoavat. Sitä esiintyy erikoistuneilla alueilla - lysosomeissa ja Golgin laitteessa. Lisääntymisen myöhemmät vaiheet tähtäävät viruksen nukleiinihappojen ja proteiinien synteesiin. Replikaation mekanismi (viruksen genomien muodostuminen, jotka ovat tarkka kopio edeltäjästä) riippuu nukleiinihapon ominaisuuksista. Se ei ole sama erityyppisille viruksille. Replikaatio RNA:ta sisältävissä viruksissa tapahtuu samanlaisten kaavojen mukaisesti. mRNA syntetisoituu emo-RNA:lle, ja RNA:n välimuodot toimivat templaattina virusgenomin synteesiä varten. Transkriptio on lähetti-RNA:n muodostumisprosessi. Se tapahtuu erityisten entsyymien avulla, joita kutsutaan DNA- tai RNA-riippuvaisiksi RNA-polymeraaseiksi. DNA-viruksilla nämä entsyymit ovat solualkuperää, kun taas RNA-viruksilla on omat virusspesifiset transkriptaasinsa. Translaatiovaiheessa geneettinen informaatio luetaan lähetti-RNA:sta ja käännetään aminohapposekvenssiksi. Prosessi tapahtuu ribosomeissa. RNA-molekyylit siirtyvät ribosomeihin triplettikoodisekvenssin mukaisesti, jonka siirto-RNA:t tunnistavat. Jälkimmäiset kuljettavat aminohappoja erityisalueilla.

Dia 14

Dia 15

Dia 16

Virusten viljely 6-12 päivän ikäiset kanan alkiot. Tartuntamenetelmät - avoin, suljettu

Dia 17

Virusten viljely Soluviljelmät: - ihmisen alkioiden, apinan munuaisten, kanan alkion fibroblastien jne. primääriset trypsiiniviljelmät; pystyvät kasvamaan useiden kulkureittien aikana toissijaisina viljelminä; siirrettävät solut; ne ovat soluviljelmiä, jotka ovat saavuttaneet rajattoman kasvun ja lisääntymisen kyvyn; Niitä saadaan kasvaimista tai normaaleista ihmisen tai eläinten kudoksista, joilla on muuttunut karyotyyppi. HeLa (kohdunkaulan syöpä) Hep-2 (ihmisen kurkunpääsyöpä), CV (ihmisen suun karsinooma), RD (ihmisen rabdomyosarkooma), RH (ihmisen alkion munuainen), Vero (vihreä apinan munuainen), SPEV (sian alkion munuainen), VNK- 32 (syyriahamsterin munuainen). Soluviljelyn diploidisolut; Ne ovat samantyyppisten solujen viljelmiä, niillä on diploidi kromosomisarja ja ne kestävät jopa 100 alaviljelmää laboratorio-olosuhteissa. Ne ovat kätevä malli virusten rokotevalmisteiden saamiseksi, koska ne ovat vapaita vieraiden virusten kontaminaatiosta, säilyttävät alkuperäisen karyotyypin siirrosten aikana eikä niillä ole onkogeenista aktiivisuutta. Useimmiten he käyttävät viljelylinjoja, jotka on saatu ihmisen alkion fibroblasteista (WI-38, MRC-5, MRC-9, IMR-90), lehmistä, sioista, lampaista ja vastaavista. Soluviljelmät säilytetään pakastettuina.

Dia 18

Soluviljelmien tai niiden kasvun tukemiseen käytettävät ravintoaineet voivat olla luonnollisia tai synteettisiä (keinotekoisia). Luonnolliset väliaineet - naudan veriseerumi, nesteet seroosionteloista, maidon hydrolyysituotteet, erilaiset hydrolysaatit (5 % hemohydrolysaatti, 0,5 % laktoalbumiinihydrolysaatti) tai kudosuutteet. Niiden kemiallinen koostumus auttaa luomaan olosuhteet, jotka ovat samanlaisia ​​kuin ihmiskehossa. Tällaisten välineiden merkittävä haittapuoli on niiden epästandardi luonne, koska ne muodostavien komponenttien laadullinen ja määrällinen koostumus voi vaihdella. Synteettisillä ravintoaineilla ei ole tätä haittaa, koska niiden kemiallinen koostumus on standardi, koska ne saadaan yhdistämällä erilaisia ​​suolaliuoksia (vitamiinit, aminohapot) keinotekoisissa olosuhteissa. Näitä yleisimmin käytettyjä liuoksia ovat alusta 199 (primaaristen trypsinoitujen ja jatkuvien soluviljelmien viljely), Eagle-elatusaine (sisältää vähimmäisjoukon aminohappoja ja vitamiineja ja käytetään diploidisten ja jatkuvien solulinjojen viljelyyn), EagleMEM-elatusaine (viljely) erityisen vaativista solulinjoista), Hanks-liuos, jota käytetään viljelyalustojen valmistukseen, solujen pesuun jne.

Dia 19

Dia 20

Dia 21

Koe-eläinten infektio. Lukuisia koe-eläimiä käytetään virologiassa laajasti virusten eristämiseen ja tunnistamiseen, spesifisten antiviraalisten seerumien saamiseksi, virustautien patogeneesin eri näkökohtien tutkimiseen, sairauksien torjuntamenetelmien kehittämiseen ja niiden ehkäisyyn. Yleisimmin käytettyjä ovat eri-ikäiset valkoiset hiiret (kahden päivän ikäiset), valkoiset rotat, marsut, kanit, goferit, puuvillahäntärotat, apinat ja muut.

Dia 22

Eläinten tartuttamiseen on useita tapoja riippuen virusten tropismista ja taudin kliinisestä kuvasta. Testimateriaali voidaan antaa: - suun kautta - hengitysteihin (hengitys, nenän kautta) - ihoon - ihonsisäisesti - ihonalaisesti, lihaksensisäisesti - suonensisäisesti - vatsaontelonsisäisesti - sydämensisäisesti - karheutuneeseen sarveiskalvoon - silmän etukammioon - aivoihin.

Dia 23

Dia 24

Dia 25

Dia 26

Bakteriofagit (faagit) (muinaisesta kreikasta φᾰγω - "syön") ovat viruksia, jotka infektoivat valikoivasti bakteerisoluja. Useimmiten bakteriofagit lisääntyvät bakteerien sisällä ja aiheuttavat niiden hajoamisen. Tyypillisesti bakteriofagi koostuu proteiinikuoresta ja yksi- tai kaksijuosteisen nukleiinihapon geneettisestä materiaalista (DNA tai harvemmin RNA). Partikkelikoko on noin 20-200 nm. Riippumatta Frederick Twortista, ranskalais-kanadalainen mikrobiologi D'Herelle, Felix raportoi bakteriofagien löytämisestä 3. syyskuuta 1917. Tämän lisäksi tiedetään, että venäläinen mikrobiologi Nikolai Fedorovich Gamaleya havaitsi vuonna 1898 ensimmäisen kerran bakteerien (pernaruttobacillus) hajoamisen ilmiön siirrettävän aineen vaikutuksen alaisena. Elinkaari Lauhkeilla ja virulentilla bakteriofageilla vuorovaikutuksen alkuvaiheessa bakteerisolun kanssa on sama sykli. Bakteriofagin adsorptio faagispesifisiin solureseptoreihin. Faaginukleiinihapon injektio isäntäsoluun. Faagin ja bakteerinukleiinihapon yhteisreplikaatio. Solunjako. Lisäksi bakteriofagi voi kehittyä kahden mallin mukaan: lysogeeninen tai lyyttinen reitti. Lauhkeat bakteriofagit solun jakautumisen jälkeen ovat profaagitilassa (lysogeeninen reitti). Virulentit bakteriofagit kehittyvät Lytic-mallin mukaan: Faagin nukleiinihappo ohjaa faagientsyymien synteesiä käyttämällä tähän bakteeriena. Faagi tavalla tai toisella inaktivoi isäntä-DNA:n ja RNA:n, ja faagientsyymit hajottavat sen kokonaan; Faagin RNA "alistaa" solulaitteiston proteiinisynteesiä varten. Faagin nukleiinihappo replikoi ja ohjaa uusien vaippaproteiinien synteesiä. Uusia faagipartikkeleita muodostuu faagin nukleiinihapon ympärillä olevan proteiinikuoren (kapsidien) spontaanin itsekokoamisen seurauksena; Lysotsyymi syntetisoidaan faagi-RNA:n ohjauksessa. Solujen hajoaminen: solu räjähtää lysotsyymin vaikutuksesta; noin 200-1000 uutta faagia vapautuu; faagit infektoivat muita bakteereja. 1 - pää, 2 - häntä, 3 - nukleiinihappo, 4 - kapsidi, 5 - "kaulus", 6 - hännän proteiinivaippa, 7 - hännän fibrilli, 8 - piikit, 9 - peruslevy

Dia 27

Kanaalkion infektio Kanaalkiota käytetään virusten ja mykoplasmojen viljelyyn. Alkioita käytetään 8-14 päivän iässä viruksen tyypistä ja tartuntatavasta riippuen; korioni-allantoiskalvoon, allantois- ja amniononteloon, keltuaispussiin. Ennen tartuntaa alkion elinkelpoisuus määritetään ovoskoopissa ja ilmapussin rajat merkitään lyijykynällä kuoreen. Kanaalkioiden infektointi suoritetaan laatikossa tiukasti aseptisissa olosuhteissa keittämällä steriloidulla instrumentilla. Ilmatilan yläpuolella oleva kuori pyyhitään alkoholilla, poltetaan liekissä, levitetään 2-prosenttisella jodiliuoksella, pyyhitään uudelleen alkoholilla ja poltetaan. Virusmateriaalia määränä 0,05 - 0,2 ml levitetään korioni-allantoiskalvolle tuberkuliiniruiskulla tai Pasteur-pipetillä. Alkiot leikataan 48 - 72 tunnin termostaatissa inkuboinnin jälkeen. Viruksen esiintyminen krolantoiskalvossa määritetään: 1. Erimuotoisilla valkeahtavilla läpinäkymättömillä täplillä; 2. Hemagglutinaatioreaktiossa.

Dia 28

Dia 29

Dia 30

Dia 31

Kiitos!!!

Näytä kaikki diat

Hyvää iltapäivää rakkaat lukijat! Tänään annamme kuvauksen, näytämme valokuvia ja videoita kanan kehityksestä munassa päivä päivältä inkuboinnin aikana kotona ja siipikarjatiloilla. Sitä harjoitetaan luottavaisesti sekä tehdasmittakaavassa että yksityisillä maatiloilla.

Mutta sen laajasta käytöstä huolimatta harvat ajattelevat geneettiselle tasolle ominaista monimutkaista mekanismia, joka varmistaa kanan kasvun ja kehityksen.

Edelleen ollaan sitä mieltä, että poikanen kasvaa keltuaisesta. Tässä artikkelissa opit kaikki salaisuudet, jotka ovat piilossa, ja myös millainen "kauhea" merkitys on piilotettu sanojen allantois kanassa ja amnionin alla ja mitä toimintoa ne suorittavat.

Kanan kehitys munassa päivän mukaan

Blastodisc

Poikasen kehitys alkaa blastodiskistä. Blasodisk on pieni sytoplasman hyytymä, joka sijaitsee keltuaisen pinnalla. Blastodikiven sijainnissa keltuaisen tiheys on paljon pienempi, mikä myötävaikuttaa keltuaisen jatkuvaan kellumiseen blastodiskin ollessa ylöspäin.

Tämä ominaisuus tarjoaa paremman lämmityksen inkuboinnin aikana. Hedelmöitetty blastodiskvi alkaa jakautua vielä kanan ruumiissa ja muniessaan se on jo kokonaan blastodermin ympäröimä. Blastolevy näyttää pieneltä, noin 2 mm kooltaan valkoiselta täplältä.

Renkaassa olevaa itulevyä ympäröivä valokehä on blastodermi.

Kun muna joutuu suotuisiin ympäristöolosuhteisiin ja pysähtyy munimisen jälkeen, solujen jakautuminen jatkuu.

Sinun pitäisi tietää: Vastoin yleistä käsitystä, että ovoskooppi voidaan suorittaa vasta kuudennesta inkubaatiopäivästä lähtien, blastoderman kehittyminen on selvästi havaittavissa 18-24 tunnin kuluttua inkubaation alkamisesta. Tässä vaiheessa on selvästi nähtävissä halkaisijaltaan 5–6 mm tummuma, joka liikkuu helposti munaa käännettäessä.

Inkubointipäivinä 2–3 väliaikaisten kalvojen kehittyminen alkaa:

1. Amnion kanassa
2. Allantois kanassa

Kaikki ne ovat itse asiassa väliaikaisia ​​elimiä, jotka on suunniteltu suorittamaan alkion elintärkeän toiminnan varmistamiseen asti sen lopulliseen muodostumiseen asti.

Amnion kanassa

Se on kuori, joka suojaa alkiota fyysisiltä vaikutuksilta ja kuivumiselta nestetäytteensä ansiosta. Poikasen amnion säätelee nesteen määrää alkion iän mukaan.

Lapsivesipussin epiteelipinta pystyy täyttämään onkalon alkion kanssa vedellä ja varmistaa myös nesteen ulosvirtauksen sen kasvaessa.

Allantois kanassa

Yksi väliaikaisista elimistä, joka suorittaa monia toimintoja:

• alkion toimittaminen hapella;
• eristää jätetuotteet alkiosta;
• osallistuu nesteiden ja ravinteiden kuljettamiseen;
• suorittaa kivennäisaineiden ja kalsiumin toimituksen kuoresta alkioon.

Poikasen allantois muodostaa kasvuprosessin aikana haarautuneen verisuoniverkoston, joka reunustaa koko munan sisäpintaa ja yhdistyy poikaseen napanuoran kautta.

Kana hengittää munassa

Kananmunan hapenvaihdolla on erilainen mekanismi kanan kehitysvaiheesta riippuen. Kehityksen alkuvaiheessa happi tulee keltuaisesta suoraan blastodermisoluihin.

Verenkiertojärjestelmän syntyessä happi pääsee vereen, edelleen keltuaisesta. Mutta keltuainen ei voi täysin varmistaa nopeasti kasvavan organismin hengitystä.

Kuudennesta päivästä alkaen hapen tuottava toiminto siirtyy vähitellen allantoisiin. Sen kasvu alkaa kohti munan ilmakammiota ja saavuttaessaan sen kattaa yhä suuremman kuoren sisäalueen. Mitä suuremmaksi poikanen kasvaa, sitä suuremman alueen allantois peittää.

Ovoskooppisena se näyttää punertavalta verkostolta, joka peittää koko munan ja sulkeutuu terävältä puoleltaan.

Kanan ravinto munassa

Kehityksen ensimmäisinä päivinä alkio käyttää proteiinin ja keltuaisen ravintoaineita. Koska keltuainen sisältää kokonaisen yhdistelmän mineraaleja, rasvoja ja hiilihydraatteja, se pystyy tarjoamaan kaikki kasvavan kehon alkutarpeet.

Allantoisin sulkeutumisen jälkeen (kehityspäivä 11) toiminnot jakautuvat uudelleen. Alkiosta tulee suurempi ja se asettuu munan pitkälle akselille, pää kohti tylppää päätä. Proteiini on tässä vaiheessa keskittynyt munan terävään päähän.

Kanan paino yhdistettynä allantoisin paineeseen varmistaa proteiinin siirtymisen ja sen tunkeutumisen amnionin läpi alkion suuhun. Tämä jatkuva prosessi varmistaa kananpoikasen nopean kasvun ja kehityksen munassa päivä päivältä inkuboinnin aikana.

13. päivästä alkaen allantois toimittaa kuoresta kivennäisaineita, joita kana käyttää jatkokehitykseen.

Sinun pitäisi tietää: Normaali kanan ravinto voidaan tarjota vain oikea-aikaisesti suljetulla allantoisilla. Jos munan terävä pää sisältää vielä suljettuna proteiinia, jota ei ole peitetty suonilla, kanalla ei ole tarpeeksi ravintoaineita jatkokasvuun.

Munan asento ja poikasen kehitys

Viime aikoina kananmunien haudonta pystyasennossa on yleistynyt. Mutta tällä menetelmällä ei ole parasta vaikutusta kanan kehitykseen.

Pystyasennossa suurin kallistus käännettäessä on 45°. Tämä kaltevuus ei riitä allantoisin normaaliin kasvuun ja sen oikea-aikaiseen sulkeutumiseen. Tämä pätee erityisesti suuriin muniin.

Vaaka-asennossa inkuboitaessa saadaan aikaan 180° kierto, millä on myönteinen vaikutus allantoiksen kasvuun ja sen seurauksena kanan ravintoon.

Pääsääntöisesti pystysuoraan munituilla munilla kuoritut pörröiset painavat 10 % vähemmän kuin vaakasuoraan munivilla munilla kuoritut.

Munan kääntämisen merkitys poikasen kehitykselle

Munien kääntäminen inkuboinnin aikana on välttämätöntä kaikissa kehitysvaiheissa ensimmäistä päivää ja kahta viimeistä päivää lukuun ottamatta. Ensimmäisenä päivänä tarvitaan blastodiskin intensiivistä lämmitystä, ja viimeisenä päivänä pieni vinkuminen on jo ottanut kuoren läpimurron asennon.

Kehityksen alkuvaiheessa munien kääntäminen eliminoi riskin, että blastodermi tai amnion tarttuu kuoren sisäpuolelle.

Kierto auttaa myös:

• amnionin vähentäminen;
• munien tasainen kuumennus;
• alkion oikean asennon ottaminen;
• kaasunvaihdon parantaminen;
• allantoiksen oikea-aikainen sulkeminen;
• parantaa sikiön ravintoa.

Nyt artikkelin lukemisen jälkeen voimme arvioida pienen kukon tai kanan kanssa tapahtuvien prosessien monimutkaisuuden sen kehittyessä useista soluista pieneksi linnuksi. Tämä prosessi ei ole yhtä monimutkainen kuin ihmislapsen tai esimerkiksi kissanpennun kehittyminen kohdussa, jossa jatkuvat olosuhteet taataan.

Poikasen kehitys munassa päivän aikana riippuu täysin ulkoisista olosuhteista, joiden tarjoaminen on haudonta.

Toivotamme kaikille onnistunutta keltaisten, harmaan ja muiden pörröisten kuoriutumista!

Tilaa sivuston päivitykset saadaksesi ensimmäisenä tiedon kanauutisista, jotka auttavat ratkaisemaan kaikki ongelmasi.

Tässä kuva vakituisesta lukijamme Yulia Areptevasta, kana kuoriutui alla!

Kommentteihin voit lisätä kuviasi munivista kanoista, kukoista ja poikasista! Tai muuta siipikarjaa. Olemme uteliaita, millainen kanakoti sinulla on?
Piditkö artikkelista? Jaa ystävien kanssa sosiaalisessa mediassa:

Liity meihin VKontakteen, lue kanoista!

Monet virukset, jotka tartuttavat ihmisiä ja eläimiä, voivat lisääntyä suuremmassa tai pienemmässä määrin poikasen alkiossa. Tiheän kuoren läsnäolo suojaa alkiota ulkoisen ympäristön mikro-organismeilta.

Kanaalkioiden virusviljelymenetelmää käytetään virusinfektioiden laboratoriodiagnoosissa sekä virusrokotteiden ja diagnostisten lääkkeiden valmistuksessa. Mutta tällä menetelmällä on haittoja: 1) on mahdotonta havaita dynamiikassa patologisia muutoksia, jotka tapahtuvat alkiossa virustartunnan jälkeen; 2) viruksen saastuttamaa alkiota avattaessa ei usein havaita näkyviä muutoksia ja on tarpeen havaita viruksen esiintyminen alkion kudoksissa ja nesteissä muilla virologisilla menetelmillä (esimerkiksi hemagglutinaatioreaktio); 3) viljelymenetelmä kanan alkioissa ei sovellu kaikille viruksille. Nykyisistä haitoista huolimatta menetelmä on suhteellisen yksinkertainen, kätevä ja halpa, ja sitä käytetään laajalti virologisissa tutkimuksissa. Se on tärkeintä työskenneltäessä ortomyksovirusten, herpesvirusten ja poxvirusten kanssa.

1.3.1. Kanaalkion rakenne

Kanan alkio on peitetty kalkkipitoisella kuorella - kuorella, jonka kuorikalvo on sisäpuolelta vieressä. Munan tylppässä päässä se haarautuu ja sisältää ilmatilan. Kuorikalvon alla on korioallantoinen kalvo, munan tylppässä päässä se kulkee kuorikalvon sisäpuolta pitkin sulkeen ilmatilan; tämä kalvo on runsaasti verisuonia ja toimii alkion hengityselimenä. Sen vieressä on sisäpuolelta allantoisontelo, joka on erityselin ja suojaa alkiota kuivumiselta ja vaurioilta. Allantoisontelo ympäröi amnionontelossa sijaitsevaa alkiota, joka on täytetty lapsivedellä. Keltuaisen narun kautta alkio on yhteydessä keltainen pussiin, joka on tärkein ravintoaineiden lähde.

Virusten onnistunut viljely kehittyvien kananalkioiden kehossa edellyttää tiettyä lämpötilajärjestelmää (36 0 - 38 0), kosteutta (50-70%) sekä riittävää ilmanvaihtoa. Tietyn ikäiset kanan alkiot infektoidaan ja niitä inkuboidaan 6-13 päivää viruksen tyypistä ja tartuntatavasta riippuen. On tarpeen valmistaa: munateline, alkoholi- ja jodipullot, koeputki steriilillä parafiinilla, kansilasit, pussit steriiliä puuvillaa ja sideharsoa, steriilit säiliöt paperiin käärittyinä, steriilit ruiskut, neulat, pinsetit, leikkausneulat. Instrumentit asetetaan alkoholilasiin, jossa ne pysyvät koko työn ajan; ennen jokaista käsittelyä ne lisäksi steriloidaan polttamalla polttimen liekissä. Kädet pestään perusteellisesti ennen työtä, on suositeltavaa käyttää sideharsoa.

Elinkykyiset alkiot valitaan työhön tutkimalla haudottuja munia ovoskoopissa. Elinkykyinen alkio on liikkuva, kalvon verisuonet ovat täynnä verta. Valitut munat desinfioidaan perusteellisesti tylpästä päästä (tai munan kyljestä): kuori pyyhitään alkoholilla, voidellaan jodilla, käsitellään uudelleen alkoholilla ja poltetaan.

1.3.2. Kanan alkion infektio korioallantoiskalvolla

Infektioon käytetään 10-12 päivän ikäisiä kanan alkioita. Infektion päävaiheet:

1. Kananmuna asetetaan telineelle pystyasentoon siten, että turvatyyny on ylhäällä ja kuori steriloidaan munan tylpästä päästä.

2. Kuoren puhkaisu tehdään ilmapussin keskikohdan yläpuolelle leikkausneulalla.

3. Saksien leuka työnnetään tuloksena olevaan reikään ja kuoreen leikataan halkaisijaltaan noin 1,5 cm ikkuna.

4. Revi kuoren sisälehti varovasti neulalla reiän läpi ja irrota se pieneltä alueelta (0,5-1 cm 2).

5. Korioallantoiskalvo infektoidaan levittämällä siihen 0,1-0,2 ml virusta sisältävää materiaalia Pasteur-pipetillä tai -ruiskulla.

6. Kuoren ikkuna peitetään erityisellä elastisella kalvolla tai steriilillä peitelasilla ja kiinnitetään sulalla parafiinilla.

Tartunnan saaneet alkiot asetetaan termostaattiin pystyasentoon ja niitä inkuboidaan 2-3 päivää, minkä jälkeen suoritetaan ruumiinavaus seuraavien sääntöjen mukaisesti:

1. Kananmuna asetetaan telineeseen siten, että ilmatila jää yläpuolelle, ja avauskohta steriloidaan.

2. Leikkaa kuori ilmatilan reunaa pitkin steriileillä saksilla.

3. Poista kuori pinseteillä reunaa pitkin. Paljas korioallantoinen kalvo on leikattu kuoren reunaa pitkin. Kaada syntyneen reiän kautta koko munan sisältö kuppiin tai tarjottimeen.

4. Kuoren sisälle jäänyt korioallantoinen kalvo poistetaan varovasti pinseteillä ja asetetaan steriiliin kuppiin, jossa on suolaliuosta. Täällä he suoristavat sen ja tutkivat muutoksia asettamalla kupin tummalle taustalle.

Virusta sisältävän materiaalin saamiseksi korioallantoiskalvosta se on murskattava saksilla ja jauhettava sitten huhmareessa kvartsilasilla lisäämällä suolaliuosta. Saatua suspensiota sentrifugoidaan nopeudella 2000 rpm 10-15 minuuttia ja supernatanttia käytetään virusta sisältävänä materiaalina.

Riisi. 3. Kanan alkioiden infektio

1.3.3. Infektio allantoisontelossa

Tartunnan vuoksi otetaan 10-11 päivän ikäisiä alkioita. Infektion päävaiheet:

1. Muna asetetaan telineeseen tylppä pää ylöspäin ja kuori steriloidaan ilmatilan päällä.

2. Kuoren puhkaisu tehdään tylpän pään keskelle leikkuuneulalla.

3. Viruslaimennusta sisältävän ruiskun neula työnnetään reikään. Neula työnnetään pystysuunnassa 2-3 mm ilmapussin tason alapuolelle ja sitten ruiskutetaan 0,1-0,2 ml materiaalia.

4. Kuoren reikä suljetaan sulatetulla steriilillä parafiinilla.

Tartunnan saaneita alkioita säilytetään termostaatissa yleensä 2 päivää. Ennen avaamista munat laitetaan yön yli jääkaappiin 4 0 C:een. Avaaminen tapahtuu seuraavassa järjestyksessä:

1. Kananmuna asetetaan telineeseen siten, että ilmatyyny on ylhäällä, sen yläpuolella oleva kuori steriloidaan.

2. Kuori leikataan saksilla hieman ilmatilan rajan yläpuolelta.

3. Poista kuorikalvo varovasti pinseteillä, minkä jälkeen korioallantoiskalvo lävistetään Pasteur-pipetillä kohdasta, jossa ei ole suonia, ja imetään allantoisneste sisään.

4. Allantoisneste siirretään steriiliin koeputkeen ja osa siitä siirrostetaan liemeen bakteriologisen steriiliyden testaamiseksi.